稳转株的制备
实验原理：利用哺乳动物系统生产蛋白的方式有两种：瞬时转染和稳转株筛选。通过稳定细胞系构建筛选稳定表达细胞株。针对瞬时转染，外源基因在短时间转录翻译得到的蛋白量较少，能够满足小量蛋白制备，大量生产成本很高。相对于此，稳定转染的是将外源基因整合到细胞自身的基因组上，随着细胞的生长分裂外源基因可以稳定转染表达，同时经过抗生素加压筛选，最终得到能够稳定转染表达蛋白的细胞株，稳转株生产蛋白稳定性更好，批次差异性更小。稳定转染的应用 稳定转染适用原因 稳定转染应用 外源基因要整合到细胞染色体上 基因敲除以及基因插入突变筛选等修饰基因组的研究 细胞之间存在个体差异，同一类型细胞，不同个体细胞 基因组存在差异，会对实验结果造成干扰 单克隆稳转株......阅读全文
稳转株的制备
实验原理：利用哺乳动物系统生产蛋白的方式有两种：瞬时转染和稳转株筛选。通过稳定细胞系构建筛选稳定表达细胞株。针对瞬时转染，外源基因在短时间转录翻译得到的蛋白量较少，能够满足小量蛋白制备，大量生产成本很高。相对于此，稳定转染的是将外源基因整合到细胞自身的基因组上，随着细胞的生长分裂外源基因可以稳定转染
知识分享：稳转株的制备
实验原理： 利用哺乳动物系统生产蛋白的方式有两种：瞬时转染和稳转株筛选。通过稳定细胞系构建筛选稳定表达细胞株。针对瞬时转染，外源基因在短时间转录翻译得到的蛋白量较少，能够满足小量蛋白制备，大量生产成本很高。相对于此，稳定转染的是将外源基因整合到细胞自身的基因组上，随着细胞的生长分裂外源基因
什么是稳转株
稳定转染的细胞株，就是转染后质粒可以稳定整合到基因组上不会因细胞分裂而丢失。区别于质粒瞬时转染不能长时间保留质粒在细胞里。
维真稳转株构建流程
稳转株即稳定表达细胞株，指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。慢病毒感染-药物筛选法是目前广泛应用的稳转株构建方法，具有高效整合、目标细胞广泛等特点。 一．准备及预实验 确定细胞系相关信息，需包括如下内容 目标细胞系培养条件 目标细胞增殖速度 支原体污染情况
稳转细胞株构建原理
稳转株即稳定表达细胞株，指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。稳定细胞系建立的原理将外源DNA/shRNA克隆到带有某种抗性基因的载体上，重组载体被转染至宿主细胞并整合到其染色体中，并能随细胞分裂稳定传递下去，用载体中所含抗性基因进行筛选。常用的真核表达载体抗性筛选标志物有新
维真稳转株构建流程（一）
稳转株即稳定表达细胞株，指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。慢病毒感染-药物筛选法是目前广泛应用的稳转株构建方法，具有高效整合、目标细胞广泛等特点。一．准备及预实验确定细胞系相关信息，需包括如下内容目标细胞系培养条件目标细胞增殖速度支原体污染情况注：为避免慢病毒感染后细胞死
维真稳转株构建流程（二）
平板挑取法 计数100个多克隆稳转株细胞，接种于一个10cm培养盘中；注：尽量吹打均匀，防止细胞聚团。过夜培养后，观察并寻找单个细胞的位置，并在盘底做标记；培养培养2周；注：培养的第一周不要换液，接下来每3-4天换液。待标记处的细胞扩增为肉眼可见的白点，在移液器尖端吸取一点胰酶，缓慢滴至细胞处，待细
知识分享：维真稳转株构建流程
稳转株即稳定表达细胞株，指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。慢病毒感染-药物筛选法是目前广泛应用的稳转株构建方法，具有高效整合、目标细胞广泛等特点。 一．准备及预实验 确定细胞系相关信息，需包括如下内容 目标细胞系培养条件 目标细胞增殖速度 支原体污染情况
转谷氨酞胺酶制备
