RTPCR经验浅谈
做RNA病毒基因的RT-PCR成败的关键首先在于RNA模板的制备。本人三年前做过一个正链RNA病毒全基因组分段扩增，设计方案是将全基因组分成7个片段，0.6kb-3.3kb不等，分别进行RT-PCR扩增，刚开始的三个月，我们课题组三个人辛辛苦苦，什么招都想过了，结果连一个片段都没有拿到。后来有一个周末，我一个人安安静静做了一天，PCR跑胶的结果足以让我兴奋一个月：一下子隐隐约约出了3个片段！！！紧接着把胶里的弱带切下，水溶并后做二次扩增(注：跑胶总会吧，在UV下，参照marker，将特异性高，且与预期大小相同的DNA带切出，放在一个ep管里，加入适量无菌水，用枪头将胶反复搅碎，高速离心，小心吸取2ul上清用作模板，进行第二次PCR扩增)很快，三个预期的片段都得到了理想的扩增。不到一个月，12kb的全基因组各片段全部收归囊下。我这次成功的关键在于：提取RNA时，收集沉淀这一步。离心速度不要低于13000rpm（r=5cm），提高离......阅读全文
RTPCR经验浅谈
RT-PCR成败的关键首先在于RNA模板的制备以问者的口气应该是做RNA病毒基因的RT-PCR本人三年前做过一个正链RNA病毒全基因组分段扩增设计方案是将全基因组分成7个片段，0.6kb-3.3kb不等分别进行RT-PCR扩增刚开始的三个月我们课题组三个人辛辛苦苦什么招都想过了结果连一个片段都没有拿
RTPCR经验浅谈
做RNA病毒基因的RT-PCR成败的关键首先在于RNA模板的制备。本人三年前做过一个正链RNA病毒全基因组分段扩增，设计方案是将全基因组分成7个片段，0.6kb-3.3kb不等，分别进行RT-PCR扩增，刚开始的三个月，我们课题组三个人辛辛苦苦，什么招都想过了，结果连一个片段都没有拿到。后来有一个周
RtPCR经验总结
Rt-PCR实验步骤一、实验器具与材料：1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，
RTPCR－经验之我谈
看到论坛上有很多朋友询问RT-PCR的重复性问题，说明这里面还是有很多问题的，于是 想跟大家分享一下自己做PCR的经验：1. 总RNA的提取： 材料来源一般为细胞和组织，细胞相对比较单一，蛋白污染较小，TRIZOL法提取结果 A260/A280 结果一般都在1.8-2.1之间；组织的成分较复杂，污染
RTPCR的操做经验分享
在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所
细胞RTPCR的经验(偏向RNA提取)
做RT也做了几次,有成功也有失败,在园子中受益良多,把我自已的一个流程放上来,供大家参考.细胞RT-PCR操作流程实验流程一 、取RNA：1、 处理细胞：（1） 贴壁细胞：先用无菌DEPC水配制的PBS洗细胞两次，弃尽PBS后，直接向培养瓶中加入1ml Trizol，通过溶解细胞，通过移液管分次移出
浅谈ELISA试剂盒选购经验
目前市场上的ELISA试剂盒质量参差不齐，如何去挑选适合自己的试剂盒就显得特别重要，具体有以下几点可供参考： 一、特异性ELISA试剂盒的特异性与试剂盒的关键组分，抗体对有关，若抗体对中之一为多抗，另一个必须为单抗，建议使用双单抗。 二、灵敏度灵敏度反映的是试剂盒检出被检物质的最低量的能力，用户可根
浅谈德国光伏发电经验与政策
德国是首批促进光伏产业发展的欧洲国家。1990年，德国在通过了“十万屋顶”项目之后，德国光伏产业在全球市场中得到飞速发展。到今天为止，在全球范围内安装的大量光伏项目中，有1/3在德国。 如果回过头来看一看，没有人能预测到可再生资源、尤其是光伏能源能够这么快速地增长。在过去的三年中，太阳能在
常用凝血功能检测质量改进经验浅谈
复旦大学附属中山医院检验科 王蓓丽，潘柏申引言凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、凝血酶时间(thrombin time,TT)及纤维蛋白原含量等项目是临床最
