用一步法从细胞和组织中同时制备DNA、RNA和蛋白质
实验方法原理 同 Chomczynski 和 Sacchi 两人于 1987 年报道的 RNA 快速提取法一样，这种方法包括用含异硫氰酸胍和酚的一种单相液来裂解细胞。加入氯仿产生了第二相（有机相），DNA 和蛋白质在有机相中被抽提，RNA 则被留在上层水相中。实验材料 源细胞或组织试剂、试剂盒 氯仿乙醇异丙醇液氮单相裂解试剂磷酸缓冲盐溶液RNA 沉淀液乙酸钠仪器、耗材 Sorvall H1000 转头或与之相当的转头Sorvall SS-34 转头或与之相当的转头比色杯匀浆器研钵和研杵带螺帽的聚乙烯管水浴实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液氯仿乙醇 异丙醇液氮单相裂解试剂磷酸缓冲盐溶液（PBS), 冰冷RNA 沉淀液（1.2 mol/L NaCl，0.8 mol/L 柠檬酸二钠盐·15H2O（不需要调 pH）乙酸钠（3 mol/L, pH 5.2)2. 细胞和组织源细胞或组织3. 离心机和转头Sorvall H1000......阅读全文
用一步法从细胞和组织中同时制备DNA、RNA和蛋白质
实验方法原理 同 Chomczynski 和 Sacchi 两人于 1987 年报道的 RNA 快速提取法一样，这种方法包括用含异硫氰酸胍和酚的一种单相液来裂解细胞。加入氯仿产生了第二相（有机相），DNA 和蛋白质在有机相中被抽提，RNA 则被留在上层水相中。实验材料 源细胞或组织试剂、试剂盒 氯仿
用一步法从细胞和组织中同时制备DNA、RNA和蛋白质
实验方法原理 同 Chomczynski 和 Sacchi 两人于 1987 年报道的 RNA 快速提取法一样，这种方法包括用含异硫氰酸胍和酚的一种单相液来裂解细胞。加入氯仿产生了第二相（有机相），DNA 和蛋白质在有机相中被抽提，RNA
用一步法从细胞和组织中同时制备DNA、RNA和蛋白质
同 Chomczynski 和 Sacchi 两人于 1987 年报道的 RNA 快速提取法一样，这种方法包括用含异硫氰酸胍和酚的一种单相液来裂解细胞。加入氯仿产生了第二相（有机相），DNA 和蛋白质在有机相中被抽提，RNA 则被留在上层水相中。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方
组织和细胞RNA的制备
一、 组织和细胞总RNA提取：异硫氰酸胍法（一）试剂准备1．CSB缓冲液：42mM柠檬酸钠；0.83% N-lauryl sarcosine(十二烷基，N甲基甘氨酸钠)；0.2 mM β-巯基乙醇。2．变性液：异硫氰酸胍（终浓度 4 M）25g、CSB缓冲液 33ml，混合直至完全溶解，可在65℃助
从组织和培养细胞中制备轻线粒体组分
试剂和器材： 1. 匀浆介质：0.25mol/L蔗糖溶液、1mmol/L乙二胺四乙酸、10mmol/L Hepes-NaOH，pH7.4；2. 按要求向溶液加入蛋白酶抑制剂；3. 磷酸盐缓冲液；4. 低速冷冻离心机，配有30—40ml离心管的吊桶式离心转子；5. 高速离心机，配有30—40ml离心管
利用－Trizol－从植物组织中制备－RNA－实验
实验材料 植物组织试剂、试剂盒 Trizol氯仿异丙醇乙醇DEPC处理过的水液态N2NaCl柠檬酸钠仪器、耗材 转子-定子均化器研钵和杵圆锥形管实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂Trizol(Invitrogen)氯仿异丙醇乙醇，70%，用焦碳酸二乙酯（DEPC) 处理过的水配制DEPC 处
利用－Trizol－从植物组织中制备－RNA－实验
下述方案是经修改过的 Trizol 方案，用于从植物组织中分离 RNA，其中增加了一个高盐异丙酵沉淀步骤，以选择性地沉淀 RNA，而将多聚糖和蛋白多糖留在溶液里。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。实验材料植物组织试剂、试剂盒Trizol氯仿异丙醇乙醇DEPC处理过的水液态
利用－Trizol－从植物组织中制备－RNA－实验
实验材料 植物组织 试剂、试剂盒 Trizol 氯仿 异丙醇 乙醇
从石蜡包埋固定的组织中制备－RNA－实验
