电镜酶细胞化学实验
实验方法原理 电镜酶细胞化学反应分两步：①细胞内酶在一定条件下与底物进行初级酶反应（形成初级产物）；②应用捕捉剂与初级产物反应形成电子致密物质。电镜酶细胞化学捕捉方法很多，最常用于水解酶类的为金属盐沉淀法和应用于氧化还原酶类的为嗜锇物质形成法。金属盐沉淀法原理是酶反应初级产物与重金属结合形成不溶解的电子致密物，常用铅、铈等。嗜锇物质形成法原理是氧化酶类和二氨基联苯胺（DAB）反应形成嗜锇中间产物，然后与锇形成高电子密度的锇黑沉淀。实验步骤 1. 取材组织取材 10 mm × 5 mm × 5 mm 左右大小，固定后用振荡切片机切成 40～100 μm 厚片，也可用剃须刀片手工切厚片。取白细胞和骨髄时采用细胞分离液分离外周血。取培养细胞时用橡皮刮。游离细胞经离心（800 r/min）5 min，凝块后用剃须刀片切成厚片，漂洗备用。2. 固定固定方式与免疫电镜基本相同，分为血管灌注固定（10～15 min）、浸泡固定（1......阅读全文
电镜酶细胞化学实验
实验方法原理 电镜酶细胞化学反应分两步：①细胞内酶在一定条件下与底物进行初级酶反应（形成初级产物）；②应用捕捉剂与初级产物反应形成电子致密物质。电镜酶细胞化学捕捉方法很多，最常用于水解酶类的为金属盐沉淀法和应用于氧化还原酶类的为嗜锇物质形成法。金属盐沉淀法原理是酶反应初级产物与重金属结合形成不溶解的
电镜酶细胞化学实验——样品制备
目前电镜能定位的酶主要有三类，它们是水解酶、氧化酶、转移酶。通过电镜酶细胞化学技术间接证明酶的存在，可定性研究细胞的标志酶，以及在正常和病理状态下酶的改变与疾病之关系。实验方法原理电镜酶细胞化学反应分两步：①细胞内酶在一定条件下与底物进行初级酶反应（形成初级产物）；②应用捕捉剂与初级产物反应形成电子
免疫酶细胞化学实验技术
免疫酶细胞化学免疫酶细胞化学是免疫细胞化学（Immunocytochemistry,ICC）中最常用的方法之一，它是在抗原抗体特异反应存在的前提条件下，借助于酶细胞化学的手段，检测某种物质（抗原/抗体）在组织细胞内存在部位的一门新技术：即预先将抗体与酶连结，再使其与组织内特异抗原反应，经细胞化学染色
免疫酶细胞化学实验技术4
三、ICC在细胞功能研究中的应用 形态学研究目的之一是揭示组织细胞结构特征及其功能意义。利用ICC显示给与细胞增殖标记物，是组织细胞学研究中形态和功能相结合的重要手段之一。目前常用的细胞增殖标记物有4种，Brdu (5—bromo—2--deoxyuridine), DNA polymerase
免疫酶细胞化学实验技术2
（四）染色原理及步骤 1．基本原理 酶标抗体与荧光色素标记抗体的染色相同，亦分直接法和间接法。直接法是将酶直接标记在每一抗体上，间接法是将酶标记在第二抗体上，检测组织细胞内的特定抗原物质。间接法所用的第一抗体是对组织细胞内某种抗原的特异性抗体（80%～90%的抗血清系由家兔制得，而绝大数单克隆
免疫酶细胞化学实验技术3
一、对照实验 1．吸收实验 应用尚无文献报告的抗血清/自己制备的抗血清进行ICC染色时，需用相应的抗原吸收抗血清后，再孵育标本，判断结果的可信性（结果应为阴性）。常用的吸收实验分固相吸收和液相吸收两种（见本书第一章 ），对于不能形成沉淀，难以用离心沉降法分离的一些小分子多肽类抗原，以固相吸收为佳
腺苷酸环化酶的电镜酶细胞化学试验方法
腺苷酸环化酶主要分布于细胞质膜、核膜和内质网膜上。它也是一种磷酸酶，能催化ATP形成3'，5'－环磷酸腺苷（cAMP）并释放出焦磷酸。Howell等人（1972）首先用亚胺二磷酸腺苷（AMP－PNP）作底物，成功地对动物细胞中的腺苷酸环化酶进行了定位。现已确认，在未固定和固定的组织中
腺苷酸环化酶的电镜酶细胞化学试验方法
腺苷酸环化酶主要分布于细胞质膜、核膜和内质网膜上。它也是一种磷酸酶，能催化ATP形成3'，5'－环磷酸腺苷（cAMP）并释放出焦磷酸。 Howell等人（1972）首先用亚胺二磷酸腺苷（AMP－PNP）作底物，成功地对动物细胞中的腺苷酸环化酶进行了定位。现已确认，在未固定和固定
