PCRArray简单实用的检测基因表达的高通量方法
简介：什么是PCR芯片？实时定量PCR是检测基因表达最灵敏，最可靠的方法。通过在试验过程中，实时监测荧光染料的信号变化，反映样品中的基因拷贝数。实时定量PCR线性范围广（能达到5个数量级），因此可以检测同一样品中表达量极低的基因和表达量很高的基因。但是，由于实时定量PCR需要制备标准曲线和同时分析内参基因，因此，每次实验只能检测少数几个基因的表达水平，若要检测大量基因，则工作量巨大，耗时长久。通过简单的，经过优化的实时定量PCR体系，如SuperArray的RT2ProfilerTM PCR芯片，研究者可以同时研究大量基因，既可以进行某些特别感兴趣的信号通路的研究，也可以作为验证芯片结果的方法。为了获得理想的实验结果，PCR芯片面临以下挑战：高特异性，高灵敏度和可重复性。高灵敏度或低检出限，在样品的总RNA量少，基因表达量低的情况下，也能检测出目的基因。高特异性，扩增产物严格保证基因特异性，避免非特异性产物，如引物二聚体的产生。......阅读全文
RT2－Profiler－PCR－Arrays新手小技巧及注意事项
RT2 Profiler PCR Arrays新手小技巧及注意事项（做了几百次PCR Array的Matt Finley博士的经验之谈） RNA纯化和分析: 起始RNA样品的质量是成功实验的最重要的因素之一。我强烈推荐使用QIAGEN的RNA纯化试剂盒来进行RNA纯化。RNA样品必须进行柱上DNa
快速可靠的甲基化分析，无需亚硫酸氢盐转化
在甲基化分析中，亚硫酸氢盐转化通常是必经之路。它将未甲基化的胞嘧啶转化成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变，之后再结合PCR、测序等技术分析甲基化状态。听上去似乎很简单，但要想获得漂亮的结果，却并非那么容易。转化效率如何?回收率如何?这都是需要考量和优化的因素。 最近，QIAGEN
辉瑞114亿美元拿下靶向小分子药物公司Array
辉瑞公司（纽约证券交易所股票代码：PFE）和Array BioPharma Inc.（纳斯达克股票代码：ARRY）在6月17日宣布，辉瑞将以每股48美元、总企业价值约为114亿美元的现金收购Array。在并购完成之后，双方将专注于靶向小分子药物的发现，开发以及商业化，用以治疗癌症和其它疾病。
Array将重获诺华抗癌药Binimetinib开发和营销权
本周三，诺华与Array Biopharma公司签署协议宣布，Array将重新获得其抗癌药物Binimetinib的开发和营销权利。 Array重购Binimetinib将有可能促其获得GSK的抗癌药Mekinist：今年四月诺华宣布与葛兰素史克（GSK）进行一项业务重组，
BioMark™基因分析系统介绍
美国Fluidigm公司www.fluidigm.com创立于1999年，总部设在美国加州。其创始人是Steve Quake和Gajus Worthington(公司CEO)。Steve Quake是美国斯坦福大学教授，是微液流领域（Microfluidic Technology）的权威专家http
趋化因子及其受体的功能介绍（四）
5 .5 趋化因子对组织细胞及肿瘤细胞的趋化作用趋化因子除了对免疫细胞有定向趋化作用外，对其它能够表达相应趋化因子受体的组织细胞都具有趋化作用。如前面提到的ELR-CXC类趋化因子对内皮细胞的趋化作用。SDF-1对胚胎期神经细胞的趋化能力使之在中枢神经系统神经网络的发育中起重要作用。长期以来一直有报
布鲁克FluoroCycler－XT－PCR系统和FluoroType－MTBDR－2.0获CEIVD标志
分析测试百科网讯 近日，布鲁克宣布其用于检测结核病（TB）和抗生素耐药性的FluoroCycler XT PCR系统和FluoroType MTBDR 2.0 Liquid Array检测已获得CE-IVD标志。 根据布鲁克的消息，基于PCR的MTBDR测试可在三小时内直接从患者样本中识别病原
FAO通路通过抑制失巢凋亡促进结肠直肠癌细胞远端转移
中山大学附属肿瘤医院肿瘤研究所徐瑞华教授长期从事消化道肿瘤个体化治疗及抗癌药物研究。该课题组利用NuRNA™ Human Central Metabolism PCR Array研究发现在非贴壁的结直肠癌细胞中，脂肪酸氧化（FAO）通路被激活。而在转移的肿瘤中，CPT1A表达上调，由CPT1A
