用BRET方法研究活细胞中GPCR蛋白相互作用的基本注意事项2
BRET融合结构的生产构成编码BRET融合蛋白包括以下内容：1. 表达Rluc-EYFP融合蛋白的BRET融合结构的阳性对照（见注2）。2. BRET结构的阴性对照：如：单独表达Rluc和EYFP的pRluc, pEYFP，GPCRs对照（非感兴趣的GPCR）和其他融合了Rluc或者EYFP的蛋白，（见注3）。在我们的研究中，我们利用促性腺激素释放激素（GnRH）促甲状腺激素释放激素（TRH）和β2肾上腺素受体，他们都是C末端和Rluc和EYFP结合（见注3）。3. 首个感兴趣的蛋白的BRET供体结构，（C末端（GPCR/Rluc）或者N末端（Rluc/GPCR）标记为Rluc的GPCR的表达）（见注4-6）。4. 第二个感兴趣的蛋白的BRET受体结构（C末端（GPCR/EYFP）或者N末端（EYFP/GPCR）标记为EYFP的GPCR的表达）（见注4-6）。 BRET融合结构的......阅读全文
用BRET方法研究活细胞中GPCR蛋白相互作用的基本注意事项2
BRET融合结构的生产构成编码BRET融合蛋白包括以下内容：1. 表达Rluc-EYFP融合蛋白的BRET融合结构的阳性对照（见注2）。2. BRET结构的阴性对照：如：单独表达Rluc和EYFP的pRluc, pEYFP，GPCRs对照（非感兴趣的GPCR）和其他融合了Rluc或者EYFP的蛋白，
用BRET方法研究活细胞中GPCR蛋白相互作用的基本注意事项3
图2A：测量Rluc表达的发光模块的设置。双击“Read options”对话框下“Measurement”标签左侧的“lumin label”图2A：测量Rluc表 图2B：EYFP表达的荧光模块的设置，双击“Read options”对话框下“Measurement”标签左侧的“fluor l
用BRET方法研究活细胞中GPCR蛋白相互作用的基本注意事项1
简介： BRET已经成功的应用于研究哺乳动物细胞中GPCR同源和异源二聚体以及涉及到受体脱敏作用和交易的受体/β-arrestin相互作用（综述，1）。BRET的显著优势是可以在活细胞中，正确的的位置实时的监测蛋白质和蛋白质之间的相互作用。由于GPCR高度的疏水性和细胞本地化，测量蛋白质之间相互作用
smFRET检测GPCR调控下游蛋白arrestin的构象分布研究获进展
G蛋白偶联受体（GPCR）是目前已知的人类基因组中最大的膜蛋白家族，约30%的临床处方药的直接靶点是GPCR，负责80%左右的跨膜信号转导，参与调控人体中多数病理与生理过程。GPCR主要通过G蛋白及arrestin将细胞外的刺激转变为细胞内信号。近年来，结构生物学研究方法的进步为研究GPCR及其
发现GPCR磷酸化编码机制，创新性的提出“笛子模型”理论
中国科学院生物物理研究所研究员王江云课题组、山东大学基础医学院教授于晓团队与孙金鹏团队，与北京大学教授金长文团队合作，在Nature Communications上在线发表了研究论文Structural studies of phosphorylation-dependent interacti
方案2－细胞裂解液中相互作用蛋白的亲和纯化
实验材料培养的细胞系探针蛋白、重组表达或化学合成的肽探针试剂、试剂盒考马斯亮蓝乙醇胺-HCl磷酸盐缓冲液叠氮化钠裂解缓冲液2 X SDS-PAGE 凝胶上样缓冲液SDS-PAGE 梯度凝胶Na3PO4仪器、耗材水浴锅或电加热块层析柱透析膜凝胶电泳仪微型离心机微量离心管管式混合器解剖刀紫外分光光度计实
均相高通量方法在活细胞GPCR功能性和表面受体...（一）
均相高通量方法在活细胞GPCR功能性和表面受体结合试验中的研究介绍：G蛋白偶联受体（GPCR）是目前已知细胞表面受体家族中最大的一个分支，目前的药物筛选中有40%是针对GPCR进行的。先导化合物的筛选过程中，首先要针对这些潜在药物（化合物）进行疗效的评估（例如在心血管疾病及其它领域），如果想充分了解
两研究组揭示EGFR蛋白在活细胞质膜中的分布规律
2014年7月8日， 国际学术期刊Cell Research在线发表了中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所季红斌研究组、许琛琦研究组与中国科学院长春应用化学研究所王宏达研究组的合作研究论文——"Regulation of EGFR nanocluster formation b