腺苷酸环化酶的电镜酶细胞化学试验方法
腺苷酸环化酶主要分布于细胞质膜、核膜和内质网膜上。它也是一种磷酸酶，能催化ATP形成3'，5'－环磷酸腺苷（cAMP）并释放出焦磷酸。 Howell等人（1972）首先用亚胺二磷酸腺苷（AMP－PNP）作底物，成功地对动物细胞中的腺苷酸环化酶进行了定位。现已确认，在未固定和固定
腺苷酸环化酶的电镜酶细胞化学试验方法
腺苷酸环化酶主要分布于细胞质膜、核膜和内质网膜上。它也是一种磷酸酶，能催化ATP形成3'，5'－环磷酸腺苷（cAMP）并释放出焦磷酸。 Howell等人（1972）首先用亚胺二磷酸腺苷（AMP－PNP）作底物，成功地对动物细胞中的腺苷酸环化酶进行了定位。现已确认，在未固定和固定
腺苷酸环化酶的电镜酶细胞化学试验方法
腺苷酸环化酶主要分布于细胞质膜、核膜和内质网膜上。它也是一种磷酸酶，能催化ATP形成3'，5'－环磷酸腺苷（cAMP）并释放出焦磷酸。Howell等人（1972）首先用亚胺二磷酸腺苷（AMP－PNP）作底物，成功地对动物细胞中的腺苷酸环化酶进行了定位。现已确认，在未固定和固定的组织中
免疫电镜相关技术实验——酶标记免疫电镜技术
实验方法原理该技术是以酶为抗原—抗体反应的标记物，在不改变抗原抗体的免疫反应特异性，亦不降低酶活性条件下，与相应底物作用后形成不溶性的反应物。在电镜下形成为电子散射力强的终末产物。用于免疫电镜标记的酶有辣根过氧化物酶 (HRP)碱性磷酸酶 (AKP 或 ALP)葡萄糖氧化酶(GOP) 等。目前常用的
酶细胞化学技术的实验方法介绍
样品制备酶细胞化学的一个重要问题是既要保存好细胞内酶的活性，又要保存好细胞的结构，因此选择适当的固定剂种类、浓度、固定的方式和时间是细胞化学技术的一个关键问题。光镜样品固定多选用中性福尔马林或多聚甲醛,4℃、24小时，常规的石蜡包埋切片可以满足相当一部分酶的细胞化学要求；电镜样品固定通常用0.5～2
X射线能谱分析方法及其在电镜酶细胞化学中的应用
近年来,X射线能谱分析和电镜酶细胞化学在许多领域中得到了广泛的应用。两者的结合把超微分析和超微观察密切结合起来,为超微结构的研究提供了可靠的分析手段。本文对X射线能谱分析的原理作简单地介绍,同时对X射线能谱分析在电镜酶细胞化学中的应用和实验方法进行了分析和讨论。
酶细胞化学技术介绍
将细胞内的酶与底物相互作用， 再将酶反应的产物作为反应物质，在酶的作用部位进行捕捉，使其在显微镜下具有可见性。这种在酶作用下产生反应产物， 经捕捉反应来间接证明酶定位的反应称为酶的细胞化学反应。
细胞膜糖类电镜显示实验
实验方法原理 细胞膜糖类包括糖蛋白和糖脂，其显示技术较常用的是凝集素细胞化学技术，此外，还有钌红染色法等。钌红染色法的原理是钌红可以与羧基（酸性基）通过静电结合，电镜下呈电子密度高染色。实验材料 组织样品试剂、试剂盒 钌红原液戊二醛 二甲胂酸钠缓冲液锇酸实验步骤 1. 钌红原液配制钌红溶于双蒸水，浓
离子细胞化学实验
实验方法原理 实验材料 组织试剂、试剂盒 磷酸钾戊二醛蔗糖焦锑酸钾锇酸实验步骤 1. 组织切成约 1 mm3 的小块，用 0.09 mol/L 磷酸钾（或草酸钾）-3％ 戊二醛（pH 7.3，用 0.1％～1％ KOH 调 pH）固定 4 h 以上，4℃。也有人推荐固定早期用微波照射，以加速
酶细胞化学技术的概念
将细胞内的酶与底物相互作用， 再将酶反应的产物作为反应物质，在酶的作用部位进行捕捉，使其在显微镜下具有可见性。这种在酶作用下产生反应产物， 经捕捉反应来间接证明酶定位的反应称为酶的细胞化学反应。
细胞器的观察实验——电镜切片
仪器、耗材电子显微镜镊子平皿载片实验步骤一、高尔基复合体（Golgi Complex） 1. 人体胃粘膜细胞高尔基复合体电镜照片：细胞质中有散在的高尔基复合体，其结构要由三部分组成：扁平囊、大囊泡和小囊泡，它们共同构成紧密重叠的囊泡结构。2. 扁平囊约3~8层，它们平行排列，略弯曲成弓形。3.
