模板DNA的准备、实验的组织和PCR扩增实验
可以用各种方法分离基因组 DNA, 主要决定于初始材料的种类（血液还是组织）和数量。所有制备的 DNA 都应该储存于 pH8.0 的 TE 缓冲液中并装在灭菌的 Eppendorf 管内。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒PCR 缓冲液ddH20基因组 DNAdNTP寡核苷酸引物仪器、耗材离心机和转子丙烯酸防护板过滤阻挡吸头多道移液器PCR 仪托盘 固定器装置底座管盖小管实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂含 15 mmol/LMgCl2 的 10XPCR 缓冲液 (GeneAmpPCR 缓冲液 I，AppliedBiosystems)灭过菌的 ddH202. 酶和酶缓冲液TaqDNA 聚合酶，(AppliedBiosystems 或 Invitrogen)3. 核酸和寡核苷酸基因组 DNA10 mmol/L dNTP(GeneAmpPCRdNTP 混合物，AppliedBi......阅读全文
模板－DNA－的准备、实验的组织和－PCR－扩增实验
试剂、试剂盒 PCR 缓冲液ddH20基因组 DNAdNTP寡核苷酸引物仪器、耗材 离心机和转子丙烯酸防护板过滤阻挡吸头多道移液器PCR 仪托盘 固定器装置底座管盖小管实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂含 15 mmol/LMgCl2 的 10XPCR 缓冲液 (GeneAmpPCR 缓冲液
模板－DNA－的准备、实验的组织和－PCR－扩增实验
试剂、试剂盒 PCR 缓冲液 ddH20 基因组 DNA dNTP 寡核苷酸引物 仪器、耗材
模板－DNA－的准备、实验的组织和－PCR－扩增实验
可以用各种方法分离基因组 DNA, 主要决定于初始材料的种类（血液还是组织）和数量。所有制备的 DNA 都应该储存于 pH8.0 的 TE 缓冲液中并装在灭菌的 Eppendorf 管内。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒PCR 缓冲液ddH20基因组 DNA
用于－PCR－的模板－DNA－制备实验
实验方法原理 实验步骤 1. 10 mm 厚石蜡切片 10～15 张，置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。2. 脱蜡 二甲苯 1200 μl，9000 r/min，8 min×3。3. 脱水无水乙醇 1200 μl，9000 r/min，5 min×3。4. 打开 Eppendor
用于－PCR－的模板－DNA－制备实验
酚-氯仿法提取石蜡组织中 DNA 改进的石蜡切片 DNA 提取方法 直接法（DNA 免提法） 冰冻片 含血标本 胸腹水或尿液
差异－DNA－的－PCR－扩增实验
实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂dNTP 溶液（包含所有 4 种 dNTP，各 10 mmol/L)2. 酶和酶缓冲液PCR 反应缓冲液，10X聚合酶混合液，50X(Advantage2，Clontech，或相当产品）3. 核酸和寡核苷酸DNA 样品（即方案 2 第 16 步中的各消减样品
差异－DNA－的－PCR－扩增实验
实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂dNTP 溶液（包含所有 4 种 dNTP，各 10 mmol/L)2. 酶和酶缓冲液PCR 反应缓冲液，10X聚合酶混合液，50X(Advantage2，Clontech，或相当产品）3. 核酸和寡核苷
差异－DNA－的－PCR－扩增实验
在本方案所描述的反应中，差异 DNA 被选择性地扩增。每个实验至少应该有 4 个反应：①已消减的检测 DNA;②未消减的检测者对照（1-c);③反向消减的检测 DNA;④反向未消减的对照（2-c)。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂
高GC比模板的PCR扩增
