TRlzol试剂一步分离RNA实验

实验方法原理 TRIzol 试剂是分离细胞和组织总 RNA 的即用型试剂,该试剂含有酚和硫氰酸胍单相溶液是 Chomczynski 和 Sacchi 进一步分离 RNA 方法的进一步改进。在匀浆或裂解样本过程屮,TRIzol 试剂不仅可裂解细胞,而且可保持 RNA 的完整。加入氯仿后离心,溶液则分为水相和有机相,RNA 绝大部分保留于水相,RNA 转到水相后,用异内醇沉淀以获的 RNA,移去水相后,样本中的 DNA 和蛋白质吋用连续沉淀获得。用乙醇沉淀吋在中间相获得 DNA. 异丙醇沉淀可在有机相获得蛋白质。该技术适于在人、动物、植物、细菌少量组织(50〜l00 mg) 和细胞(5X104 )以及大量组织(≥lg) 和细胞(5X107) 中分离 RNA,效果很好,整个过程可在 l h 内完成。用 TRIzol 试剂分离的总 RNA 没冇蛋白质和 DNA 的污染,可用于 Morrhernblot 分析、斑点......阅读全文

TRlzol-试剂一步分离-RNA-实验

            实验方法原理 TRIzol 试剂是分离细胞和组织总 RNA 的即用型试剂,该试剂含有酚和硫氰酸胍单相溶液是 Chomczynski 和 Sacchi 进一步分离 RNA 方法的进一步改进。在匀浆或裂解样本过程屮,TRIzol 试剂不仅可裂

TRlzol-试剂一步分离-RNA-实验

实验方法原理 TRIzol 试剂是分离细胞和组织总 RNA 的即用型试剂,该试剂含有酚和硫氰酸胍单相溶液是 Chomczynski 和 Sacchi 进一步分离 RNA 方法的进一步改进。在匀浆或裂解样本过程屮,TRIzol 试剂不仅可裂解细胞,而且可保持 RNA 的完整。加入氯仿后离心

TRlzol-试剂一步分离-RNA-实验

实验方法原理TRIzol 试剂是分离细胞和组织总 RNA 的即用型试剂,该试剂含有酚和硫氰酸胍单相溶液是 Chomczynski 和 Sacchi 进一步分离 RNA 方法的进一步改进。在匀浆或裂解样本过程屮,TRIzol 试剂不仅可裂解细胞,而且可保持 RNA 的完整。加入氯仿后离心,溶液则分为水

RNA分离与分析实验_分离RNA

实验材料标记细胞试剂、试剂盒乙酸缓冲液仪器、耗材漩涡器实验步骤1. 收获标记细胞。2. 小心处置上清液,用含 0.3% SDS 的 10 mmol/L 乙酸缓冲液悬浮细胞沉淀,每 1 ml 压积细胞用 10 ml 缓冲液。3. 于室温用漩涡器振荡裂解细胞。4. 加等体积的水饱和酚,充分混匀,于 60

RNA分离与分析实验

实验材料 标记细胞试剂、试剂盒 乙酸缓冲液仪器、耗材 漩涡器实验步骤 1. 收获标记细胞。2. 小心处置上清液,用含 0.3% SDS 的 10 mmol/L 乙酸缓冲液悬浮细胞沉淀,每 1 ml 压积细胞用 10 ml 缓冲液。3. 于室温用漩涡器振荡裂解细胞。4. 加等体积的水饱和酚,充分混匀,

RNA分离与分析实验

暂未评分点评实验,有机会获丁当奖励 +收藏                                                    1人收藏RNA分离与分析实验标签:                                    RNA                

总RNA提取实验——一步法

实验材料RNA试剂、试剂盒乙酸钠氯仿异戊醇异丙醇乙醇SDS酚仪器、耗材离心机分光光度计摇床实验步骤1.  组织来源材料:100 ng 组织加1 ul 变性液,在玻璃Teflon匀浆器中将其匀浆。2.  培养细胞:离心弃悬浮细胞培养液或倒去单层培养细胞培养液(不需用生理盐水洗涤),每107细胞加入1

植物RNA的分离(总RNA的分离和mRNA的分离)

1. 总RNA的分离总RNA分离的方法很多,常采用的是异硫氰酸胍和b-巯基乙醇这两种RNase 抑制剂来抑制RNase的活性,同时,异硫氰酸胍与十二烷基肌氨酸钠(sarcosyl)共同作用可以破坏核蛋白复合体,使RNA顺利地解脱出来溶进缓冲液。由于RNA在碱性条件下不稳定,因而在整个提取过程中体

