菌液PCR的经验
此方法可能很多师兄师姐们都在用，只是当时的确没有找到相关的详细说明，学弟再次把自己摸索出来的一点心得写出来，高手就多多指正，没做过的就相互学习下，见笑）由于课题组所需，我需要构建数量可观的真核表达载体和融合载体起初我也查到相关菌落PCR 的文献 ，和导师商量，导师一口回绝了他的理由和我所搜集到的理由一样：假阳性我们实验 室一博士师姐需要做一个真核表达载体挑选了60 个菌落，运用目的基因 的上下游引物 做PCR，出来条带的有有52个按照经验选取比较亮的14 个提取质粒，酶切和PCR双鉴定结果仅有一个为阳性克隆，其余均为假阳性（假阳性主要考虑来源于未与载体结合的插入片段 ）也难怪老板一口回绝只是我需要做的基因太多，最凶猛的时候我一个星期要用两个200次的TianGen的质粒小提，累死人不偿命后来我自己对着图谱研究 了一下（我所使用的是pCDNA 3.0载体、pCDNA3.1 myc his C载体和pE......阅读全文
菌液PCR的经验
此方法可能很多师兄师姐们都在用，只是当时的确没有找到相关的详细说明，学弟再次把自己摸索出来的一点心得写出来，高手就多多指正，没做过的就相互学习下，见笑）由于课题组所需，我需要构建数量可观的真核表达载体和融合载体起初我也查到相关菌落PCR 的文献 ，和导师商量，导师一口回绝了他的理由和我所搜集到的理由
普通菌液pcr的20微升体系怎么配
100uL体系：水 85uL ，10*buffer 10uL ，F引物 1uL ，R引物 1uL ，dNTP 1uL ，模板 1uL ，rTaq酶 1uL。按这个100uL体系配成20uL体系就行。
RTPCR经验浅谈
RT-PCR成败的关键首先在于RNA模板的制备以问者的口气应该是做RNA病毒基因的RT-PCR本人三年前做过一个正链RNA病毒全基因组分段扩增设计方案是将全基因组分成7个片段，0.6kb-3.3kb不等分别进行RT-PCR扩增刚开始的三个月我们课题组三个人辛辛苦苦什么招都想过了结果连一个片段都没有拿
PCR经验总结（一）
(首先声明，此文不如分子克隆第三版权威与分子克隆相背处，请信分子克隆)增加PCR的特异性1. primers design 这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的一些条件a 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同
PCR经验总结（二）
5. touchdown PCR 原理很简单,但的确是一个很有用的方法。举个例子就OK, ANNEALING TEMP. 55度94 5min 94 30s 60 30s 72 1min 2cycles 94 30s 59 30s 72 1min 2cycles 94
RTPCR经验浅谈
做RNA病毒基因的RT-PCR成败的关键首先在于RNA模板的制备。本人三年前做过一个正链RNA病毒全基因组分段扩增，设计方案是将全基因组分成7个片段，0.6kb-3.3kb不等，分别进行RT-PCR扩增，刚开始的三个月，我们课题组三个人辛辛苦苦，什么招都想过了，结果连一个片段都没有拿到。后来有一个周
菌液PCR有目的条带的位置，但是质粒PCR后却没有
如果PCR系统没有问题，很可能是质粒和染色体发生了重组。建议提细菌的genomeDNA做一次PCR。如果是阳性，就说明是这样。另外，还可以另挑几个菌落，重新提质粒扩增。
RtPCR经验总结
Rt-PCR实验步骤一、实验器具与材料：1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，
从RNA的提取到PCR——Realtime－PCR经验
一 引物的设计引物的设计对于这个实验至关重要，因为real time pcr的检测灵敏度比较高，所以相应的对引物设计的要求就很高。普通的要求规则大家都知道，还有几点必须注意：1，引物的错配率（引物错配形成引物二聚体，但是SYBR照样能嵌入进去，结果导致实验结果的误差很大，重复性也不好）。2，引物的特
RTPCR的操做经验分享
在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所
RTPCR－经验之我谈
看到论坛上有很多朋友询问RT-PCR的重复性问题，说明这里面还是有很多问题的，于是 想跟大家分享一下自己做PCR的经验：1. 总RNA的提取： 材料来源一般为细胞和组织，细胞相对比较单一，蛋白污染较小，TRIZOL法提取结果 A260/A280 结果一般都在1.8-2.1之间；组织的成分较复杂，污染
细胞RTPCR的经验(偏向RNA提取)
做RT也做了几次,有成功也有失败,在园子中受益良多,把我自已的一个流程放上来,供大家参考.细胞RT-PCR操作流程实验流程一 、取RNA：1、 处理细胞：（1） 贴壁细胞：先用无菌DEPC水配制的PBS洗细胞两次，弃尽PBS后，直接向培养瓶中加入1ml Trizol，通过溶解细胞，通过移液管分次移出
GN增菌液
成分 胰蛋白胨 20g 葡萄糖 1g 甘露醇 2g 柠檬酸钠 5g 去氧胆酸钠 0.5g 磷酸氢二钾 4g 磷酸二氢钾 1.5g 氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL pH7.0制法 按上述成分配好，加热使溶解，校正pH。分装每瓶225mL，