PCR条件的优化是一个麻烦耗时的过程，涉及到温度、时间、镁离子、引物、dNTP、Taq酶、模板等多个因素的调整。一般来说利用热启动，比如Platinum Taq DNA聚合酶（Invitrogen）可以达到更高的特异性，降低对镁离子浓度的依赖，并且有利于提高“问题模板”的产量。然而，传统的PCR条件
高GC比模板的PCR扩增
PCR条件的优化是一个麻烦耗时的过程，涉及到温度、时间、镁离子、引物、dNTP、Taq酶、模板等多个因素的调整。一般来说利用热启动，比如Platinum Taq DNA聚合酶（Invitrogen）可以达到更高的特异性，降低对镁离子浓度的依赖，并且有利于提高“问题模板”的产量。然而，传统的PCR条件
高GC比模板的PCR扩增
PCR条件的优化是一个麻烦耗时的过程，涉及到温度、时间、镁离子、引物、dNTP、Taq酶、模板等多个因素的调整。一般来说利用热启动，比如Platinum Taq DNA聚合酶（Invitrogen）可以达到更高的特异性，降低对镁离子浓度的依赖，并且有利于提高“问题模板”的产量。然而，传统的PCR条件
PCR扩增模板和抗体可变区基因的扩增
PCR 扩增模板和抗体可变区基因的扩增 如果构建Fab抗体库,必需利用RT-PCR获取抗体基因;构建ScFv抗体库,既可以DNA作模板,也可以cDNA作模板。本室在构建小鼠ScFv抗体库过程中,主要采用DNA作为扩增模板。 【材料和试剂】（1）PCR仪（2）Taq酶（3）氯仿（4）琼脂糖 【
用于－PCR－的模板－DNA－制备实验——冰冻片
实验步骤1. 将 10 μl 冰冻切片直接放入含组织裂解液的离心管中。2. 无菌尖头刀片刮下，放入 300～900 μl 组织裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl，封口膜封口，置 55℃ 3 h 以上。3. 其间用指轻弹离心管以利裂解。若有沉淀，再加入 5～10 μ
用于－PCR－的模板－DNA－制备实验——含血标本
实验步骤1. 3 ml 外周血或 1 ml 骨髓液放入含 50 μl 0.5mol/L EDTA 的无菌离心管（15 ml 管）中。2. 2000 r/min 离心 10 min。吸去血浆，用指弹匀剩余的有核细胞和红细胞，加入红细胞溶解液 10 ml 并混匀，常温下放置 30 min。红细胞溶解液配
PCR扩增DNA（PCR－Amplify－DNA）实验原理、材料和操作步骤
【实验原理】聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）是一种体外 DNA扩增技术，1985年由Mullis等人创立。该技术能在几小时的实验操作中，将人为选定的一段DNA扩增几百万倍，具有灵敏度高、特异性强、操作简便和应用广泛等优点，目前已成为分子生物学及基因工程中极为
用于PCR的模板DNA制备实验——直接法（DNA－免提法）
实验步骤1. 标本太少时，可将一张石蜡切片经脱蜡，水化，蒸馏水清洗，无菌蒸馏水浸泡，取出晾至半干。2. 加入 20～80 μl 直接裂解液中，加 20 mg/ml 蛋白酶 K 0.2～1 μl，放置 55℃ 裂解 3 h 以上；100℃10 min 灭活蛋白酶 K；10000 r/min 离心 10
用于－PCR－的模板－DNA－制备实验——胸腹水或尿液
实验步骤1. 标本 10 ml 以上，2000 r/min 离心 10 分钟，倒去上清液。用指弹匀沉淀物，加入适量组织裂解液，37℃ 下放置半小时以上。2. 无菌尖头刀片刮下，放入 300～900 μl 组织裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl，封口膜封口，置 55
用于PCR的模板DNA制备实验——改进的石蜡切片－DNA－提取方法
实验步骤1. 5 μm 厚的石蜡切片 5 至 10 张贴在干净的载玻片上，常规烘片，脱蜡，水化，蒸馏水清洗，无菌蒸馏水浸泡，取出晾至半干。2. 无菌尖头刀片刮下，放入 300～900 μl 组织裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl，封口膜封口，置 55℃ 3 h 以
基因的PCR扩增实验扩增不出DNA条带是什么原因
可能有很多原因，最常见的原因是1.模板不干净，2.引物设计不当，3.退火温度过高，等等
用于PCR的模板DNA制备实验——酚氯仿法提取石蜡组织中DNA
