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高分辨熔解曲线突变检测

高分辨熔解曲线(High Resolution Melting)技术是近年来兴起的一种全新的突变扫描和基因分型的遗传分析方法。HRM不受突变碱基位点与类型局限,无需序列特异性探针,在PCR结束后直接运行高分辨熔解,即可完成对样品的分析。该方法与其他遗传分型技术相比具有灵敏度高、特异性好、成本低廉、高通量检测的优点,是进行突变检测的迅速、廉价而有效的方法。HRM原理HRM是在PCR基础上通过测定DNA双链熔解曲线变化来检测突变的方法,溶解曲线的变化取决于DNA序列、长度、GC含量,因此,可以通过饱和燃料监控熔解曲线的变化来反映核酸性质的差异,从而对样品进行分析。在双链体的溶解曲线检测时需要添加合适的染料,饱和染料例如SYBR Green在双链解链过程中会发生重排,无法真实反映DNA熔解情况。不适用于需低温解链的样品而且不能检测异源双链体。因此不能用于熔解曲线的检测。而LC Green是一种与DNA有更强的结合位点,对P......阅读全文

农业领域中的应用-高分辨熔解曲线分析技术

高分辨熔解曲线分析技术(High Resolution Melting Curves Analysis)是近年来发展起来的一种检测基因突变和刷选SNP的新方法。这种方法也可以与标记和非标记探针结合对已知位点的突变和SNP进行检测以及用于SSR(STR)等短串联重复分子标记分析。该技术已经被大

多个序列突变的筛查-HRMA(一)

摘要:双链DNA分子转化为两个单链分子,DNA分子变性或熔解用于研究DNA结构和组成已经有多年。最近,新技术的进步提高了这种技术的潜力,尤其是用于DNA序列突变的检测。通过饱和DNA染料的发展和设备的改善,熔解的灵敏度和特异性有了很大的提高(改良的温度精确地结合每个时间单位温度的精确测量)。熔解分析

多个序列突变的筛查-HRMA(二)

突变检测    高分辨熔解曲线分析已用于DNA序列突变的检测,是第一个用于基因分型中的技术[Wittwer等,2003]。简便、廉价、容易使用、高灵敏性和高特异性是它的突出特点,使它成为一种用于基因分型和诊断应用实验室中有吸引力的新工具。在萨普,表S1给出了我们所能找到

LightCycler应用:甲基化分析

主要应用:应用实时荧光PCR技术进行快速准确的DNA甲基化分析DNA甲基化是表观遗传学的重要研究内容之一,它可以在转录水平抑制基因的表达。具体的过程是在胞嘧啶-鸟嘧啶(CpG二核苷酸)的5位碳原子上添加了一个额外的甲基团,形成5-甲基胞嘧啶。CpG二核苷酸密度较高的区域在人体基因组中呈非随机分布于,

高分辨熔解曲线方法检测不同的DNA杂合体(二)

高分辨熔解技术对于区分相同扩增子内的不同的杂合体是必要的。与高分辨率的HR-1分析方法相比,LightCycler产生的熔解曲线并不能保证分离出杂合子。如图1所示,根据各自的4 对Tm值, 每个杂合子描绘出一条独特的熔解曲线。这些独特的熔解曲线的形状通过标准化的温度移位数据,以不同的图形形式表现出来

高分辨率熔解曲线(HRM)分析预混Mix(PCR),能基因筛查吗?

  高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)是一种基于单核苷酸熔解温度不同而形成不同形态熔解曲线的基因分析新技术,具有极高的敏感性,可以检测出单个碱基的差异。 作为一种高效稳健的"post-PCR"技术,它不受突变碱基位置与类

通过温度内标提高高分辨熔解曲线中纯合子检测...(一)

通过温度内标提高高分辨熔解曲线中纯合子检测的灵敏度摘要应用高分辨率熔解曲线技术进行基因分型不仅简单而且有效。基于熔解曲线的分析方法中,探针法是进行基因分型的金标准,能够全面的检测匹配的目的等位基因。小片段扩增法是一种不需要设计探针进行基因分型的方法。由于异源双链的存在,杂合子很容易检测,而这很大程度

HRM甲基化位点检测的灵敏性(一)

引言DNA甲基化是一种重要的表观遗传CpG二核苷酸修饰形式,异常的DNA甲基化模式发生在许多基因启动子的CpG岛,这会增加患癌症的风险。CpG岛高甲基化常导致基因沉默,与癌症、老化、基因印记、X-染色体失活密切相关,此外,全基因组CpG高甲基化中也证实了发生在肿瘤形成的早期。传统的检测甲基化位点的方

高通量、低成本 SNP、突变和甲基化检测方法 ——HRM技术应用

HRM介绍     HRM技术是 high-resolution melting analysis即高分辨熔解曲线分析技术,是近年国外兴起的一种全新的突变扫描和基因分型的遗传分析方法。基于高效稳健的 PCR技术,HRM不受突变碱基位点与类型局限,无需序列特异性探

一种快速有效的基因分型斑马鱼的方法(一)

 为了促进斑马鱼的高通量的基因分型,我们开发了一种新的技术——用高通量熔解分析(HRMA)区分野生、杂合、纯合突变。这种耗时一个小时的技术不需要进行限制性内切酶酶切和琼脂糖凝胶电泳的操作。此技术生成的熔解图的敏感性高,可以检测不明确的PCR产物。我们可以对斑马鱼的三种类型的突变进行可靠的基

HRM甲基化位点检测的灵敏性(二)

两个不同的病人的CpG位点见下表图4:miR-195 CpG岛的150bp扩增区 图5:从4个CLL患者中克隆miR-195可能调控区,使用Qiagen EpiTect Kit进行重亚硫酸盐处理,之后PCR扩增,Lightscanner检测,测序。不同的患者采取不同的甲基化模式扩增(0

高通量、低成本SNP、突变或甲基化检测方法—HRM 技术应用

HRM 介绍HRM 技术是high-resolution melting analysis 即高分辨熔解曲线分析技术,是近年国外兴起的一种全新的突变扫描和基因分型的遗传分析方法。基于高效稳健的PCR 技术,HRM 不受突变碱基位点与类型局限,无需序列特异性探针,在PCR 结束后直接运行高分辨熔解,即

高分辨熔解曲线法HRM实现基因分型

HRM实现基因分型基因分型在动物、植物、微生物的物种、菌种筛查、筛选、缺陷、突变基因的检测,根据个体基因类型实现对诸如癌症治疗、监测等的精准用药,以及消费类基因检测如酒精代谢能力基因检测等等领域有很多应用。通常,基因分型SNP采用荧光探针终点法,检测一个位点需要两个荧光探针,如一个探针的荧光报告基团

采用快速循环荧光定量PCR仪和LightScanner32上的非标记探...

采用快速循环荧光定量PCR仪和LightScanner32上的非标记探针进行MAAB简介高分辨率熔解曲线可以通过扫描PCR的扩增片断来检测杂合体中基因序列的变化。配合使用高分辨的饱和荧光染料,在检测小于400bp的PCR片断的SNP、插入或缺失时的灵敏度可达98%以上。该方法自开发以来,被不断的应用

食品打假新利器 ——最新食品真实性检测技术一览

   发展食品真实性检测技术可以对食品生产者起到威慑作用,是食品安全的重要保障。在不久前举办的2017年食品真实性与溯源技术国际论坛上,知名专家学者分享了多个当下食品科技界最前沿的食品真实性检测技术。本文摘取演讲中的精华部分,以飨读者。  质谱技术 应用广泛 广受认可  食品组学(Foodomics