DNA微阵列的常见类型
Stanford型由美国斯坦福大学开发的cDNA array的制作方法，将预先合成好的核酸探针布放于玻片载体上。 优点：设计较长的探针长度可增加专一性。 缺点：芯片密度较光罩法低，并须有良好的保存设计。这种方法又可分为点制法与印制法。点制法是小规模生产或实验室自制的低密度芯片，以机械手臂上带有毛细作
简述DNA微阵类型的内容
基因芯片的制作方式基本可分为以下几型： 1、Stanford型 由美国斯坦福大学开发的cDNA array的制作方法，将预先合成好的核酸探针布放于玻片载体上。 优点：设计较长的探针长度可增加专一性。 缺点：芯片密度较光罩法低，并须有良好的保存设计。 这种方法又可分为点制法与印制法。 点制
DNA微阵类型的介绍
基因芯片的制作方式基本可分为以下几型： Stanford型 由美国斯坦福大学开发的cDNA array的制作方法，将预先合成好的核酸探针布放于玻片载体上。 优点：设计较长的探针长度可增加专一性。 缺点：芯片密度较光罩法低，并须有良好的保存设计。 这种方法又可分为点制法与印制法。 点制法是
全基因组的比较基因组杂交技术介绍
Whole-Genome and Custom Fine-Tiling Array CGHComparative Genomic Hybridization (CGH) measures DNA copy number differences between a reference genome a
FAO通路通过抑制失巢凋亡促进结肠直肠癌细胞远端转移
中山大学附属肿瘤医院肿瘤研究所徐瑞华教授长期从事消化道肿瘤个体化治疗及抗癌药物研究。该课题组利用NuRNA™ Human Central Metabolism PCR Array研究发现在非贴壁的结直肠癌细胞中，脂肪酸氧化（FAO）通路被激活。而在转移的肿瘤中，CPT1A表达上调，由CPT1A介导的
Array三药方案III期临床获得成功，被辉瑞$110亿收购
Array BioPharma是一家专注于发现、开发和商业化小分子药物治疗癌症的美国生物制药公司。今年6月，辉瑞宣布以110亿美元收购Array。近日，该公司公布了结直肠癌III期临床研究BEACON CRC的数据。该研究在既往已接受一种或两种疗法的晚期BRAF V600E突变转移性结直肠癌（m
多重PCR（Multiplex－PCR）
一般PCR仅应用一对引物，通过PCR扩增产生一个核酸片段，主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同. 多
PCR简介/PCR仪
PCR的要素基本的PCR须具备PCR仪图册1.要被复制的DNA模板 Template2.界定复制范围两端的引物Primers.3.DNA聚合酶Taq. Polymearse4.合成的原料（四种脱氧核苷酸）及水。 PCR仪工作原理利用升温使DNA变性，在聚合酶的作用下使单链复制成双链，进而达到基因复制
多重PCR（Multiplex－PCR）
一般PCR仅应用一对引物，通过PCR扩增产生一个核酸片段，主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同. 多
Troubleshooting－for－PCR－and－multiplex－PCR
Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles.COMPONENTVOLUMEFINALCONCE
重叠PCR—overlap－PCR
1、简介 重叠PCR也是基本的PCR原理：变性-退火-延伸。不同的是在重叠PCR过程是两个或者几个片段重叠延伸之后，再进行指数扩增的PCR过程。 2、基本原理*步：PCR产生两个或者几个片段，这几个片段之间必须有重叠区。 第二步：以两个片段为例，见上图，*步产生的两个片段，A D链之间有互补，B
NALP3炎性体与非感染性炎症疾病及其通路研究工具
一、NALP3炎性体的结构和分布 NALP3炎性体是一类分子量约为700kDa的大分子蛋白复合体，由核苷酸结合寡聚化结构域样受体（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptors，NLRs）家族成员NALP3、衔接蛋白ASC
