AnnexinV实验过程中阳性率偏高问题分析
• 细胞本身活力太差。实验中发现未经诱导凋亡的对照细胞经染色后AnnexinV+/PI+双阳性的细胞比例过高,造成这种结果的原因可能是细胞本身活力太差。建议用台盼蓝染色计算细胞的活力,台盼蓝拒染的细胞应大于95%。若活力偏低低,建议重新复苏细胞,通常刚复苏的细胞至少要传代3 次以后才能进行实验。• 细胞操作不当。贴壁细胞消化过程中反复剧烈吹打导致细胞膜破坏,使得假阳性偏高。• 凋亡诱导时间过长。一般情况下诱导几个小时就可以出现早期凋亡,因此通常不需要处理大于48 小时以上,诱导时间过长会使营养物质耗尽,导致细胞状态差,假阳性结果偏高。......阅读全文
Annexin-V实验过程中阳性率偏高问题分析
• 细胞本身活力太差。实验中发现未经诱导凋亡的对照细胞经染色后AnnexinV+/PI+双阳性的细胞比例过高,造成这种结果的原因可能是细胞本身活力太差。建议用台盼蓝染色计算细胞的活力,台盼蓝拒染的细胞应大于95%。若活力偏低低,建议重新复苏细胞,通常刚复苏的细胞至少要传代3 次以后才能进行实验。
实验过程中Annexin-V染不上色或阳性率偏低问题
• 确定实验中的诱导剂是否能产生凋亡。可通过设定确切凋亡诱导效果的阳性药物对照来排除这一情况。 • 贴壁细胞消化不当。Annexin V 跟PS 的结合需要Ca2+离子,结合液中含有Ca2+,EDTA 的消化会影响染色,建议使用无EDTA 的胰酶,或者消化后用PBS洗涤干净。 • 细胞离心用冷PB
细胞凋亡检测实验——磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin-V法)
实验方法原理磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于细胞膜的内侧,但在细胞凋亡的早期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中(图3)。Annexin-V是一种分子量为35~36 KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。将Annex
细胞凋亡检测实验——AnnexinVFITC-单染法
实验方法原理细胞凋亡或称程序性细胞死亡(Programmed Cell Death ,PCD)是细胞的生命现象之一,它在机体的胚胎发育、组织修复及自身反应性T淋巴细胞的清除等方面起着十分重要的作用。细胞凋亡调节的失控可导致临床各种疾病的发生。如老年性痴呆与神经细胞凋亡过度有关,自身免疫性疾病和肿瘤与
细胞凋亡检测实验——Annexin-V/PI双染色法
实验方法原理细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。A
Annexin-VPI双染法
Annexin V-PI 双染法在细胞凋亡的早期就有细胞膜表面破损发生。破损时凋亡细胞表面的磷脂腺丝氨酸(PS)可以从细胞内膜翻转至细胞的外膜。该过程发生在DNA片段化之前,因而检测PS的表达,能反映早期凋亡。AnnexinV是相对分子质量为35 000大小的Ca2+依赖的磷脂结合蛋白,对PS有很高
Annexin-VEGFP凋亡-说明书
Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒 (Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit) 产品说明: 凋亡是一种程序性的细胞死亡,与细胞的坏死有生化和形态等方面的不同。磷酯酰 丝氨酸(phosphatidylserine, PS)是细胞膜的一种组成成分
Alexa-Fluor®-488-Annexin-V/Dead-Cell-Apoptosis-Kit
实验概要Apoptosis is a carefully regulated process of cell death that occurs as a normal part of development. Inappropriately regulated apoptosis is imp
PCR实验过程中常见的问题分析
开展 PCR 应具有一定的条件。需要一个正规的 pCR 实验室,采集标本、核酸提取、扩增及产物分析应在不同的房间进行;需有严密的防污染措施、假阳性和假阴性结果的质控等。实验者应具有一定的分子生物学理论知识及实验技能,能够及时发现和纠正实验中的问题。目前,我国在 PCR 应用中尤其是在临床诊断中存