酶免疫电镜试剂
1．PBS液 取NaCl 8.5g，Na2HPO40.85g，KH2PO40.54g，加水至1 000ml即可。 2．DAB溶液 取5mgDAB(3、3二氨基联苯胺)加入10mlTris－HCl缓冲液(0.05mMol/L pH 7.6)，加1%H2O20.5ml～1ml。配制时，避光进行
酶免疫电镜技术
（一） 原理 酶免疫电镜技术是利用酶的高效率的催化作用对其底物的反应形成不同的电子密度，借助于电子显微镜观察，证明酶的存在，从而对抗原进行定位。（二）材料与试剂1．PBS液 取NaCl 8.5g，Na2HPO40.85g，KH2PO40.54g，加水至1 000ml即可。2．DAB溶液 取5m
酶免疫电镜试剂
1．PBS液 取NaCl 8.5g，Na2HPO40.85g，KH2PO40.54g，加水至1 000ml即可。 2．DAB溶液 取5mgDAB(3、3二氨基联苯胺)加入10mlTris－HCl缓冲液(0.05mMol/L pH 7.6)，加1%H2O20.5ml～1ml。配制时，避光进行，
示踪细胞化学实验
由于高电子密度示踪剂很容易在细胞间隙扩散，并且如果细胞发生损伤，示踪剂还可进入到细胞中去，因此可利用此方法观察细胞连接及细胞损伤情况。常用的示踪剂有镧、过氧化物酶等。一般采用孵育法，即组织块在示踪液中孵育。也有人采用血管灌注法，但基底膜可阻止示踪剂进入细胞间隙或细胞内，因此一般只是在研究血管通透性改
示踪细胞化学实验
实验方法原理 实验材料 组织样品试剂、试剂盒 NaOH戊二醛硝酸镧锇酸-二甲胂酸钠缓冲液实验步骤 1. 4％ 硝酸镧配制，PH 7.8，用 NaOH 调，边加边搅拌，使溶液呈乳白色。2. 15～25℃ 条件下，组织用 1％～1.5％ 硝酸镧、2％～3％ 戊二醛-0.1 mol/L 二甲胂酸钠缓冲液前
酶的细胞化学反应过程
酶的细胞化学反应包括两个反应: 第一反应是酶作用于底物的反应， 称酶反应，形成的产物称为初级反应产物;第二反应是捕捉剂与初级反应产物的作用，称捕捉反应，产生最终反应产物：┌────酶的细胞化学反应─────┐│ 酶+条件 初级 捕捉剂 │底物──→反应产物──→ 最终反应产物（酶反应） （捕
细胞化学词汇RNA复制酶（RdRp）
即“RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp）”RNA聚合酶的一种，存在于大部分RNA病毒中。和细胞中用来转录的RNA聚合酶（DdRp）不同，RNA复制酶的模板是RNA分子。某些RNA复制酶还有解旋酶活性，正链RNA或双链RNA病毒复制时都会产生双链RNA，RNA复制酶可以解开这些双链，保证RNA的复制顺
离子细胞化学实验——钙离子细胞化学具体方法
离子细胞化学可用来显示细胞内离子定位分布，目前用得比较多的是显示细胞内钙的分布，通常需结合EDX能谱分析。细胞内钙离子分布是高度隔室化的，形成钙离子浓度不同的钙池，正常情况下，细胞内胞浆、线粒体、核等部位都有钙的分布；在大多病理情况下（如缺血、缺氧、中毒等），细胞内钙可升高，并且进入到细胞内的钙很多
细胞荧光化学实验
荧光法较一般光学方法具有灵敏度高、特异性强、方法简便等优点，因此近年来荧光组织化学特别是免疫荧光技术有了很大的发展。利用荧光技术可研究细胞内化学成分的分布与定位，研究细胞与组织中物质的吸收与转运，进行病理鉴别以及细胞免疫等方面的研究。 当用一种波长的光(如紫外光)照射某种物质时，这种物质会在极短的时
细胞免疫化学：免疫酶标技术
1） 直接法1．标本固定。2．PBS洗涤2×3分钟。3．1％ H2O2（或1％ H2O2 甲醇）抑制内源性过氧化物，室温10～20分钟。4．正常血清（1：10）孵育，室温20分钟。5．滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。6．PBS洗涤3×3分钟。7．DAB＋H2O2显色5～10分钟，镜下控制染色
免疫细胞化学技术观察细胞成分实验
实验方法原理 免疫细胞化学是在细胞化学技术的基础上，吸收免疫学的理论和技术发展起来的一项技术，其基本原理是用荧光素或酶等标记物或显色物标记特异性抗体，通过免疫学中的抗原抗体反应与细胞内的相应抗原结合，形成带有荧光素或显色物的抗原抗体复合物，因