一种简单实用的提取植物DNA实验
实验方法原理的提取是植物分子生物学和基因工程研究的一种基本的技术,至今已有了数种方法。此方法最大的特点是:将SDS同时用作细胞膜的去污剂和蛋白质的变性剂,变性的蛋白质通过离心而不是酚抽提除去,使得整个操作过程变得简单快捷,比较温和,1小时左右就可以获得纯化的植物DNA。用这种方法得到的DNA能直接被限制性内切酶酶解,纯度较高,适用于分子生物学的研究。本实验的目的是掌握DNA提取的原理和方法。实验步骤一、材料与方法:1、植物材料:螺旋藻(Spirulina platensis)、水稻(Oryza sativa)和烟草(Nicotianatabacum).2、试剂和溶液:(1)20×SSC:3mol·L-1柠檬酸钠,pH8.0:(2)溶菌酶、10μg·μl-1Rnase、10%SDS(均为Sigma产品);(3)酚:氯仿:异戊醇=25:24:1(4)TE:10mmol·L-1Tris-HCL、1mmol·L-1EDTA,pH7.6。......阅读全文
植物DNA的提取实验中吸收样品、抽提应注意什么
抽提时应缓慢摇匀,不能太用力,时间要适当长一点。离心后吸取上清要慢,枪头最好用蓝枪头或是剪过的黄枪头,注意千万不能触到蛋白膜。原因就是DNA链容易断裂,所以要轻,要用口大的枪头。为了抽提效果好所以延长时间。
病毒-DNA-的提取实验——全血细胞中病毒-DNA-的提取
实验材料全血试剂、试剂盒裂解缓冲液 A裂解缓冲液 B蛋白酶 K仪器、耗材离心机水浴锅实验步骤1. 在 750µl 全血中加入等量裂解缓冲液 A,混匀, 12000 r/min 离心 30 s, 弃上清液。2. 用 1.5mL 裂解缓冲液 A 悬起沉淀,再重复离心 1次,弃上清液。3. 用 117µL
病毒-DNA-的提取实验——拭子标本中病毒-DNA-的提取
实验材料拭子标本试剂、试剂盒TE 缓冲液裂解液蛋白酶K仪器、耗材离心机棉签实验步骤预操作:将采有口腔、鼻腔或生殖道等处分泌物标本的棉签置于 2 ml 生理盐水中,洗下标本。若标本在 4 h 内处理,可置于室温保存,否则需 4℃保存。1. 将生理盐水中的标本以 2 000 r/min 离心 5 min
痘苗病毒DNA提取实验
实验方法原理 实验材料 纯化的痘苗病毒试剂、试剂盒 Tris•Cl 溶液SDS蔗糖溶液 蛋白酶 K用 50 mmol/L Tris • Cl 溶液平衡的苯酚1:1苯酚氯仿1 mol/L 乙酸钠乙醇仪器、耗材 分光光度计Sorvall 离心机实验步骤 1. 在 260 nm 处确定纯化的疸苗病毒的光密
痘苗病毒DNA提取实验
如果提取的痘苗病毒DNA用于转染,则应在蛋白酶 K 消化和苯酚抽提后分离。具体方法见本实验。实验材料纯化的痘苗病毒试剂、试剂盒Tris•Cl 溶液SDS蔗糖溶液蛋白酶 K用 50 mmol/L Tris • Cl 溶液平衡的苯酚1:1苯酚氯仿1 mol/L 乙酸钠乙醇仪器、耗材分光光度计Sorval
痘苗病毒DNA提取实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 纯化的痘苗病毒
质粒DNA提取实验步骤
质粒DNA提取可以:(1)快速纯化质粒;(2)用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。实验方法原理质粒多为一些双链、环状的DNA分子,是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作,进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。
植物总RNA的提取实验
研磨法 实验方法原理 在液氮中研磨植物材料, 使部分细胞破碎, 进一步使植物细胞在裂解液中裂解, 用醋酸钠和氯仿沉淀蛋白质, 异丙醇沉淀核酸, 溶解后经氯化锂
植物总RNA的提取实验
实验方法原理 在液氮中研磨植物材料, 使部分细胞破碎, 进一步使植物细胞在裂解液中裂解, 用醋酸钠和氯仿沉淀蛋白质, 异丙醇沉淀核酸, 溶解后经氯化锂沉淀总RNA, 洗涤后得到高质量的RNA。本实验旨在了解和掌握植物总RNA 的分离和纯化方法。实验材料 植物RNA试剂、试剂盒 尿素Tris-HClN