Annexin-V-与细胞凋亡的不解之缘
细胞凋亡(Apoptosis)或程序性细胞死亡(Programmed Cell Death)是指细胞为了清除自身不需要的和失去功能细胞的一种高级调控过程。凋亡可以发生在细胞生长、衰老、免疫反应或者当细胞受到疾病和毒害因素的破坏,例如放射性药物和化学化疗等的过程中。凋亡细胞会产生诸多重要改变,包括细胞
关于Annexin-V/-PI-法检测细胞凋亡的介绍
1992 年Fadok 报道在APO 早期位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserin ,PS) 迁移至细胞外侧,这一现象出现在核染色质变性与核体积缩小之前。AnnexinV 是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白,和磷脂有高亲合力,尤其与带负电荷的磷脂如PS 具极强的结合力,
实现蛋白marker与Annexin-V双染的同时检测的实验方法
要用AnnexinV双染法测凋亡,又想同时标记蛋白marker,甚至还有胞内指标,可是PI和7-AAD都不能洗,怎么办? eBioscience的可固定细胞活力染料Fixable Viability Dye帮您完美解决固定、破膜以及洗涤步骤不影响Fixable Viability Dye的染色,
Annexin-V-检测凋亡细胞膜的改变操作流程
一、Annexin V 检测凋亡细胞膜的改变试剂及溶液:A 对于单独购买的试剂: a) 10X Binding Buffer (货号:556454) b) Propidium Iodide(PI,货号:556463):建议与以下试剂同时使用 Annexin V-FITC(货号: 556420
关于细胞凋亡检测—Annexin-V/-PI-法的基本介绍
1992 年Fadok 报道在APO 早期位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserin ,PS) 迁移至细胞外侧,这一现象出现在核染色质变性与核体积缩小之前。AnnexinV 是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白,和磷脂有高亲合力,尤其与带负电荷的磷脂如PS 具极强的结合力,
细胞凋亡检测(AnnexinVFITC-单染法)1
一、实验原理细胞凋亡或称程序性细胞死亡(Programmed Cell Death ,PCD)是细胞的生命现象之一,它在机体的胚胎发育、组织修复及自身反应性T淋巴细胞的清除等方面起着十分重要的作用。细胞凋亡调节的失控可导致临床各种疾病的发生。如老年性痴呆与神经细胞凋亡过度有关,自身免疫性疾病和肿
细胞凋亡检测(AnnexinVFITC-单染法)2
2 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。常用的DNA 特异性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三种染料与 DNA 的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA 的A
流式细胞仪检测细胞凋亡实验Annexin-V/PI双染色法
实验方法原理细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。A
流式细胞仪检测细胞凋亡实验——Annexin-V/PI双染色法
流式细胞仪检测细胞凋亡可应用于:(1)鉴定细胞凋亡形态;(2)准确的进行凋亡细胞的计数;(3)进行特异的定性分析和定量分析。实验方法原理细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种
怎么看annexin-vfitc细胞流式测凋亡图片
在二维散点图上,PI 和 annexin V 分别是X和Y轴。一般认为PI单染的细胞是已经死亡的细胞,annexin V 单染的细胞是凋亡早期的细胞,而双染是凋亡中期的。需要在散点图上先画出4个象限,位置根据无染色的阴性细胞先定出左下象限。Annexin V是一种检测细胞凋亡的试剂,在正常细胞中,磷
流式细胞仪检测细胞凋亡方法(Annexin-V-法)