( l ）工艺流程 MTGase 粗酶粉～MTGase 粗提取液～超滤液～萃取液～反萃取液～浓缩液～冻干粉 ( 2 ）主要步骤 ① MTGase 粗酶液制备称取定量的粗MTGase 粉，用其质量10 倍0.2mol / L KHZPO 4-NaOH 缓冲液（pH 值为6 . 50 ）在4 一
稳定细胞株构建
稳转细胞系（稳定表达细胞株）指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上，使细胞长期稳定表达该基因。稳转细胞株包括多克隆稳转细胞株和单克隆稳转细胞株。慢病毒感染目的细胞后，通过抗性基因筛选得到的细胞株是多个细胞克隆的组合。单克隆细胞株是从多克隆细
电击转感受态的制备
Prepare:200ml LB in a 1L flask1L sterile ddH2O and place in cold room4 50ml conicals chilled on ice10% glycerol (cold)Chilled boxes of 100ul and 1ml p
单克隆筛选的原理
细胞单克隆筛选细胞单克隆筛选是根据细胞所具有的特性将单个细胞从混合的细胞样品中分离出来的一种技术,是抗体制备细胞株优化、稳转细胞株构建、药物靶点筛选等应用中重要的一环,优质的单克隆细胞能够更好地为不同领域科学研究和药物研发提供支持。通俗的讲:就是将混合细胞通过3D打印技术（更精准高效）/直接用96孔
企业为何“不想转”“不敢转”“不会转”？
企业“不想转”“不敢转”“不会转”，资源要素支撑相对不足，高端化、智能化、绿色化、融合化水平参差不齐，转型升级环境尚待优化……7月4日，在“粤商·省长面对面协商座谈会”上，关于传统产业转型升级的讨论热火朝天。 习近平总书记在二十届中央财经委员会第一次会议上强调，“坚持推动传统产业转型升级，不能
血管“稳”－－“拐点”现
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2023/4/499633.shtm编者按随着经济发展和人民生活水平的提高，饮食结构和环境因素发生着改变，我国心脑血管疾病的发病率呈逐年上升趋势，已成为危害国民健康的“头号杀手”。我国科学家立足基础科学研究前沿，在“血管
从样本制备和转印过程提高western－blot的准确性
适当的样本准备样品准备不当，会让你头疼不已，当准备裂解液时：快速工作保持低温环境增加蛋白酶进行分装，避免反复冻融如果要分装样品，请确保等量分装，以便检查是否在此过程中丢失了目标。 如果您分离的样品浓度非常低，请记住，使用高灵敏度底物和较少的裂解液。如果你的裂解液中含有大量的DNA，它就会变得粘稠。
从样本制备和转印过程提高western－blot的准确性
适当的样本准备 样品准备不当，会让你头疼不已，当准备裂解液时： 快速工作 保持低温环境 增加蛋白酶 进行分装，避免反复冻融 如果要分装样品，请确保等量分装，以便检查是否在此过程中丢失了目标。 如果您分离的样品浓度非常低，请记住，使用高灵敏度底物和较少的裂解液
亚稳材料制备国家重点实验室09年度开放课题申请
亚稳材料制备技术与科学国家重点实验室是2006年经国家科技部批准建设的材料类国家重点实验室，主要以极端条件为手段，研究在制备和服役过程中的组织、结构、形态、功能上的亚稳现象，以解决国民经济发展和国防安全中所遇到的关键科学和技术问题为牵引，以亚稳材料基础科学问题、制备技术和服役为主线，立足于基础和应用
不忘初心行稳致远
“改革开放是决定当代中国命运的关键一招，也是决定实现‘两个一百年’奋斗目标、实现中华民族伟大复兴的关键一招。”对于改革开放的历史定位，习近平总书记做了明确论述。“我们现在所处的，是一个船到中流浪更急、人到半山路更陡的时候，是一个愈进愈难、愈进愈险而又不进则退、非进不可的时候。改革开放已走过千山万
湿转和干转，哪个方法更好
对于一个完美的westernblot实验，蛋白在聚丙烯凝胶中根据天然分子量进行分离，蛋白被很好的从凝胶上转移到固相支持物上，然后通过特异性的抗体进行免疫检测。 对于转印来说，使用湿转的方法是比较好的，因为凝胶和膜都能够完全浸没在转印buffer中，在半干转的条件下，转印是在两个电极板之间发