简单实用的PROM电路测试器
本设计实例分享一种电路测试器,可以夹在每颗PROM上进行测试,不用将PROM从电路板上拔下。 处理老旧技术会带来有趣的挑战;虽然现代的可程式化元件透过JTAG或SPI介面很容易实现电路测试(tested in circuit,或称“线上测试”),但测试较老的元件就没这么方便了。 我从
简单实用的细菌快速检测方法
目前有哪种微生物测试方法能够在6~8个小时内显示食品和食品生产环境清洁度的微生物水平? 食品和饮料生产公司的答案是令人失望的:没有! 细菌总数、大肠菌群以及大肠杆菌平板计数通常可以对食品样品以及表面处理环境的微生物水平进行评估,然而检测结果需要在24~72小时之后获得。而采用显色
病毒-DNA-的提取实验——新鲜或冷冻组织中病毒-DNA-的提取
实验材料新鲜或冷冻组织试剂、试剂盒匀浆缓冲液裂解液仪器、耗材剪刀匀浆器离心机实验步骤1. 取新鲜或刚解冻的组织去除血水和结缔组织,在冰浴上剪成小碎块。2. 将组织碎块移入预冷的匀浆器中,按 10 ml/g 加入匀浆缓冲液,混匀,制成匀浆液。3. 将匀浆液移人 Ep 管, 5000 r/min 离心1
SDS法提取植物基因组DNA
本方法由Dellaporta,Wood和Hicks(1983)的方法修改而成。其基本原理是研磨的组织细胞用热的SDS裂解后,加入高浓度的KAc,0℃放置以除去蛋白和多糖类杂质,最后用乙醇或异丙醇沉淀。一 材料、试剂和仪器1 材料 新鲜的组织材料或-80℃冻存的材料2 试剂(1)提取缓冲液Tris-H
dna提取实验步骤是什么
利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液。在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M。加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出。分别用66%,80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品。此法提取的DNA中
动物DNA提取实验——浓盐法
动物肝脏DNA提取可以:(1)用于法医学鉴定;(2)诊断和系统发育研究;(3)用于进一步的聚合酶链式反应(PCR)以获得DNA。实验方法原理在浓氯化钠(1-2 mol/L)溶液中,脱氧核糖核蛋白的溶解度很大,核糖核蛋白的溶解度很小,在稀氯化钠(0.14 mol/L)溶液中,脱氧核糖核蛋白的溶解度很小
植物总RNA的提取实验技术
一、实验目的 通过本实验学习从植物组织中提取RNA的方法 二、实验原理 RNA是一类极易降解的分子,要得到完整的 RNA,必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。高浓度强变性剂异硫氰酸胍,可溶解蛋白质,破坏细胞结构,使核蛋白与核酸分离,失活RNA酶,所以RNA从细胞中释
植物叶蛋白的提取实验步骤
鸭源性核酸PCR-荧光探针试剂盒植物叶蛋白的提取主要有盐析法、有机溶剂沉淀法、加热法(含逐步和快速加热)、 离心分离法、结晶和重结晶法等。依据今后的开发方向(以饲料为基础,以食品、饮品为开发方向)及简便易行和使用的原则,主要采用盐析法、加热法和有机溶剂法分离提取叶蛋白(冷提和热提)。不同的提取方法,
简单地讨论光端机的实用性
1、外观大方,结构合理 电话光端机技术含量高,其外观应小巧精致,美观大方,整体结构必须尽量的符合工程安装要求。一般室内型数字视频光端机除采用19 寸机柜外,还应能兼顾工程中将光端机置于桌面或壁挂的需要。数字光端机 另外,电话光端机还必须具有良好的散热性能和电气接触性能。 2、接口丰富,布局合
植物DNA的提取及凝胶电泳分析
实验概要利用基因组DNA较长的特性,可以将其余细胞器或质粒等小分子DNA分离。当加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团漂浮其中,可用玻璃棒将其取出,而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部,从而达到分离提取的目的。分离基因组DNA应尽量在温和的条件下操作。琼脂糖或聚