qPCR（RTPCR）数据相对定量的分析方法与经验
qPCR的数据相对定量分析其实很简单。我做了很多的qPCR实验，也看了很多的资料，包括Nature protocol， AB官方的分析教程，MIQE，甚至包括一些商业化软件使用的教程及教程里面记述的原理。我在这里跟大家分享一下自己的经验，最常用，最普遍的相对定量方法就是2^-△△Ct法，该法最最简单
阿胶的炮制作用及炮制经验浅谈
阿胶是以优质驴皮为原料，用水煎取胶质，浓缩干燥而制成的块状胶剂。阿胶味甘，性平。归肺、肝、肾经。有补血滋阴、润燥、止血等作用。阿胶生用，多入汤剂烊化服用，不易煎煮，入丸散剂也不易粉碎。阿胶丁性滋腻，具有腥气。蛤粉炒成珠后，降低了滋腻之性，便于粉碎，也可入汤剂煎煮。同时降低了碍胃的副作用
浅谈基层医院干燥综合征诊断经验
干燥综合征(Sj?gren’s syndrome, SS)是一种以泪腺和唾液腺功能下降为特征的慢性自身免疫性炎症性疾病。外分泌腺功能下降导致“干燥复征”，即眼干合并口干。此外还可出现多种累及多个脏器和脏器系统的其他疾病表现，SS的临床表现可分为两大类：外分泌腺表现和腺体外表现。
浅谈凯氏定氮仪的使用经验
1、 开机之前，保证各个溶液能够满足此次试验测定，检查去离子水，碱液和接收液的使用情况，以及废液桶中废液得到了及时的清理。如果在去离子水，碱液和接收液的液位低于液位传感器的话，或废液的液位高于液位传感器的话，仪器将报警，正在进行的试验将被停止，影响测定工作的正常进行。 2、开机之前，保证冷却水
关于qPCR（RTPCR）数据相对定量的分析方法与经验
qPCR的数据相对定量分析其实很简单。我做了很多的qPCR实验，也看了很多的资料，包括Nature protocol， AB官方的分析教程，MIQE，甚至包括一些商业化软件使用的教程及教程里面记述的原理。我在这里跟大家分享一下自己的经验，最常用，最普遍的相对定量方法就是2^-△△Ct法，该法最最简单
浅谈RTPCR实验方法中常见污染问题及对策
李轲反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以近年来RT-PCR技术被广泛应用于人和动物的多种传染病早期诊断。笔者一直从事实
浅谈RTPCR实验方法中常见污染问题及对策
李轲反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以近年来RT-PCR技术被广泛应用于人和动物的多种传染病早期诊断。 笔者一直
浅谈社区获得性肺炎鉴别诊断及治疗经验
社区获得性肺炎：（CAP）是指在医院外罹患的感染性肺实质（含肺泡壁即广义上的肺间质）炎症，包括具有明确潜伏期的病原体感染而在入院后平均潜伏期内发病的肺炎。 1.鉴别诊断： 1）心衰和肺水肿：多有高血压、冠心病、粉丝性心脏病的病史。突发严重呼吸困难、端坐位、紫绀、大汗、咳出粉红色泡沫痰，两肺闻
浅谈几种常见非感染性**头炎的治疗经验
在泌尿外科门诊，很多男性患者因为**头出现炎性病变来就诊，并表现出十分紧张的情绪，怕自己得了性病治不好。其实**头部的炎症是十分常见的，在治疗方面也不复杂，但是需要诊断明确，并针对用药。在一些社区基层医院，很多医生是全科医生，有的对一些**头炎并不是十分了解，本文就**头非感染性炎症的治疗做一浅谈。
定量RTPCR－（Quantitative－RTPCR）
Application: Quantitative RT-PCR is used to quantify mRNA in both relative and absolute terms. It can be applied for the quantification of mRNA expres
浅谈脂肪抽吸和脂肪移植在臀部塑形的应用及经验2