该方案是由 Godfrey 等改进 Fisher 的方案发表的。此前已有从固定组织中纯化 RNA 的方案发表。Ambion 和 Roche 发明了从石蜡包埋的组织中纯化 RNA 的商品化试剂盒。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。实验材料石蜡包埋的组织样品试剂、试剂盒甲酰胺
从石蜡包埋固定的组织中制备－RNA－实验
实验材料 石蜡包埋的组织样品 试剂、试剂盒 甲酰胺 消化缓冲液 乙醇 肝糖
从石蜡包埋固定的组织中制备－RNA－实验
实验材料 石蜡包埋的组织样品试剂、试剂盒 甲酰胺消化缓冲液乙醇肝糖异丙醇苯酚 氯仿蛋白酶 KTrizol二甲苯仪器、耗材 微量离心管恒温箱实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂去离子化的甲酰胺焦碳酸二乙酯（DEPC) 处理过的水消化缓冲液（lmol/L 异硫氰酸胍,25 mmol/Lβ-巯基乙醇
组织和细胞RNA的制备——（异硫氰酸胍法）
[试剂主要]1．CSB缓冲液：42mM柠檬酸钠；0.83% N-lauryl sarcosine(十二烷基，N甲基甘氨酸钠)；0.2 mM β-巯基乙醇。2．变性液：异硫氰酸胍（终浓度 4 M）25g、CSB缓冲液 33ml，混合直至完全溶解，可在65℃助溶。4℃保存备用。3．2 M乙酸钠：pH 4
TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质
TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用，与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质.TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA
TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质
TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用，与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质.TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA
FFPE组织样品的DNA和RNA纯化
福尔马林固定后石蜡包埋的组织简称为FFPE样品。将组织在 4–10% 的福尔马林中迅速固定。 固定时间限制在 14–24 小时 (越长的固定时间将越容易导致DNA的片段化，对下游实验不利)。将固定组织彻底脱水 (彻底脱去福尔马林残余，因为其阻碍蛋白酶K的作用)。 纯化DNA时，使用新鲜从石蜡块上切下
TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质（一）
TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用，与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质.TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA
TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质3
DNA污染：A. 样品匀浆时加的试剂量太少。B.样品中含有有机溶剂（如乙醇，DMSO等），强缓冲液或碱性溶液。蛋白聚糖和多糖污染：沉淀RNA的过程中作以下改进可去除这些污染，步骤7中，每使用1ml TRIzol在水相中加0.25ml异丙醇和0.25ml高盐溶液（0.8M柠檬酸钠和1.2MNaCl）混
TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质2
5. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。6. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1mlTRIzol加入0
TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质4
