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RTPCR经验浅谈

RT-PCR成败的关键首先在于RNA模板的制备以问者的口气应该是做RNA病毒基因的RT-PCR本人三年前做过一个正链RNA病毒全基因组分段扩增设计方案是将全基因组分成7个片段,0.6kb-3.3kb不等分别进行RT-PCR扩增刚开始的三个月我们课题组三个人辛辛苦苦什么招都想过了结果连一个片段都没有拿到后来有一个周末我一个人安安静静做了一天PCR跑胶的结果足以让我兴奋一个月:一下子隐隐约约出了3个片段!!!紧接着把胶里的弱带切下水溶并后做二次扩增很快,三个预期的片段都得到了理想的扩增后来大家也可以想象不到一个月12kb的全基因组各片段全部收归囊下小声地告诉各位我这次成功的关键在于提取RNA时,收集沉淀这一步离心速度不要低于13000rpm(r=5cm)提高离心速度、延长离心时间在离心前的沉淀也尽可能在低温下长时间进行这些时我本人总结出来的经验在后来的实验中几乎每次RT-PCR都非常顺利除了材料本身就没有目标基因BTW:我甚至还不知......阅读全文

HIV检验技术的研究进展

【关键词】  人类免疫缺陷病毒;聚合酶链反应;抗原  [摘要] 艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的一种严重威胁人类身体健康的疾病。为有效遏止HIV的蔓延,除寻求更加有效的疫苗和治疗药物外,HIV早期诊断十分重要,其早期诊断主要靠实验诊断,包括病原学、免疫学、分子生物学等。  [

反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)诊断禽流感

近年来发展的RTPCR分子诊断技术具有高度的敏感性和特异性,可大大缩短对AIV病毒的检出时间,克服了传统的禽流感诊断技术的缺点,为禽流感早期快速诊断提供子敏感、快速、实用的方法。1986年,Perdue用聚合酶链反应(PCR)诊断禽流感,从接种鸡胚到出结果仅用时36h。赵建梅等在传统一步法RT-PC

即肠道病毒型PCR试剂盒使用说明书

产品名称:即肠道病毒型PCR试剂盒英文名称:Enteric Virus72(EV72,HAV)72RTPCR产品编号:CP912798产品类别:PCR检测试剂盒产品规格:50T产品运输:低温运输产品保存:-20℃保存产品有效期:一年产品特点:本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂

罗斯肉瘤病毒PCR检测试剂盒使用说明书

产品名称:罗斯肉瘤病毒PCR检测试剂盒英文名称:Rous′ Sarcoma Virus(RSV)RTPCR技术特点:1.罗斯肉瘤病毒PCR检测试剂盒在哪里有卖准确可靠,临床双盲对照试验>1000例,结果与金标准测序法比对,结果*性大于99%。2.高灵敏:可检测低至10ng的人基因组DNA。3.快速:

反向PCR

主要内容如下:·         RT-PCR·         Competitive and Quantative

MAGNA 96核酸提取操作流程

  简介  目的:本文用于实时逆转录-聚合酶链反应(real-time RTPCR, rRT-PCR)试剂盒体外定性检测呼吸道和血清标本中2019新型冠状病毒(2019-nCoV)。针对2019新型冠状病毒设计引物和探针组合,用于SARS样冠状病毒的通用检测和2019新型冠状病毒的特异检测。  方案

PCR-SSCP、 RTPCR-SSCP 区别

仅仅是扩增的方法不同而已,一个是普通的PCR,一个是RTPCR.如果需要鉴定染色体的DNA序列有无差别或基因突变,可以用PCR-SSCP,我曾做过这方面的实验,检测病人有无基因的点突变,同时扩增病人和正常人的基因片段,然后做sscp,只要有一个核苷酸的区别,变性SDS-PAGE后,条带就会有很大的区

美国CDC:rRT-PCR检测2019新型冠状病毒操作说明

简介  目的:本文用于实时逆转录-聚合酶链反应(real-time RTPCR, rRT-PCR)试剂盒体外定性检测呼吸道和血清标本中2019新型冠状病毒(2019-nCoV)。针对2019新型冠状病毒设计引物和探针组合,用于SARS样冠状病毒的通用检测和2019新型冠状病毒的特异检测。  方案应用

呼吸道感染快速床旁诊断的进展和前景

2014   年   11月,Lancet Infect Dis上发表了“新出现的呼吸道感染”系列文章,共5   篇,其中第4篇主要描述了现有的呼吸道感染病毒和细菌病原体的诊断试验,以及有望提高床旁快速诊断质量、速度和可操作性的技术发展。现

液相芯片技术的原理与应用进展

   液相芯片,也称为微球体悬浮芯片(suspension array,liquid chip),是基于xMAP(flexible Multi Analyte Profiling)技术的新型生物芯片技术平台,它是在不同荧光编码的微球上进行抗原 抗体、酶 底物、配体 受体的结合

Semi-Quantitative RTPCR

The RT-PCR method can be used not only to detect specific mRNAs but also to semi-quantitate their levels. Thus, one can compare levels of transcripts

梅毒常见实验室诊断方法及其进展

摘要 近年来梅毒的发病率有逐年增加的趋势、研究新的快速、价廉、简便、敏感且特异的诊断方法是当前主要研究热点,而设计新试剂盒的关键在于,对现有试剂盒优、缺点的认识和改良,利用人工合成梅毒螺旋体原设计出新的检测方法。对梅毒螺旋体抗原的分析及人工合成,国外早在1989年就已开始进行,几年来发展迅

药物作用靶点筛选与基因敲除技术的关系

  2018年一对双胞胎婴儿的CCR5基因敲除的事件在社会上引起了轩然大波,抛开这次事件而言,作为一项生物研究技术,基因敲除在药物研发领域应用也很广泛,今天我们来看一下它在药物作用靶点筛选上的作用吧!   通过药物作用的靶点来设计开发创新药物是目前创新药制剂开发的一条重要线索,每年都会有作用于新靶

PCR-SSCP、 RTPCR-SSCP 区别

仅仅是扩增的方法不同而已,一个是普通的PCR,一个是RTPCR.如果需要鉴定染色体的DNA序列有无差别或基因突变,可以用PCR-SSCP,我曾做过这方面的实验,检测病人有无基因的点突变,同时扩增病人和正常人的基因片段,然后做sscp,只要有一个核苷酸的区别,变性SDS-PAGE后,条带就会有很大的区

药物作用靶点筛选与基因敲除技术的关系

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