高亲和力单克隆抗体制备问题及对策
1，细胞长的慢或细胞死亡正常生长情况下，细胞一天传代一次，生长越好，贴壁越多对策：①培养基配方不对；② 接种密度太低，低于10的4次方；③污染了支原体或者其他不明细菌，支原体的现状是出现小黑点；细菌污染是浑浊；霉菌污染是出现白色肉眼可见菌落；不明细菌污染出现砂状平铺背景，视野发暗。④细胞瓶刷洗不干净2，细胞形态异常正常生长情况下，细胞浑圆，透亮，成对数生长，生长越好，贴壁多，悬浮少对策：①培养基配方不对；② 接种密度太低，低于10的4次方；③污染了支原体或者其他不明细菌，支原体的现状是出现小黑点；细菌污染是浑浊；霉菌污染是出现白色肉眼可见菌落；不明细菌污染出现砂状平铺背景，视野发暗。④细胞瓶刷洗不干净单抗制备-细胞融合筛选过程中遇到的问题及对策1，融合率低，阳性孔少①免疫的问题。由于免疫原性不强或者免疫途径不当造成免疫弱，效价低。②融合过程中温度、时间、PEG分子量，作用时间等。③脾细胞是否取出了足够多的细胞，有无组织碎片干扰。......阅读全文
高亲和力单克隆抗体制备问题及对策
1，细胞长的慢或细胞死亡正常生长情况下，细胞一天传代一次，生长越好，贴壁越多对策：①培养基配方不对；② 接种密度太低，低于10的4次方；③污染了支原体或者其他不明细菌，支原体的现状是出现小黑点；细菌污染是浑浊；霉菌污染是出现白色肉眼可见菌落；不明细菌污染出现砂状平铺背景，视野发暗。④细胞瓶刷洗不干净
单抗腹水制备过程中遇到的问题及对策
1，腹水少或者无腹水产生①致敏不正确，不正确的使用致敏剂，或者致敏时间与接种杂交瘤的时间相差太久，一般是7-14天，具体看小鼠的腹部情况。②杂交瘤细胞或者致敏剂的接种位置不正确，没有打到腹腔，而是打到了皮下。③接种的杂交瘤细胞数量太少，太多或者细胞状态不好。一般不50万个细胞左右为宜。④建议使用母鼠
基因疗法的问题及对策
基因治疗终于回来了，今年是人类基因组计划25周年纪念日，并没有人多少人关注这个。但是当曾经在老鼠身上实验的基因疗法现在用在治疗17个月大的Layla Richards的白血病时候，每个人都在关注着。 虽然基因疗法有着巨大潜力，但刚过去的周年纪念日只有寥寥几家媒体进行了报道，这也看出了近四分之
PCR常见问题及对策
PCR常见问题及对策（一）没有得到扩增产物（1）酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。（2）模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，造成DNA脱嘌呤而影响PCR的结果。（3）变性温度是否准确：PCR
大规模的问题及对策2
用基因工程方法将bcl-2基因这种细胞凋亡抑制基因导入细胞，成为众多研究者的选择。bcl-2基因的过量表达能抑制Gln或氧缺乏引起的细胞凋亡，减少细胞特定营养成分的消耗，提高细胞密度和目的蛋白产量,这对于细胞大规模培养具有重大意义。对细胞的这种保护作用依赖于bcl-2等抑制基因的高水平表达。因此，需
大规模的问题及对策1
1、细胞培养环境细胞培养环境中抑制因素的积聚是提高细胞密度的主要限制因素。体外动物细胞培养中氨离子的积累是抑制细胞生长的主要因素之一。氨的积聚使细胞内UDP氨基己糖(UDP-N-乙酰葡糖胺和UDP-N-乙酰半乳糖胺)增加，影响细胞的生长及蛋白的糖基化过程。氨抑制Gln代谢途径，使Asp和Glu消耗增
复合酶存在的问题及对策
目前,在饲料中添加的酶制剂都是由微生物生产的。利用微生物来生产酶制剂的两种方法,一是固体发酵,二是液体发酵。目前国产复合酶大多为固体发酵,生产的复合酶质量不稳定,发酵水平和酶蛋白的产量也较低。另外我国饲料厂颗粒饲料制粒温度普遍较高,温度对复合酶的酶活性有不同程度的影响,降低了酶制剂的使用
单抗制备细胞融合筛选过程中遇到的问题及对策
1，融合率低，阳性孔少①免疫的问题。由于免疫原性不强或者免疫途径不当造成免疫弱，效价低。②融合过程中温度、时间、PEG分子量，作用时间等。③脾细胞是否取出了足够多的细胞，有无组织碎片干扰。④融合前骨髓瘤细胞生长状态是否完好，细胞是否浑圆，透亮，成对数生长。2，单抗亲和力整体低①免疫的问题。免疫途径不
血培养，临床常见问题及对策
血流感染（BSI）是指病原微生物侵入血流，随血行播散的感染，可以表现为菌血症、真菌血症、病毒血症和脓毒症。血流感染是一种全身性感染疾病，严重者可引起休克、弥散性血管内凝血和多脏器功能衰竭。 导管相关性血流感染（CRBSI）是指带有血管内导管或者拔除血管内导管48小时内，患者出现菌血症