关于全血的保存DNA提取pcr个人经验
做了好多DNA提取保存，吃了很多亏给大家点建议吧：（有疑问可以回帖，有时间我会回答如果我知道）。 血液保存： EDTA抗凝最好，肝素也可以不过经常会影响后续试验，一般可以保存在-20和-80保存3-5年没有问题——保存时间越长似乎dna提取越少，再长时间我也没有试过，注意解冻一次大概损失20%左右（
em菌液如何自制
em菌种培育菌液的方法挺简单的，就是加水加红糖密封发酵就可以了 下面我为您详细做下培育方法介绍益富源EM活性液制作方法：[原料准备]①至少可以容纳10公斤水的容器（最好是可以密封的朔料桶）.②红糖0.5公斤.③10公斤无菌干净的水(深井水、凉开水、或者放置24小时的自来水).④益富源发酵床专用菌种1
EM菌种配制菌液的方法
⒈先烧开5公斤的水，加5%的红糖，把红糖汤开，把红糖里面的有害菌消除。⒉温度在不高于40度的情况下加1瓶菌种（10克）⒊然后把5公斤的菌水整体装进一个大塑料壶或者其他的容器中，要密封发酵，不能漏气。不要装的太满，在发酵过程中会产生气体，装满容易涨破塑料壶。⒋发酵10天左右，温度低要多发酵几天，打开瓶
qPCR（RTPCR）数据相对定量的分析方法与经验
qPCR的数据相对定量分析其实很简单。我做了很多的qPCR实验，也看了很多的资料，包括Nature protocol， AB官方的分析教程，MIQE，甚至包括一些商业化软件使用的教程及教程里面记述的原理。我在这里跟大家分享一下自己的经验，最常用，最普遍的相对定量方法就是2^-△△Ct法，该法最最简单
煌绿肉汤增菌液
成分 肉浸液肉汤(或牛肉膏汤) 1000mL 磷酸氢二钾 1g 2%煌绿溶液 0.5～10mL制法 1 将肉浸液肉汤加入磷酸氢二钾(原已有磷酸氢二钾者可不加)，校正pH，分装烧瓶，每瓶100mL，121℃高压灭菌20min。 2 2%煌绿水溶液于临
如何用甘油保存菌液？
20%甘油保存菌种是指甘油:菌液=20:80,800ul菌液加200u灭菌l甘油后的甘油后,充分混匀后,-70度保藏.(注意甘油要慢慢吸)
煌绿肉汤增菌液的制备
成分： 肉浸液肉汤(或牛肉膏汤) 1000mL 磷酸氢二钾 1g 2%煌绿溶液 0.5～10mL 制法： 1 将肉浸液肉汤加入磷酸氢二钾(原已有磷酸氢二钾者可不加)，校正pH，分装烧瓶，每瓶100mL， 121℃高
总结几点关于PCR仪的应用经验,附保养注意事项
简单的说，PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前，常用的技术，可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准，可以将PCR仪分为普通PCR仪，梯度PCR仪，原位PCR仪，实时荧光
关于qPCR（RTPCR）数据相对定量的分析方法与经验
qPCR的数据相对定量分析其实很简单。我做了很多的qPCR实验，也看了很多的资料，包括Nature protocol， AB官方的分析教程，MIQE，甚至包括一些商业化软件使用的教程及教程里面记述的原理。我在这里跟大家分享一下自己的经验，最常用，最普遍的相对定量方法就是2^-△△Ct法，该法最最简单
把菌种培养成菌液的处理方法
⒈光合菌群： EM菌液中的光合菌群（好氧性和厌氧性）属于独立营养微生物，它能利用土壤接受太阳热能或以紫外线为能源，将土壤中的硫化氢和碳氢化合物中的氢分离出来，变有害物质为无害物质，并以植物根部的分泌物、有机物、有害气体（硫化氢等）及二氧化碳、氮等为基质，合成糖类、氨基酸、维生素类、氮素化合物和生
氯化钠结晶紫增菌液
成分 蛋白胨 20g 氯化钠 40g 0.01%结晶紫溶液 5mL 蒸馏水 1000mL pH9.0 制法 除结晶紫外，其他按上述成分配好，加热溶解。约加30%氢氧化钾溶液4.5mL，校正pH。加热煮沸， 过滤。再加
亚硒酸盐煌绿增菌液
成分 蛋白胨 5g 酵母浸膏 5g 甘露醇 5g 牛磺胆酸钠 1g 20%亚硒酸氢钠溶液 20mL 0.25mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0) 100mL 2%煌绿溶液 0
亚硒酸盐煌绿增菌液
成分： 蛋白胨 5g 酵母浸膏 5g 甘露醇 5g 牛磺胆酸钠 1g 20%亚硒酸氢钠溶液 20mL 0.25mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0) 10
知道菌液OD值怎么算浓度
没有公式，你多做几组已知浓度短芽孢杆菌的OD值，做成标准曲线，就可以知道未知浓度的的芽孢杆菌的浓度了
知道菌液OD值怎么算浓度
没有公式，你多做几组已知浓度短芽孢杆菌的OD值，做成标准曲线，就可以知道未知浓度的的芽孢杆菌的浓度了
霉菌液体培养基配方
中文名霉菌液体培养基配方 英文名Mold Liquid Medium用途霉菌液体培养基用于霉菌、酵母的增菌和培养。标准配方（g/L) 胨 5g 葡萄糖 10g 磷酸二氢钾 1g 硫酸镁 0.5g 氯霉素 0.1g 最终pH 5.6±0.2原理胨提供碳源和氮源;酵母膏粉提供B族维生素;
知道菌液OD值怎么算浓度
测定菌液浓度常用的有以下三种方法：1、平板培养计数可以求出活菌数； 将菌液稀释一定浓度，吸100ul菌液涂布于平皿，做菌落技术，然后计算确切数目！2、细胞比较大的可以用血球技术板在显微镜下直接计数；3、比浊法测定细菌的生长，需要