RTPCR经验之我谈
看到论坛上有很多朋友询问RT-PCR的重复性问题，说明这里面还是有很多问题的，于是 想跟大家分享一下自己做PCR的经验：1. 总RNA的提取： 材料来源一般为细胞和组织，细胞相对比较单一，蛋白污染较小，TRIZOL法提取结果 A260/A280 结果一般都在1.8-2.1之间；组织的成分较复杂，污染多，提取较纯的RNA有一定难度, 我觉得以下地方需注意：1）最好新鲜取材，不能马上做的标本可以-70度保存，短时间内也不会有什么影响。2）研磨的手法一定要正确，如果不能彻底把组织研碎（肉眼观看无颗粒），很可能会影响你RNA的浓度，50-100mg的组织提取的RNA用20ul水稀释后应该有2-4ug/ul 的浓度，当然最好在冰上研磨，这样可以防止RNA的降解，但是我在常温下做，好像浓度也不差。3）加氯坊离心后上清不能吸太多，宁缺勿滥，一般吸上清的1/2,最好不超过2/3 ，我一般吸200-300ul 觉得就可以了。其实RT-PCR对RN......阅读全文
RTPCR－经验之我谈
看到论坛上有很多朋友询问RT-PCR的重复性问题，说明这里面还是有很多问题的，于是 想跟大家分享一下自己做PCR的经验：1. 总RNA的提取： 材料来源一般为细胞和组织，细胞相对比较单一，蛋白污染较小，TRIZOL法提取结果 A260/A280 结果一般都在1.8-2.1之间；组织的成分较复杂，污染
做血常规半年之个人经验谈（一）
终于再一次鼓起勇气谈经验,检验版的高手总习惯潜水.作为一个后辈,在此谈自己的经验,谈自己对检验的浅薄认识,或多或少有些买弄的味道,显露出自己不谦虚的一面.好了,废话少说,买弄正式开始,先谈一下我们的工作情况:仪器是SE9500，全自动的,每天上午120个左右,最多180个,全部我一个人做,还要每天下
做血常规半年之个人经验谈（二）
事情太多了，再说就有点卖弄的味道了，还是谈谈自己对检验的看法。1，检验最重要的是要灵活。检验的基础是准，做不准，我们就没有与临床对话的资本，做得不准，谈什么都没有意义了，但是大家不要始终在一个准字上下工夫，检验的核心应该是活，灵活。这个社会什么都要活，用时髦点的语言来讲，就是不要照抄照搬，不要教条主
RTPCR经验浅谈
做RNA病毒基因的RT-PCR成败的关键首先在于RNA模板的制备。本人三年前做过一个正链RNA病毒全基因组分段扩增，设计方案是将全基因组分成7个片段，0.6kb-3.3kb不等，分别进行RT-PCR扩增，刚开始的三个月，我们课题组三个人辛辛苦苦，什么招都想过了，结果连一个片段都没有拿到。后来有一个周
RTPCR经验浅谈
RT-PCR成败的关键首先在于RNA模板的制备以问者的口气应该是做RNA病毒基因的RT-PCR本人三年前做过一个正链RNA病毒全基因组分段扩增设计方案是将全基因组分成7个片段，0.6kb-3.3kb不等分别进行RT-PCR扩增刚开始的三个月我们课题组三个人辛辛苦苦什么招都想过了结果连一个片段都没有拿
针灸经验琐谈
1.中风病人，在辨证论治的同时结合背部膀胱经和督脉用梅花针叩刺后走罐效佳。 2.双腿走路无力的病人常规**无效时候，可以取面部下关穴，效佳。 3患坐骨神经痛的患者**健侧风池效佳，得气后捻数次令患者带针行走，立效。 4.近视**治愈率不高。 5肩周炎针灸配合阿是刺络拔罐效
RtPCR经验总结
Rt-PCR实验步骤一、实验器具与材料：1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，
**瘙痒诊疗经验谈
**瘙痒是**不适中很常见的一种表现，对女性的生活和工作有一定影响。试想一下，女性朋友在非私密空间工作时如果出现了**瘙痒，这种想挠不能挠的状态多么尴尬。 **瘙痒是什么原因引起的呢？**骚痒常见原因： 1、因为**属肝，所以**痒主要责在于肝。引起**痒的主要原因为气滞血瘀和气血不足
Westernblot经验谈
哈哈,深蒙各位侠士对于兄弟的厚爱和信赖,恐怕我会令大家失望真正做western我也做的不多,不过由于效果都不是很差,所以就对于整个过程中的某些参数对于结果的影响没有深究,正所谓真正经历实验失败的人才会对具体细节理解深刻一样,但是从关于western方面的文献和资料来看,有关各个参数对于结果的影响是有
RTPCR的操做经验分享
在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所
谈液相色谱柱使用经验
液相色谱柱在使用前，进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是zui佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。 1、样
谈液相色谱柱使用经验
液相色谱柱在使用前，zui好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是zui佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。 1
异源表达经验谈（3）
4. 菌种的保存、退化一般来说是加甘油20%左右，-70保存；或制成干粉保存。但是在做甲醇酵母时发现了个问题，就是重组工程菌的退化现象比较严重，一般都是学生做得好好的，但是毕业以后下面的师弟一接手，蛋白就不表达了，或表达量非常的低。连续好几个师兄的结果都是如此，很是奇怪。我猜测可能是由于整合入基因组
异源表达经验谈（1）
异源蛋白的表达是个很复杂的问题，有许许多多的影响因素，而且由于蛋白本身千差万别，很难有一个很完善或很标准的流程方法。另外，表达的宿主也是多种多样，目前比较常用的包括E.coli，酵母（以甲醇酵母居多），昆虫细胞，哺乳动物细胞等，各自有着其本身的特点，优缺点各异。1. 宿主的选择。表达宿主虽众多，但比