高亲和力高纯度零污染的细胞培养级抗体制备指南
单克隆抗体(monoclonal antibody，MAb)，是针对专一的抗原决定簇产生的抗体，单克隆技术又名杂交瘤技术起源于1975年，主要原理是利用产生抗体的B细胞与骨髓瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗体。目前大量制备单抗的方法主要有两种方法：一种是动物体内生产法（腹水制备），在小鼠腹腔内接种
免疫组化常见问题及对策
免疫组织化学是应用抗原和抗体结合的原理，检测细胞内多肽、蛋白质等大分子物质的分布。这种方法的特异性强、敏感度高、发展迅速、应用广泛，成为生物学和医学众多学科的重要研究手段。做免疫组化可能遇到许多问题，大体归纳起来，主要有非特异性着色﹑着色部位不对﹑假阳性﹑无阳性﹑阳性弱五大类以及其他一些小问题。
免疫组化常见问题及对策
免疫组织化学是应用抗原和抗体结合的原理，检测细胞内多肽、蛋白质等大分子物质的分布。这种方法的特异性强、敏感度高、发展迅速、应用广泛，成为生物学和医学众多学科的重要研究手段。做免疫组化可能遇到许多问题，大体归纳起来，主要有非特异性着色﹑着色部位不对﹑假阳性﹑无阳性﹑阳性弱五大类以及其他一些小问题。现在
光合细菌培养基的问题及对策
光合细菌（PSB）是地球上最早出现的原核生物，具有原始不产氧的光能合成体系，它的生态学研究始于十九世纪中叶，100多年来取得了许多成果。 在营养中以碳、氮、磷营养因素为主的基础培养基，使光合细菌具备生命活动的能源和建造有机体的物质基础。还需要一定量的镁、钙、钠及有关微量元素，以保证其生理代谢的正常进
基层食品快速检测存在的问题及对策
一、基层食品快速检测工作中存在的问题 1.快速检测设备功能自身的局限。一是食品快速检测箱检测范围过窄。现行食品快速检测箱的设施功能基本上只限于对蔬菜的农药残留以及部分食品中的二氧化硫等快速检测，不能对流通环节的诸多食品种类进行全覆盖检测。二是配套设施不全，工具简陋，检测准确性不高。三是快速检测
平衡法选择高亲和力噬菌体抗体
[器材和试剂] ● 链霉亲和素磁珠（DynabeadsM280,Dynal） ● 磁性1.5ml试管架（Dynal） ● 磷酸盐缓冲液（PBS） ● 2%脱脂奶粉PBS（2%MPBS） ● 生物素化试剂盒 ● 含0.1为Tween-20的PBS（PBS/Tween） ● 100mmol/L HCI
单克隆抗体的制备
实验方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 将抗原免疫过的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞（P3. 653 )进行融合。用 HAT 选择性培养基筛选杂合的克隆株（杂交瘤细胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 对上清液进行筛査（ELISA 筛査方法必须在融合前就已掌握），然后对理想的杂交瘤细胞加
单克隆抗体制备
1. 免疫动物：三只Balb/c小鼠 2. 佐剂：首先用完全弗氏佐剂（CFA），后用不完全弗氏佐剂（IFA）。 3. 免疫原：蛋白或KLH偶联多肽。每次免疫使用50-100µg免疫原。 4. 免疫：用PBS稀释免疫原，然后与相应的佐剂1：1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂，将该乳剂在小鼠双
单克隆抗体的制备
实验方法原理使用聚二乙醇（PEG ) 将抗原免疫过的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞（P3. 653 )进行融合。用 HAT 选择性培养基筛选杂合的克隆株（杂交瘤细胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 对上清液进行筛査（ELISA 筛査方法必须在融合前就已掌握），然后对理想的杂交瘤细胞加以扩增、冷冻和
单克隆抗体的制备