蛋白质间相互作用研究方法2：免疫共沉淀
相互作用在生理上的证实和探索l 通过免疫共沉淀确定结合蛋白1．用磷酸盐缓冲液洗30块10 cm培养板上的适宜细胞。刮去每块板上的细胞到1 ml冰冷的EBC裂解缓冲液中。2．将每毫升细胞悬液转移到微量离心管中，在微量离心机上4℃以最大速度离心15 min。3．收集上清（约30 ml）并加入3
广州健康院发现内涵体上GPCRG蛋白信号转导的分子调控新机制
中国科学院广州生物医药与健康研究院揭示了分选转运蛋白SNX25通过氧化还原依赖的方式调控内涵体GPCR-G蛋白信号转导的分子机制。相关研究成果以Redox-Modulated SNX25 as a Novel Regulator of GPCR-G Protein Signaling from En
内涵体G蛋白信号终止的分子调控机制获揭示
近日，中国科学院广州生物医药与健康研究院研究员徐进新和客座研究员刘劲松团队研究揭示了分选转运蛋白SNX25通过氧化还原依赖的方式调控内涵体G蛋白偶联受体（GPCR）-G蛋白信号转导的分子机制。相关成果在线发表于《氧化还原生物学》（Redox Biology）。 最近十几年来，越来越多的研究表明
内涵体G蛋白信号终止的分子调控机制获揭示
近日，中国科学院广州生物医药与健康研究院研究员徐进新和客座研究员刘劲松团队研究揭示了分选转运蛋白SNX25通过氧化还原依赖的方式调控内涵体G蛋白偶联受体（GPCR）-G蛋白信号转导的分子机制。相关成果在线发表于《氧化还原生物学》（Redox Biology）。SNX25调控GPCR-G蛋白信号转导的
突破！研究团队攻克荧光蛋白和染料在活细胞成像中的局限
近日，我所生物技术研究部分子探针与荧光成像研究组（1818组）徐兆超研究员、苗露副研究员团队通过调控荧光蛋白与荧光染料之间的荧光共振能量转移（Fluorescence resonance energy transfer，FRET），提高了荧光蛋白的光稳定性，并基于化学遗传学策略赋予外源荧光染料遗传编
Cell：阐明活细胞中蛋白质凝缩的新工具
一种利用光来控制活细胞内物质的工具，已经开始为我们解释“蛋白质如何组装成不同的液体和凝胶状固态”，这对于理解许多关键的细胞运转，是至关重要的。延伸阅读：Science：新结构揭示细胞的蛋白质生产机器是如何组装的。 由于极大的复杂性，宿主细胞会同时发生成千上万的化学反应。一些反应发生在专门的隔间
蛋白纯化后，缓冲中的咪唑是否影响细胞测活？
如果你要测活的话，最好要先对你纯化的蛋白进行除盐，去除小分子干扰物。除盐，去除小分子干扰物的方法有很多，这里我就说说适合你的方法。第一，因为你手头上有超滤管，这个东西除了能浓缩蛋白，还有一个很重要的功能就是更换缓冲液，去除小分子。你选用3KD的超滤管，边浓缩边加入你测酶活想选择的缓冲溶液，重复几次的
上海药物所发现GPCR与GPCR激酶相互作用新机制
GPCR（G蛋白偶联受体）已经成为当前最成功的药物靶标之一，迄今已有40%左右的上市药物以GPCR为靶点，因此，在药物发现领域，对GPCR结构及其如何与下游信号通路相互作用的认识与理解越深入，则越有希望开发出更加高效低毒的药物。自GPCR与下游G蛋白和阻遏蛋白复合物晶体结构被成功解析以来，GPC
活细胞蛋白质标记与成像研究获进展
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2023/7/504935.shtm近日，华东理工大学光遗传学与合成生物学交叉学科研究中心杨弋、朱麟勇、陈显军团队在活细胞蛋白质标记与成像研究中取得重要进展，相关研究在《细胞发现》发表。 ?人造荧光蛋白及荧光
化学所在活细胞分子探针研究中取得系列进展
分子识别是生命过程的基础，揭示生物活性分子间识别作用是透彻理解生命过程的重要途径。发展新型识别分子、构筑分子探针，在分子水平上探索生命过程和疾病发生发展机制是现代生化分析领域前沿研究方向之一。 中国科学院化学研究所活体分析化学院重点实验室上官棣华课题组科研人员长期致力于分子探针的开发和分子识别
活细胞的鉴别方法
区分死细胞和活细胞的方法有 ①、活细胞能发生质壁分离而死细胞则不能。②进行培养，活细胞能繁殖，死细胞则不能，光镜下观察有多个细胞。③、进行染色，死活细胞呈现不同的结果④、直接观察细胞结构。