注意事项：1. DNA在中间层和有机相中时可在2～8℃保存过夜。2.DNA沉淀在75%乙醇中2～8℃可保存几个月。3.DNA在8mM NaOH溶液中4℃可放置过夜，如长期保存需用HEPES调节pH至7～8并且加EDTA至1mM，可置于4℃或-20℃长期保存。常见问题分析：得率低：A.样品匀浆和裂解的
TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质（二）
DNA的分离准备试剂：乙醇0.1M柠檬酸钠（含10%乙醇）、 75%乙醇、8mM NaOH操作步骤：1. 样品加氯仿分层后，移去上层水相，用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。每使用1mlTRIzol加0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3分钟，2～8℃不超过2000×g离心5分钟。2. 移去上清，（如需
纯化RNA实验——从组织中纯化总RNA
实验材料组织试剂、试剂盒RNA 抽提缓冲液氯仿实验步骤1. 从动物取下组织，直接进行第 2 步或在液氮中快速冷冻新鲜解剖的组织。冷冻后的组织可以贮存在 -70℃。2. 组织（0.05~0.3 g）在 2.0 ml RNA 抽提缓冲液中匀浆。3. 每管加 200 μl 氯仿，混合均匀，冰浴 15 分钟
强证据：生命史前，DNA和RNA同时都有了
这项发表在Nature Chemistry杂志上的新研究表明，地球上第一批生物可能同时使用了RNA和DNA，就像现在所有的细胞生命形式一样。而主流的科学观点是——“RNA世界”假说——认为早期生命形式纯粹基于RNA，后来才进化成制造和使用DNA。 “这些新发现表明，化学家在研究地球生命起源的过
从肝脏组织中制备细胞核实验
实验材料 大鼠 试剂、试剂盒 裂解缓冲液 浓蔗糖溶液
从肝脏组织中制备细胞核实验
实验材料大鼠试剂、试剂盒裂解缓冲液浓蔗糖溶液仪器、耗材超速离心机组织研磨器实验步骤1. 配制裂解缓冲液和浓蔗糖溶液（PMSF 在使用前添加），冰上放置。裂解缓冲液：0.25 mol/L 蔗糖网织红细胞标准缓冲液（RSB）0.25 mol/L 蔗糖（超级纯）10 mmol/ Tris-HCl (pH7
用酸性酚硫氰酸胍氯仿提取法纯化组织和细胞中的－RNA
实验方法原理 在提取过程的第一阶段细胞的 RNA 酶应尽快灭活。一旦内源的 RNA 酶被破坏，RNA 受损的可能就大大降低，而纯化的过程就可以按合适的速度进行。实验材料 细胞和组织试剂、试剂盒 氯仿乙醇异丙醇液氮苯酚磷酸缓冲盐溶液 PBS乙酸钠溶液 D（变性液）仪器、耗材 比色杯组织匀浆器研棒和研钵
用酸性酚硫氰酸胍氯仿提取法纯化组织和细胞中的－RNA
在提取过程的第一阶段细胞的 RNA 酶应尽快灭活。一旦内源的 RNA 酶被破坏，RNA 受损的可能就大大降低，而纯化的过程就可以按合适的速度进行。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理在提取过程的第一阶段细胞的 RNA 酶应尽快灭活。一旦内源的 RNA 酶被破坏，RNA 受损的
用酸性酚硫氰酸胍氯仿提取法纯化组织和细胞中的－RNA
实验方法原理 在提取过程的第一阶段细胞的 RNA 酶应尽快灭活。一旦内源的 RNA 酶被破坏，RNA 受损的可能就大大降低，而纯化的过程就可以按合适的速度进行。 实验材料
从微量样本中同时提取mRNA和天然蛋白
有时，细胞就是那么少，但又要开展多项分析，着实让人为难。丹麦哥本哈根大学的研究人员开发出一种新方法，能从微量的样本中同时提取mRNA和天然蛋白。这项成果发表在《BioTechniques》5月刊上。 在生物学研究的许多领域，样本量往往很有限，特别是人体细胞和组织，如卵泡和胚胎干细胞。但是，研究
动物组织中DNA的制备
（一）原 理DNA是所有生物体的基本组成物质。真核生物DNA主要存在于细胞核中。制备DNA时应将细胞核膜打破方能释放出来。细胞中的DNA和RNA分别与蛋白质相结合，形成脱氧核糖核蛋白及核糖核蛋白。在细胞破碎后，这两种核蛋白将混杂在一起。因此，要制备DNA首先要将这两种核蛋白分开。已知这两种核蛋白在不
从组织培养细胞中制备粗微体实验
实验材料细胞试剂、试剂盒环己酰亚胺匀浆缓冲液仪器、耗材培养皿实验步骤1. 培养基中加入环己酰亚胺（溶于蒸馏水，贮存液浓度 0.1 mol/L，-20℃ 保存。如果不溶，试着加热到 40℃ 以帮助溶解）（终浓度 10 μmol/L)，37℃ 保温 5~10 分钟。2. 培养皿从 37℃ 转移到冷室，立