转管培养法与转瓶培养
转管培养法（roller tube culture）是Gey 提出的，实验室常用，为了扩大细胞产量，将试管改用转瓶，故称转瓶培养，其培养方法是一样的，试管或转瓶固定在支加上，倾斜度为5°～10°左右，或将转瓶放在一排排转轴之间，使转瓶随着转轴以每小时6～12 转缓慢转动。细胞贴附于玻璃壁
湿转和干转，哪个方法更好？
对于一个完美的westernblot实验，蛋白在聚丙烯凝胶中根据天然分子量进行分离，蛋白被很好的从凝胶上转移到固相支持物上，然后通过特异性的抗体进行免疫检测。对于转印来说，使用湿转的方法是比较好的，因为凝胶和膜都能够完全浸没在转印buffer中，在半干转的条件下，转印是在两个电极板之间发生，这种类型
Western－转膜时用干转还是湿转效果比较好？
关键看效果怎么细分，干转，速度快，效率稍低，湿转，速度比较慢，转移效率高。但是最主要看蛋白的分子量大小。如果普通分子量为主，干转就挺好的，效率非常高，几分钟就做完了。分子量特别大，又没有其他人的方案做参考，可以先试试湿转。就是几个小时等得比较痛苦。好几个人做的话，真是等到花儿也谢了。至于说效果，不是
做western转膜，用湿转电泳，还是半干转电泳好
半干转要用专门的半干转膜仪，而湿转用电泳仪配附件即可；半干转所需时间较短，但控制不好，中间发热比较大容易把膜和胶烘坏；而湿转耗时较长，尤其对大分子量的蛋白转膜效果较好。相对来讲，还是湿法转膜的实验室多一些。
Western－转膜时用干转还是湿转效果比较好
关键看效果怎么细分，干转，速度快，效率稍低，湿转，速度比较慢，转移效率高。但是最主要看蛋白的分子量大小。如果普通分子量为主，干转就挺好的，效率非常高，几分钟就做完了。分子量特别大，又没有其他人的方案做参考，可以先试试湿转。就是几个小时等得比较痛苦。好几个人做的话，真是等到花儿也谢了。至于说效果，不是
奥密克戎毒株正迅速取代其他毒株成为主要流行毒株
当地时间1月11日，世卫组织发布的新冠肺炎每周流行病学报告指出，1月3日至1月9日期间，全球新增新冠肺炎确诊病例超过1500万例，较前一周增加55%，新增死亡病例与前一周相近。除非洲区域外，各区域新增确诊病例均有所增加，东南亚区域增幅最大，较前一周增加418%。欧洲地区发病率仍为最高。上周上报确
葫芦岛疫情病毒毒株为德尔塔变异株
2月23日0时至24时，辽宁省葫芦岛市新增8例本土新冠肺炎确诊病例。2月8日—23日，葫芦岛市累计报告本土确诊病例167例。今天（2月24日），葫芦岛市召开疫情防控新闻发布会，葫芦岛市卫健委副主任周娇阳在发布会上发布相关疫情防控情况：经对确诊病例样本的病毒基因测序，葫芦岛市本次疫情病毒毒株分型属于德
源株的概念
中文名称源株英文名称ortet定 义植物克隆的亲本植株。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
鹤望兰分株繁殖
鹤望兰又名天堂鸟，为市场紧俏名贵切花。分株法是鹤望兰的最佳繁殖法。一、母株的选择。母株应选分蘖多、叶片整齐；无病虫害的健壮成年植株。用于整株挖起分株的母株一般选择生长3年以上的具有4个以上芽、总叶片数不少16枚的植株。分株后用于盆栽的可选择有较多带根分蘖苗的植株。二、分株时间。无论是栽植于大棚内的。
推动外贸稳规模优结构
如何看待今年外贸发展形势？怎样进一步推动外贸稳规模、优结构，助力企业抓机遇、拓市场？23日举行的国务院政策例行吹风会上，来自商务部、中国人民银行、海关总署有关负责人回应有关热点关切。再出外贸稳规模优结构政策组合拳多重压力下，一季度我国货物贸易进出口总值同比增长4.8%。商务部国际贸易谈判代表兼副部长
碘稳激光器原理
通过碘的吸收来将HeNe激光器的波长稳定到碘的吸收峰上。根据查询仪器网得知，碘稳激光器原理是通过碘的吸收来将HeNe激光器的波长稳定到碘的吸收峰上，是一种精密测量仪器。