普通PCR梯度PCR－原位PCR－荧光定量PCR仪的区别
普通PCR仪： 一般把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪，称之为普通PCR仪，也就是传统的PCR仪。如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行。如；（ABI 2720） 梯度PCR仪： 一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件（通常12种温度梯度）的称
反转录PCR（RTPCR,－Reversed－Transcript－PCR）
1 原理 RT—PCR是一种将cDNA合成与PCR技术结合分析基因表达的快速灵敏的方法，主要用于对表达信息进行检测或定量分析,还可以用来检测基因表达差异而不必构建cDNA文库克隆cDNA。RT-PCR的模板可以为总RNA或poly(A)+选择性RNA。逆转录反应可以使用逆转录酶，以随机引物、ol
FAO通路通过抑制失巢凋亡促进结肠直肠癌细胞远端转移
中山大学附属肿瘤医院肿瘤研究所徐瑞华教授长期从事消化道肿瘤个体化治疗及抗癌药物研究。该课题组利用NuRNA™ Human Central Metabolism PCR Array研究发现在非贴壁的结直肠癌细胞中，脂肪酸氧化（FAO）通路被激活。而在转移的肿瘤中，CPT1A表达上调，由CPT1A
直接原位PCR（In－situ－PCR）
原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术，使得靶基因检测有了极大的改进。此技术是在细胞（爬片、甩片或涂片）或组织（石蜡、冰冻切片）上直接对靶基因片段进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。一、组织切片和细胞样品的制备试剂与配置10%福尔马林；二甲苯；PBS操
反向PCR－（inversePCR）
实验方法原理 反向PCR是克隆T-DNA插入位点侧翼DNA序列非常有效的方法。 1. 选择合适的限制性内切酶位点。并在T-DNA的边界（左边界、右边界均可）和酶切位点附近设计引物P1、P2；2. 回收DNA，T4连接酶连接，使酶切后的DNA片段环化；3. 回收连接后的DNA，用引物P1、P2做
直接原位PCR（In－situ－PCR）
原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术，使得靶基因检测有了极大的改进。此技术是在细胞（爬片、甩片或涂片）或组织（石蜡、冰冻切片）上直接对靶基因片段进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。一、组织切片和细胞样品的制备试剂与配置10%福尔马林；二甲苯；PBS操
反向PCR－（inversePCR）
利用反向PCR可对未知序列扩增后进行分析，探索邻接已知DNA片段的序列，并可将仅知部分序列的全长cDNA进行分子克隆，建立全长的DNA探针。可用于：（1）基因游走研究；（2）转位因子研究；（3）已知序列DNA旁侧病毒整合位点分析等研究。实验方法原理反向PCR可用于研究与已知DNA区段相连接的未知染色
反向PCR－（inversePCR）
实验方法原理 反向PCR可用于研究与已知DNA区段相连接的未知染色体序列，因此又可称为染色体缓移或染色体步移。这时选择的引物虽然与核心DNA区两末端序列互补，但两引物3’端是相互反向的。扩增前先用限制性内切酶酶切样品DNA，然后用DNA连接
PCR技术（十四）：反向PCR
描述一种大聚合酶链反应(PCR)应用的方法，使在已知序列的核心区边侧的未知 DNA成几何级数扩增。用适当的限制性内切裂解含核心区的DNA，以产生适合于PCR扩 增大小的片段，然后片段的末端再连接形成环状分子。PCR的引物同源于环上核心区 的末端序列，但其方向性，使链的延长经过环上的未知区而不是分开引
反向PCR（inverse－PCR）简介
反向PCR是一种多聚合酶链式反应（PCR）应用的方法，可使已知序列的核心区边侧的未知DNA成几何级数扩增。用适当的限制性内切裂解含核心区的DNA，以产生适合于PCR扩增大小的片段，然后片段的末端再连接形成环状分子。PCR的引物同源于环上核心区的末端序列，但其方向可使链的延长经过环上的未知区而不是分开