动物RNA提取实验——Trizol试剂提取法

实验方法原理Trizol试剂是一个包含酚、异硫氰酸胍和SDS的单相酸性溶液,其在裂解细胞的同时抑制RNase的活性,随后加入氯仿,酚会大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同,造成DNA分布在下层的氯仿酚溶液中,RNA则分布在上层的水相中,最后用异丙醇沉淀水相中的RNA,并用70

RNA凝胶电泳试验所需实验试剂

  1、0.1%DEPC水:200ml双蒸去离子水加0.2mlDEPC焦炭酸、二乙酯混匀,室温放置过夜,高压灭菌。  2、10x电泳缓冲液:吗啉代丙烷磺酸(MOPS)0.4mol/L(pH 7.0);NaAc 0.1mol/L;乙二胺四乙酸(EDTA) 10mmol/L;  3、50mL变性琼脂糖凝

动物RNA提取实验——SV总RNA试剂盒提取法

动物RNA提取可用于:(1)研究生物体基因调控机制;(2)分子克隆和基因表达以获得该性状基因;(3)可以对特定的基因表达进行定量的检测,从分子水平精确的了解细胞生命活动的规律。实验方法原理SV Total RNA Isolation System (SV 总RNA 纯化系统)可在1小时内从组织、培养

RNA分离与分析实验_用丙烯酰胺尿素凝胶纯化RNA

实验材料RNA试剂、试剂盒TBE 缓冲液丙烯酰铵溶液过硫酸铵水溶液RNA 染色液仪器、耗材玻璃板实验步骤1. 准备下列溶液:TBE 缓冲液:Tris 碱 54 g,硼酸 27.5 g,0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0)  20 ml,溶解并加水至 1000 ml。当发现贮存液有白色沉淀

分离植物总RNA

实验概要认识真核生物RNA的组成及分离的原理;学习RNA提取过程中抑制RNA酶活性的方法。实验原理真核生物的RNA包括rRNA、tRNA和mRNA。一个典型的真核细胞约含有10-5~10-6mg的RNA,其中80-85%为rRNA,其余15-20%主要由各种低分子量RNA组成(如tRNA、核内小分子

分离纯化总RNA

1)      用酸性酚-硫氰酸胍-氯仿提取纯化组织和细胞中的RNA1.      选取从组织细胞或细胞中提取RNA的适宜方法组织a.       分离组织并立即置于液氮中。b.      将约100 mg冰冻组织含液氮的研钵中,用研棒研磨。研磨过程中可加入液氮使组织保持冰冻状态。c.       

利用-ConcertPlant-试剂从植物组织中纯化-RNA-实验

实验材料 植物组织试剂、试剂盒 Concert Plant RNA试剂NaCl氯仿异丙醇乙醇DEPC处理过的水实验步骤 一、材料1.缓冲液、溶液和试剂ConcertPlantRNA试剂(Invitrogen),4°C预冷NaCl,5mol/L(无RNA酶)氯仿异丙醇乙醇,75%,用DEPC处理过的水

利用-ConcertPlant-试剂从植物组织中纯化-RNA-实验

以下概述的是 ConcertPlant 试剂(Invitrogen) 所附带的方案。该方案不是以酚为基础的,但需要加氯仿。该试剂用于多种植物的组织中分离 RNA, 包括蓝叶云杉针、马铃薯块茎、玉米种子和棉花叶。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。实验材料植物组织试剂、试剂盒

总RNA提取实验——试剂盒快速提取法

总RNA提取可以:(1)获得高纯度、高质量的总RNA;(2)可以满足生物学下游实验Northern Blot、核酸酶保护实验、RT-PCR、qRT-PCR 和阵列分析所需。实验方法原理一些公司推出的总RNA 提取试剂盒,可以用来制备高质量的可用于建库的RNA 。该总RNA 纯化系统采用两种著名的RN

动物肝DNA提取实验中除去RNA的试剂

对于动物DNA/RNA提取实验有一些经验,希望我的回答可以帮到你。在动物肝DNA提取实验中,通常采用的试剂是三氯醋酸(Trizol)试剂。这个试剂是一种广泛应用于RNA和DNA提取的试剂,可以有效地提取RNA和DNA,且不会相互干扰。在使用Trizol试剂进行DNA提取时,可以通过调整实验步骤和加入

