克隆基因的表达（expressionofclonedgene）1
基因表达(gene expression)是指储存遗传信息的基因经过一系列步骤表现出其生物功能的整个过程。典型的基因表达是基因经过转录、翻译，产生有生物活性的蛋白质的过程。基因的表达主要涉及到两个过程：转录和翻译。 第一节影响外源基因表达的因素 利用基因工程技术高水平表达各种外源蛋白质，无论在理论研究还是实际应用上都是十分重要的。因此，如何使外源基因在宿主细胞中高效表达，成为基因工程中的关键问题。应该指出，现在基因工程所涉及的受体细胞多种多样，从细菌到高等动植物细胞，乃至动、植物个体；而所涉及到的基因也是成千上万，各不相同，这种差别使得对特定基因的表达研究就有其特定的个性。影响外源基因高效表达的各种因素： 1. 外源基因的表达效率 ①启动子的强弱。有效的转录起始是外源基因能否在宿主细胞中高效表达的关键步骤之一，也可以说，转录起始的速率是基因表达的主要限速步骤。因此，选择强......阅读全文
小鼠β-actin基因的克隆表达（2）
实验步骤： （1）目的基因与表达载体的连接反应： ①表达载体和目的片段的酶切 管号 ① ② pGEX 4T-1
原核表达之目的基因克隆
1. 了解实验课题对目的蛋白的要求包括：目的蛋白分子量有多大，表达目的（是蛋白结晶、药剂结合还是制备抗体，不同目的对蛋白要求不同）；是否要其可溶；是胞内表达还是分泌表达，是组成型表达还是诱导型表达；另外，还要了解蛋白表达后需要采用什么样的方式进行纯化，纯化标签有多大，蛋白纯化后是否需要将标签去除（即
小鼠β-actin基因的克隆表达（4）
实验步骤：（1）诱导靶蛋白表达分别挑取对照菌和重组菌1~2个菌落，接入5ml含Amp（30μg/ml）的LB培养液，37℃振荡培养过夜。取5ml过夜培养物接入500ml含Amp（30μg/ml）的LB培养液，37℃振荡培养2h以上，至对数中期（A550=0.5~1.0）。向诱导管中加入IPTG使其浓
小鼠β-actin基因的克隆表达（1）
动物组织RNA的提取实验目的：掌握由动物组织中提取总RNA的方法实验原理：Trizol试剂是一个包含酚、异硫氰酸胍和SDS的单相酸性溶液，其在裂解细胞的同时抑制RNase的活性，随后加入氯仿，酚会大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同，造成DNA分布在下层的氯仿酚溶液中，RNA
原核表达——基因克隆技术
原核表达可以用于检测（1）发生在原核生物内的基因表达。（2）通过基因克隆技术，将外源目的基因，通过构建表达载体并导入表达菌株的方法，使其在特定原核生物或细胞内表达。实验方法原理一个完整的表达系统通常包括配套的表达载体和表达菌株。如果是特殊的诱导表达还包括诱导剂，如果是融合表达还包括纯化系统或者Tag
小鼠β-actin基因的克隆表达（3）
（2）质粒的提取及酶切鉴定分析 质粒的提取按照质粒提取试剂盒的操作步骤进行，然后进行双酶切鉴定。 管号 ① ② 质粒DNA
表达基因的克隆策略与分离表达基因序列的技术方法
人类基因组计划的主要任务之一就是要从大片段基因组区域或整条染色体DNA 上鉴定出基因表达序列(gene expressed sequences)或转录单位(transcription units)。在人类基因组30亿个碱基对中，发生转录的表达序列(即基因)仅占总序列的3～5％。基因组中绝大部
克隆基因的表达（expression of cloned gene）-3
（3）原核生物的基因组基本上是单倍体，而真核基因组是二倍体。（4）如前所述，细菌多数基因按功能相关成串排列，组成操纵元的基因表达调控的单元，共同开启或关闭，转录出多顺反子(polycistron)的mRNA；真核生物则是一个结构基因转录生成一条mRNA，即mRNA是单顺反子(monocistron)
克隆基因的表达（expression of cloned gene）-2
在双链 DNA 分子中，只有一条链转录成 mRNA，这条链称为有意义链(sense strand)，该基因的另一条链则称反意义链(antisense strand)。在含有许多基因的 DNA 双链中，每个基因的有意义链并不是在同一条 DNA 链上。也就是说，一条链上既具有某些基因的有意义链，
克隆基因的表达（expression of cloned gene）-1
基因表达(gene expression)是指储存遗传信息的基因经过一系列步骤表现出其生物功能的整个过程。典型的基因表达是基因经过转录、翻译，产生有生物活性的蛋白质的过程。基因的表达主要涉及到两个过程：转录和翻译。 第一节影响外源基因表达的因素 利用基因工程技术高水平表达