实验方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 将抗原免疫过的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞（P3. 653 )进行融合。用 HAT 选择性培养基筛选杂合的克隆株（杂交瘤细胞）。融合后 10~14 天用 ELISA 对上清液进行筛査（ELISA 筛
浅谈河道综合治理中的问题及对策
引言 随着我国城镇化发展进程的持续性加快，城市当中人口数量不断增多，同时污染废水的排放也在随之提升，如果无法及时对这一些污染物形成有效控制，必然会导致城市污染问题的持续加重，最终影响城市居民的生活质量以及城市形象。对此，在城市发展进程中，河道的综合治理工作显得非常重要，属于文明城市、和谐社会建
浅谈PCR方法中常见的污染问题及对策
浅谈RT-PCR实验方法中常见污染问题及对策 河南出入境检验检疫局技术中心 李轲 反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以
原子吸收分析测试中常出现的问题及对策
[摘要]本文笔者首先介绍了原子吸收分析测试中常出现的问题，进而提出了相应的解决措施，并在最后着重介绍了灵敏度的问题及解决方法。 1原子吸收分析测试中常出现的问题 1.1蒸馏水的纯度 在分析操作过程中，所用的溶液一般为蒸馏水，即去离子水。尤其在测定常见元素如铁、钙、镁、铜、钠等时，更应
口岸食品卫生监督检测存在问题及对策
近年来，国内外食品安全事故频发，食品安全卫生形势不容乐观。建立食品快速检测机制，有利于检验检疫部门在口岸食品卫生监督中发挥主力军的作用，把好口岸食品安全关，提高应对口岸食物中毒突发公共卫生事件的能力。 为贯彻落实国家质检总局88号令第二十条要求，口岸检验检疫机构相继配备了一定数量的食品卫生
我国环境监测技术存在的问题及对策
当前，随着我国社会经济的高速发展，环境问题逐渐凸显，受到社会和人们的普遍关注，我国为了充分了解和掌握环境的当前状况，采用了多种监测技术，动态跟踪环境实际情况。但是在应用环境监测技术的同时，也存在一些问题，本文针对这些问题进行分析和阐述，并且提出相关对策，确保监测技术的可行性以及合理性，希望给予行
医院检验科感染管理的问题及对策
检验科是医院感染管理的重点部门之一。检验科检验的标本是患者的血液、体液、分泌物、排泄物等。工作人员直接接触这些带有不同种类病原微生物的标本，很有可能造成自身感染甚至交叉感染，并导致病人的医源性感染。因此，加强医院检验科的感染管理十分重要。 1 存在问题 1．1 规章制度不
我国食品安全检测的现状、问题及对策
摘要：近年来，我国食品安全领域问题频发，严重影响着人们的生命健康安全。这就要求检验机构提高检测技术水平以便及早发现食品安全问题，并采取措施将其消灭在萌芽之中。因此，做好食品安全的检验检测工作意义十分重大。本文试从目前我国食品安全检测的现状出发，剖析食品检测过程中存在的诸多问题及原因，并据此提出具
电子天平使用中存在的问题及对策
电子天平是通过作用于物体上的重力来确定该物体质量，并采用数字指示输出结果的计量器具。使用方便快捷，广泛应用在工业生产，食品安全，医疗卫生，以及贸易结算等领域。秤量的准确性直接影响着数据结果的准确性，因而操作人员的正确使用对确保数据结果的准确性非常关键，在实际检测工作中，最常见存在的问题有以下几方
食品检验检测中存在问题及对策探析
摘要：近年来，我国食品安全领域问题频发，严重影响到人民群众的生命健康安全。这就要求检验机构提高检测技术水平以便及早发现食品安全问题，并采取措施将其消灭在萌芽之中。因此，做好食品安全的检验检测工作意义十分重大。本文即试从目前我国食品检验检测存在的诸多问题出发，深入分析问题出现的原因并据此提出具体的
胶体金试纸条常见问题及对策
1 . 胶体金试纸条背景深或者是金残留跑不动？ 原因之一：被标记蛋白复溶液中添加的某种成分不合适。 解决方法：修改复溶液配方。 2. 胶体金试纸条边缘效应如何去除？ 原因之一：金爬速过快或者过慢。 解决方法：对样品垫进行处理。 3. 胶体金标记蛋白时出现死金如何解决？或者是金标记不上？ 原因之一：被
单克隆抗体上清制备实验——大量制备
实验材料目的杂交瘤试剂、试剂盒完全 DMEM-10 培养液（含 5～10 mmol／L HEPES pH 7.2～7.4）仪器、耗材250 ml 无菌锥形离心管转瓶培养装置850 cm2 旋转培养瓶175 cm2 组织培养瓶实验步骤1. 重复基本方案 1 步骤 1，并按 1:10 分传到终体积为 1