异源表达经验谈（2）
2. 转化子、表达子的筛选转化子的筛选，由于许多质粒是穿梭质粒，因此大多具有E.coli中的抗性筛选标记，筛选起来是很方便的（当然，我不清楚细胞方面的筛选，一般使用病毒载体吧，希望高手们介绍一下）。但是转化成功的并不意味着能够成功表达目的蛋白了，因此还需要“表达子”的筛选，尤其是整合入基因组的片断（
谈液相色谱柱使用经验
液相色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。 1、样品的
细胞RTPCR的经验(偏向RNA提取)
做RT也做了几次,有成功也有失败,在园子中受益良多,把我自已的一个流程放上来,供大家参考.细胞RT-PCR操作流程实验流程一 、取RNA：1、 处理细胞：（1） 贴壁细胞：先用无菌DEPC水配制的PBS洗细胞两次，弃尽PBS后，直接向培养瓶中加入1ml Trizol，通过溶解细胞，通过移液管分次移出
基因表达之RTPCR之我见
在论坛上看到不停地有人在问RT-PCR的问题，实际上在以前的帖子中各位香主和eeflying（我为什么总是提他们？因为还是很佩服的哦，生怕自己说错了，被他们指出来哦）都谈到了很多，鄙人也充大头答了一些问题，但是还是有各种问题，由于的基因表达还有点实战经验（但也技止此而），所以想些点东西给大家参考，计
液相色谱柱使用经验谈
色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。1、样品的前处理：
液相色谱柱使用经验谈
液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性
液相色谱仪使用经验谈
色谱柱在使用前，进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是zui佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。 1、样品的前处
如何确定RNA质量的经验谈
1）检测RNA溶液的吸光度 280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的，我们只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0时，我们认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当你用Tris
深静脉血栓照护经验谈
静脉血栓以红血栓（或称凝固性血栓）最常见。血栓形成后可向主干静脉近端和远端滋长和蔓延；其后在纤维溶解酶的作用下血栓可溶解消散，或血栓与静脉壁粘连并逐渐纤维机化；最终形成边缘毛糙、管径粗细不一的再通静脉。同时因静脉瓣膜的破坏，造成继发性深静脉瓣膜功能不全。肿瘤外科因其疾病特殊性，患深静脉血栓风险更高，
专家经验谈：活病毒成像指南
对于大多数生物学过程来说，所见即所得。由于病毒在感染性疾病中的作用，许多生物学家希望能够实时观察病毒的活动。要观察病毒感染细胞和病毒装配的过程，荧光成像是少数几种非介入性的途径之一。进行这样的研究需要带灵敏相机的高质量显微镜，能支持每秒多次成像。还需要确认荧光标签和实验设置不会干扰到我们想要研究
判断肛瘘高低位技巧经验谈
虽然我们都学过**解剖，理论上都知道它由哪些肌肉组成。也知道高位肛瘘与低位肛瘘的界限，但是在临床上，明确某个肛瘘主瘘管的位置高低，不是件容易的事。原因是**未切开前，瘘道到底穿越了哪些括约肌，很难准确判断，便无法确定相应的治疗方法。故多把治疗高位肛瘘的挂线术错用在了低位肛瘘上，给患者带来不必
如何确定RNA质量的经验谈
如何确定RNA质量的经验谈 1）检测RNA溶液的吸光度 280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的，我们只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0时，我们认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注
以青春之我－－铸就复兴之民族
2013年7月17日，习近平总书记视察中科院提出“四个率先”要求，为这支国家战略科技力量未来发展指明了方向、注入了动力。此后，中科院人时不我待、锐意进取，以“率先行动”计划为主线，深化科技改革，产出创新成果，推进了我国科技创新事业的跨越发展。 5年后的今天，重温讲话精神、回眸奋斗历程，以创
专家经验谈：如何减轻你的测序负担
拷贝数变异（CNV）是指基因拷贝数出现的异常，主要表现为基因组大片段的缺失和重复。CNV是基因组结构变异的重要组成部分，与自闭症、认知功能缺陷、癌症等多种疾病有关。芯片是目前临床上检测CNV的主要工具，但芯片检测在有些方面也是力不从心。举例来说，芯片只能帮助我们判断是否存在序列重复（或缺失），要
专家经验谈：抗体制备法的利与弊
单克隆抗体一直是基础研究、医学诊断和疾病治疗中的重要工具。制备单克隆抗体的传统方法，是诺贝尔奖获得者Georges Köhler和César Milstein在上世纪七十年代开发出来的。这一方法包括：让小鼠接触特定抗原，收集它体内的抗体生产细胞，然后将这些细胞与骨髓瘤细胞融合，形成能够长时间体外
清华学者谈全球疫情：－中国经验值得借鉴
据美国约翰斯·霍普金斯大学发布的最新实时数据显示，截至北京时间3月22日6时，全球新冠肺炎确诊病例超过30万例。清华大学医学院教学科研系列独立研究员程功认为，为了有效控制住疫情，无疫情报告病例的国家应该全面做好检测和预防的准备，疫情严峻的国家可以有“中国经验”参考。 清华大学生命科学学院教学科