活细胞的鉴别方法
区分死细胞和活细胞的方法有 ①、活细胞能发生质壁分离而死细胞则不能。②进行培养，活细胞能繁殖，死细胞则不能，光镜下观察有多个细胞。③、进行染色，死活细胞呈现不同的结果④、直接观察细胞结构。
2012蛋白质－配体弱相互作用研究的技术与方法国际研讨会
2012 年 10 月30日 (中国， 上海)--专注于提高人类健康及其生存环境安全的全球领先企业珀金埃尔默(PerkinElmer )公司10月参加了由中国生物物理学会分子生物物理专业委员会和美国生物物理学会于14-18 日在北京友谊宾馆举办的2012 蛋白质-配体弱相互作用研究的技术
无需活细胞的蛋白合成新技术
来自美国能源部橡树岭国家实验室（Oak Ridge National Laboratory）的研究人员研发出了一种无需细胞培养，人工合成蛋白质的新系统，这一研究成果公布在12月22日的Small杂志上。 这个生物反应器采用的是一种混合液，其中包含有大肠杆菌细胞提取物，一种绿色荧光蛋白DNA编码
无需活细胞的蛋白合成新技术
来自美国能源部橡树岭国家实验室（Oak Ridge National Laboratory）的研究人员研发出了一种无需细胞培养，人工合成蛋白质的新系统，这一研究成果公布在12月22日的Small杂志上。 这个生物反应器采用的是一种混合液，其中包含有大肠杆菌细胞提取物，一种绿色荧光蛋白DNA编码
活细胞成像用哪种显微镜
活细胞成像可以选择共聚焦显微镜，共聚焦与传统显微镜的原理差别在于照明方式不同：传统显微镜是一次性照明整个视野中的样品，因此可以用眼睛直接观察或者用CCD获取图像，没有时间延迟；而共聚焦显微镜是逐点成像，无法用CCD获取图像，只能用探测器收集每个象素点的信号，再通过软件重构图像，有一定的时间延迟。共聚
武汉病毒所建立研究活细胞内蛋白质互作的新方法
近日，中国科学院武汉病毒研究所/病毒学国家重点实验室胡志红、王曼丽研究团队在蛋白质相互作用的研究方法方面取得新进展，相关研究成果以Mito-docking: A novel in vivo method to detect protein-protein interactions（《线粒体锚定：
LVF光栅在FRET和BRET分析中的优异表现
在多功能酶标仪中，为了分离某一特定波长的单色光我们有两种技术选择——滤光片或者光栅。与光栅相比，滤光片系统往往具有更好的灵敏度，因为滤光片具有更好的透光率和更宽的带宽。而光栅系统的好处是可以提供波长选择的灵活性，不需要购买或安装特定波长的滤光片。尽管如此，很多用户都发现许多应用在光栅系统上达不到理想
利用“无创”技术检测活细胞中荧光蛋白表达（二）
结果波长优化用GeminiEM对DsRed进行波长扫描，以此举例如何进行波长优化。为了检测最大激发波长，我们首先固定发射波长为600nm，然后对发射波长进行扫描。扫描结果显示最大激发波长为556nm(图1)。同样为了检测最大发射波长，我们固定激发波长为535nm，然后扫描发射波长，从而得到584nm
利用“无创”技术检测活细胞中荧光蛋白表达（三）
细胞混合结果在本次实验中，我们在一个96孔板里混合了多种细胞，保证每个孔大约50,000个细胞。因此，如果是1:1混合，那么每种细胞会有25,000个。如果是1:1:1混合，那么每种细胞将有16,700个。实验板分别用480/510nm(AsGFP和ZsGreen的优化结果)和550/588nm(D
利用“无创”技术检测活细胞中荧光蛋白表达（一）
简介在过去的五年中，荧光蛋白在监测体内生物学研究中，起到越来越重要的作用。源于维多利亚多管发光水母中的绿色荧光蛋白(GFP)是最早被我们应用的荧光蛋白，但是随着时间的推移，现在我们可以使用的荧光蛋白种类也越加丰富，包括加强型的变异GFP蛋白、从其他种类水母中发现的荧光蛋白和珊瑚礁蛋白。它们都可以在众
冷冻电镜在GPCR药物发现中的突破性研究
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2024/3/518951.shtm近日，中国科学院上海药物研究所徐华强/段佳团队探讨了冷冻电镜（Cryo-EM）在理解和开发以G蛋白偶联受体（GPCRs）为靶点药物的革命性影响，相关综述发表于《自然评论—内分泌学》。文