植物总RNA的分离

实验概要认识真核生物RNA的组成及分离的原理;学习RNA提取过程中抑制RNA酶活性的方法。实验原理真核生物的RNA包括rRNA、tRNA和mRNA。一个典型的真核细胞约含有10-5~10-6mg的RNA,其中80-85%为rRNA,其余15-20%主要由各种低分子量RNA组成(如tRNA、核内小分子

Poly(A)+RNA的分离纯化

1)      Poligo(dT)-纤维素层析法提取poly(A)+RNA装柱与填柱1.      取oligo(dT)-纤维素0.5~1.0 g,用0.1 mol/L NaOH重悬。2.      用oligo(dT)-纤维素(0.5~1.0 ml柱体积)灌注DEPC处理过的一次性柱子(或塞以无

RNA的分离与纯化

包括Northern杂交在内的许多分子生物学实验均是以RNA为材料,mRNA的制备也需要一定质量的总RNA样品,RNA的数量、纯度与完整性将直接影响这些实验的结果。RNA中rRNA的数量最多,占总量的80%~85%;tRNA及核内小分子RNA占15%~20%;mRNA仅占1%~5%。由于各种rRNA

酵母RNA提取与分离

一、目的:学习稀碱法提RNA的原理与技术。二、原理:由于RNA的来源和种类很多,因而提取制备方法也各异,一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验室最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后,RNA即溶于上层被酚饱和的水相中,DNA和蛋白质则留在酚层中,向水层加入乙醇后,RNA即以白色絮状沉淀析

酵母RNA的提制实验原理、仪器试剂和操作步骤

一、目的:学习和掌握从酵母中提制RNA 的原理和方法,从而加深对核酸性质的认识。二、原理:提取和制备RNA 的首要问题是选RNA 含量高的材料。微生物是工业上大量生产核酸的原料,其中RNA 的提制以酵母最为理想,因为酵母核酸中主要是RNA(2.67~10.0%),DNA 很少(0.03~0.51

RNA转染试剂的对比

近期,上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofect transfection reagent(Thermo)和EntransterTM-R4000(Engreen)进行了一次RNA转染比较。比较情况如下:实验方法转染试剂:Turbofect transfection reage

活细胞RNA检测-一步轻松实现

  一提到RNA的检测,大家的脑海中可能会立即浮现出:RT-PCR、FISH、Northern blot等。的确,这些都是检测RNA的经典方法,但它们需要裂解、固定、RNA抽提等,颇为繁琐。其实,RNA的检测完全可以更smart。默克密理博最新推出的SmartFlare™ RNA“灵光”技术

总RNA分离纯化标准操作

实验概要本实验介绍了总RNA分离纯化标准操作规程(SOP)。实验原理氯仿是分子量比较大的有机溶剂,在提取RNA时,氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离。DNA提取过程有机相中主要是酚和蛋白结合,从而使得蛋白和DNA脱离,DNA进入水相。但是在RNA的提取过程就要避免蛋白和DNA脱离,否则DNA会释

样品RNA的分离与纯化

含106个细胞液加等量纯化溶液[4mol/L胍基硫氰酸盐,25mmol/L柠檬酸pH7.0,0.5%肌氨酸(sarcosyl),0.1mol/l 2-巯基乙醇]。总体积为细胞沉淀4-5倍,混匀。加0.1体积2ml/L乙酸钠(pH4.1),1体积酚(重蒸水上封),0.2体积CIAA,混匀器剧烈

利用-Ambion-的-MicroPoly(A)Pure-试剂盒分离-mRNA-实验

实验材料 原始细胞试剂、试剂盒 乙醇仪器、耗材 组织均化器MicroPoly(A)Pure 试剂盒实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂乙醇,100%2. 特殊设备组织均化器(可选),见二、方法步骤 4水浴,预设到 70°C3. 其他MicroPoly(A)Pure 试剂盒(Ambion)4.

利用-Ambion-的-MicroPoly(A)Pure-试剂盒分离-mRNA-实验

            实验材料 原始细胞 试剂、试剂盒 乙醇 仪器、耗材

利用-Ambion-的-MicroPoly(A)Pure-试剂盒分离-mRNA-实验

实验材料原始细胞试剂、试剂盒乙醇仪器、耗材组织均化器MicroPoly(A)Pure 试剂盒实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂乙醇,100%2. 特殊设备组织均化器(可选),见二、方法步骤 4水浴,预设到 70°C3. 其他MicroPoly(A)Pure 试剂盒(Ambion)4. 细胞和组