模板 DNA 质量直接影响 PCR 结果，是 PCR 成功的关键之一。根据其检测对象（组织细胞材料）的不同，有不同的制备方法，常用的材料有石蜡切片、冰冻切片、血细胞、胸腹水等。实验步骤1. 10 mm 厚石蜡切片 10～15 张，置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。2. 脱蜡 二甲
DNA和RNA靶序列的原位PCR扩增实验
实验材料 样品试剂、试剂盒 双氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl仪器、耗材 加湿盒热循环仪实验步骤 1. 将载有固定样品的载玻片置105℃加热块上5~120 s。 2. 载玻片放入含0.3%H2O2中，于37℃或室温温育过夜，以灭活内源性过氧化物酶活性，然后以
DNA和RNA靶序列的原位PCR扩增实验
原位PCR是Hasse等于1990年建立的技术，就是在组织细胞里进行PCR反应，它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点，是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。实验材料样品试剂、试剂盒双氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl仪
PCR扩增分离目的DNA片段
一、目的了解多聚合酶链反应DNA 扩增技术的基本原理和实验应用，掌握PCR反应基本技术。二、原理PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应是1986 年由Kallis Mullis 发现。这项技术已广泛地应用于分子生物学各个领域，它不仅可用于基因分离克隆和核酸序列分
制备DNA测序模板实验
制备单链M13噬菌体DNA 小量裂解物中制备λ噬菌体DNA 双脱氧测序的双链质粒DNA的碱变性 实验材料 大肠杆菌
制备DNA测序模板实验
实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 LBTEM13聚乙二醇容易让顶层琼脂乙酸钠乙醇仪器、耗材 巴斯德吸管试管离心机实验步骤 1. 如果起始用M13复制型DNA或M13单链DNA，以0.5 ng 重组M13mp复制型DNA或5~10 ng 单链DNA转化40 μl 感受态大肠杆菌DH5αF'株
利用血清筛选噬菌体文库PCR扩增的模板
[器材和试剂] ●MicroAmp反应管（PerkinElmer） ●洗脱缓冲液（20mmol/LTris—ClpH8．5，2mmol/LEDTA，1％TritonX—100） ●GeneAmp9600PCR仪（PerkinElmer） ●正向引物：5’—AGAGATTA
多重－PCR－扩增实验
试剂、试剂盒 Taq 聚合酶溶于水的 DNA引物仪器、耗材 热循环仪实验步骤 一、材料1. 酶和酶缓冲液Taq 聚合酶许多 Taq 聚合酶都可以用；作者发现 Roche 公司的 Taq 聚合酶可以满足大多数需要. 如果需要提高PCR 产物的特异性，应该使用热启动聚合酶。使用 Tag 聚合酶本身附带的
多重－PCR－扩增实验
多重PCR扩增实验可以用于：（1）在同一PCR反应管内同时检出多种病原微生物，或对有多个型别的目的基因进行分型，特别是用一滴血就可检测多种病原体；（2）多重PCR很适宜于成组病原体的检测，如肝炎病毒，肠道致病性细菌，性病，无芽胞厌氧菌，战伤感染细菌及细菌战剂的同时侦检；（3）多种病原体在同一反应管内
PCR基因扩增实验
[实验目的]通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术。[实验原理]多聚酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）的原理类似于DNA的天然复制过程。在待扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增2n倍。1．变性：加
多重－PCR－扩增实验
实验方法原理 多重PCR（multiplex PCR），其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同。一般PCR仅应用一对引物，通过PCR扩增产生一个核酸片段，主要用于单一致病因子等的鉴定。重PCR的特点有：①高效性在同一PCR反应管内同时