实验概要Annexin V是一种检测细胞凋亡的试剂,本实验介绍了一个用流式细胞仪检测细胞凋亡的方法(Annexin V 法)。实验原理Annexin V是检测细胞凋亡的灵敏指标之一。它是一种磷脂结合蛋白,可以与早期凋亡细胞的胞膜结合,而细胞质膜的改变是细胞发生凋亡时最早的改变之一。在细胞发生凋亡
流式细胞仪检测细胞凋亡方法(Annexin-V-法)
实验原理 Annexin V是检测细胞凋亡的灵敏指标之一。它是一种磷脂结合蛋白,可以与早期凋亡细胞的胞膜结合,而细胞质膜的改变是细胞发生凋亡时最早的改变之一。在细胞发生凋亡时,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由质膜内侧翻向外侧。Annexin V与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,因而与细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸结合
检测细胞膜成分变化的Annexin-V联合PI法
1、原理:在细胞凋亡早期位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸(PS)迁移至细胞膜外测。磷脂结合蛋白V(Annexin V)是钙依赖性的磷脂结合蛋白,它于PS具有高度的结合力。因此,Annexin V可以作为探针检测暴露在细胞外测的磷脂酰丝氨酸。故利用对PS有高度亲和力的Annexin V,将Annexi
怎么看annexin-vfitc细胞流式测凋亡图片
在二维散点图上,PI 和 annexin V 分别是X和Y轴。一般认为PI单染的细胞是已经死亡的细胞,annexin V 单染的细胞是凋亡早期的细胞,而双染是凋亡中期的。需要在散点图上先画出4个象限,位置根据无染色的阴性细胞先定出左下象限。Annexin V是一种检测细胞凋亡的试剂,在正常细胞中,磷
流式细胞仪检测细胞凋亡方法(Annexin-V-法)
实验原理Annexin V是检测细胞凋亡的灵敏指标之一。它是一种磷脂结合蛋白,可以与早期凋亡细胞的胞膜结合,而细胞质膜的改变是细胞发生凋亡时早的改变之一。在细胞发生凋亡时,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由质膜内侧翻向外侧。Annexin V与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,因而与细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸结合。由
压缩空气露点温度偏高问题维修分析
1.冷干机露点温度高报警空压机调试过程中,上电运行空压机,空压机控制柜故障灯亮,冷干机显示露点温度高,冷干机控制面板显示露点温度为12.5C。冷干机作为空压机后处理核心设备,出现故障导致整个压缩空气气源品质偏高。现场进一步检测发现冷干机压缩机在上电状态下,冷干机压缩机就运转(即使冷干机内部存在故障)
压缩空气露点温度偏高问题维修分析
1.冷干机露点温度高报警空压机调试过程中,上电运行空压机,空压机控制柜故障灯亮,冷干机显示露点温度高,冷干机控制面板显示露点温度为12.5C。冷干机作为空压机后处理核心设备,出现故障导致整个压缩空气气源品质偏高。现场进一步检测发现冷干机压缩机在上电状态下,冷干机压缩机就运转(即使冷干机内部存在故障)
细胞凋亡的检测—早期-磷脂结合蛋白AnnexinV/PI法
实验方法原理实验步骤展开
V锥流量变送器在测量煤气的过程中遇见的问题
现在很多涉及到气体、液体等介质的工业当中,我们都会使用到流量计来测量这些流体的流量值。在如今众多的流量计当中,V锥流量变送器的测量度是比较高的。因此现在有很多行业都在使用着V锥流量变送器。比如我们在生活当中需要常用到的煤气,下面我们就来看看V锥流量变送器在测量煤气的过程中遇见的问题,及解决方法。一、
老年人梅毒血清学试验假阳性率偏高的原因
用ELISA和/或TPPA、TPHA进行的梅毒血清学试验发现,老年人梅毒螺旋体抗体阳性率显著高于一般人群,年龄越大,阳性率越高,而且常常是几种试验方法检测结果同时阳性。 在非高危人群的老年人中梅毒血清学试验的阳性率>3%,阳性结果难以用正在或曾经感染梅毒解释。主要原因可能是: (1)这
流式细胞仪检测细胞凋亡——Annexin-V/PI双染色法
基本原理细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Ann