5 讨论随着人们对臀部外形的重视与日俱增，越来越 多的人为了改善臀部形态而就诊，并选择不同的方 法进行臀部塑形。其中脂肪抽吸和脂肪填充因其切 口较小、手术简便及术后恢复较快等特点已成为臀 部塑形最常用的手术方法之一。臀部的审美随着人 种、地域和时代的不同而变化，虽然没有绝对理想 的臀形，但调
浅谈脂肪抽吸和脂肪移植在臀部塑形的应用及经验1
随着人们对形态美要求的不断提升，臀部形态 的塑造被越来越多的人们所重视，与此同时，国内 外关于臀部整形的手术量呈逐年增加，近 5 年来尤 为显著[1]。目前， 求美者对于臀部形态美的要求越来 越高，不仅要求臀部外形丰满，同时更追求臀部轮 廓优美，即腰臀腿线条流畅且比例完美。这是医师 和求
半定量RTPCR－（SemiQuantitative－RTPCR－）
RT-PCR AnalysisSolutions10X RT Buffer10X PCR Buffer100 mM Tris pH 9.0500 mM KCl1% Triton X-10025 mM MgCl2use at a concentration of 1.5 mMLysis Solutio
RTPCR步骤
总RNA提取1. 取200mg组织，放到1.5ml EP管中，加入1ml Trizol剪碎。2. 震荡30s。3. 加0.2ml氯仿，剧烈摇动30s，室温3min。4. 12000×g，4℃ 离心，15min。5. 吸上层无色水相，移入另一EP管中（约0.5ml）。6. 加等体积异丙醇，-20℃，3
RTPCR之我见
本文讨论的范围包括RNA酶保护分析，northernblot，原位杂交，半定量RT-PCR和定量RT-PCR。本文不谈具体protocol，是因为各种书籍和kit说明书上都有，主要说一些原则，而且大部分是失败和成功的经验，还有小组讨论结果以及各种书里七零八落看的内容，希望对大家有用。 基因表达的定义
Standard－RTPCR
RT-PCR or reverse transcription PCR refers to PCR that uses product of an RT reaction as template. In effect, the PCR amplifies cDNA fragments. In one
RTPCR－PROTOCOL
RT-PCR PROTOCOL材料与方法………………………………………………………… 1．材料 ………………………………………………………1.1 供试用组织(细胞)…………………………………1.2 主要仪器设备………………………………………1.3 主要试剂……………………………………………1.
RTPCR技术简介和RTPCR引物的选择
RT-PCR简介RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cD
什么是RTPCR，RTPCR的定义与检测方法？
1.定义：是以RNA为模板，联合逆转录反应（reverse transcription，RT）与PCR，可用于检测单个细胞或少数细胞中少于10个拷贝的RNA模板。 RNA扩增包括两个步骤： 在单引物的介导下和逆转录酶的催化下，合成RNA的互补cDNA；加热后cDNA与RNA链解离，然后与另一引物退火
RTPCR技术1
目前已有多种方法用来研究有关细胞和组织中，基因表达产物方面的内容，这些方法主要有Northern印迹、RNase保护分析法、原位杂交、点印迹、Ｓ１核酸酶分析法及反转录与PCR扩增串联的RT-PCR技术等。在这些方法中RT-PCR技术具敏感度高和应用范围广的特点，该技术提供给研究人员有效的进行测定转录
实时－RTPCR－实验
本方法使用Superscription反转录系统合成cDNA。进行实时PCR时，FAM或JOE荧光基团既可以标记正向引物，也可以标记反向引物。可以用Trizol试剂提取RNA或按第10章描述的方法提取RNA。样品中的基因组DNA用DNaseI消化掉（参照第10章）。本实验来源于PCR实验指南（第二版