植物蛋白提取实验说明
植物蛋白提取试剂适用于多种植物根,茎,叶及果实等的新鲜或冻存组织。植物组织成分复杂,含有较多酚类物质、多糖、色素、次生代谢物质等,致使植物蛋白质的分离提取变得困难和复杂。本试剂采用优化的试剂和程序,能有效提取多种植物中的可溶性和疏水性蛋白成分,有效去除植物组织所含的多酚、多糖、醌、色素、脂质、次生代
植物和动物DNA提取方法有何不同
后面的步骤都一样,就是前处理所用的方法和试剂不太一样,植物需用机械或酶去壁,动物需用胰蛋白酶去膜。当然这里的动物DNA提取指的是动物组织DNA的提取,如果用动物血就要简单的多了。所谓前处理,指的就是裂解的过程,让细胞破碎,使DNA跑出来,然后对DNA进行收集。
利用CTAB法提取植物基因组DNA
一、实验原理 CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)是一种去污剂,可溶解细胞膜并能与核酸形成复合物,该复合物在高离子强度(0.7mol/L)的溶液里是可溶的,通过离心可将复合物同蛋白质、多糖类物质分开。在酚仿变性的条件下,去除残留的CTAB和蛋白质等杂质,然后利用异戊醇或无水乙醇将DNA分
质粒DNA的大量提取和纯化实验
碱法 实验材料 细菌 试剂、试剂盒 ST
质粒DNA的大量提取和纯化实验
实验材料 细菌试剂、试剂盒 STE酚 氯仿NaClPEG乙醇仪器、耗材 离心管离心机抽干机实验步骤 1、取培养至对数生长后期的含pBS质粒的细菌培养液250 ml,4 ℃下5000 g离心15分钟,弃上清,将离心管倒置使上清液全部流尽。2、将细菌沉淀重新悬浮于50 ml用冰预冷的STE中(此步可省略
SDS裂解法提取质粒DNA实验
这种温和的方法(改进自 Godson and Vapnek 1973 ) 在处理大质粒(>15 kb ) 时较碱裂解法和煮沸法好。但温和的代价是产量低:有相当数量的质粒 DNA 混于细胞渣滓中,在操作的早期步骤中丢失。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理这种温和的方法(改进自
SDS裂解法提取质粒DNA实验
实验方法原理 这种温和的方法(改进自 Godson and Vapnek 1973 ) 在处理大质粒(>15 kb ) 时较碱裂解法和煮沸法好。但温和的代价是产量低:有相当数量的质粒 DNA 混于细胞渣滓中,在操作的早期步骤中丢失。试剂、试剂盒 抗生素氯霉素氯仿EDTA乙醇NaClSDSSTETri
血基因组DNA提取实验
实验方法原理 本试剂盒采用特殊的细胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶K 裂解)从抗凝全血中得到基因组DNA。适用于从冻全血、血浆、血清、骨髓、其他体液、淋巴细胞、培养细胞、病毒和线粒体中提取DNA。实验材料 抗凝全血试剂、试剂盒 血基因组DNA 试剂盒仪器、耗材 96孔深孔板96圆孔板96孔DNA制备板
细菌基因组DNA提取实验
实验方法原理 本试剂盒采用独特的细胞裂解和相分离技术,结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DNA 的目的。适合于从1.0×109 细菌中获得多至20 μg 的基因组DNA。用于PCR、Southern 印迹分析、RAPD、RFLD 等分子生物学实验。实验材料 细菌培养物
血基因组DNA提取实验
实验方法原理 采用特殊的细胞裂解和蛋白去除液(包括蛋白酶K 裂解)从抗凝全血中得到基因组DNA。 实验材料 抗凝全血
细菌基因组DNA提取实验
细菌基因组DNA提取可应用于:(1)获得细菌基因组DNA;(2)作为PCR模板;(3)用于测序、遗传信息分析等。实验方法原理本试剂盒采用独特的细胞裂解和相分离技术,结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DNA 的目的。适合于从1.0x109 细菌中获得多至20 ug 的基因组DN