GST融合蛋白同位素（[γ32P]ATP）激酶标记试剂盒产品说明书
GST融合蛋白同位素（[γ32P]ATP）激酶标记试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 YIJI GST融合蛋白同位素（[γ32P]ATP）激酶标记试剂是一种旨在使用同位素（[γ32P]ATP）和cAMP依赖性蛋白激酶A（protein kinase K），标记纯化的目标融合蛋白，成为敏感探针的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种GST融合的重组蛋白。其应用于后续远西方杂交（FAR WESTERN BLOT） 印迹实验和印迹覆膜结合（BLOT OVERLAY BINDING）实验等。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，反应敏感，重复性好。 技术背景 谷胱甘肽-S-转移酶（glutathione-S-transferase；GST）融合蛋白（fusion protein）的技术，广泛应用于蛋白与蛋白之间相互作用的研究、抗体的制造和纯化、以及生化分析。基于GST融合蛋白由......阅读全文
Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶分析实验
蛋白激酶的分析是使用标记的供体底物，当酶样品中含有磷酸转移酶活性时，蛋白 质或多肽受体底物中标记物的积累就很容易被检出。实验材料1 mg ml 钙调蛋白（- 70℃ 小量储存）有 CaM 激酶活性的酶样品10 mmol L 合成肽底物溶液试剂、试剂盒[γ-32P] ATP 溶液5 × CaM 激酶反
凝胶中激酶直接分析实验——－直接分析
蛋白激酶的分析是使用标记的供体底物，当酶样品中含有磷酸转移酶活性时，蛋白 质或多肽受体底物中标记物的积累就很容易被检出。实验方法原理盐酸胍或脲都能使蛋白质变性，选用哪一种取决于不同的激酶，但一般首选盐酸胍，因为对大多数激酶而言它的变性效果更好。实验材料10 mmol L 激酶底物有激酶活性的酶样品试
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验—依赖环核苷酸
试剂、试剂盒激酶分析缓冲液组蛋白 2B 储存液环核苷酸依赖的蛋白质激酶分析缓冲液环核苷酸储存液实验步骤1. 在置于冰上的离心管内配制含下列成分的 20 μl 反应混合物：5X 激酶分析缓冲液 4 μl，10 mg/ml 组蛋白 2B 储存液 1 μl，[γ-32P] ATP（终浓度为 5 μCi/5
环核苷酸依赖性蛋白激酶分析实验
蛋白激酶的分析是使用标记的供体底物，当酶样品中含有磷酸转移酶活性时，蛋白 质或多肽受体底物中标记物的积累就很容易被检出。实验材料具有环核苷酸依赖性蛋白激酶活性的酶样品10 mg／ml 组蛋白 2B（溶于水）试剂、试剂盒[γ-32P] ATP 溶液5 × 环核苷酸依赖性蛋白激酶反应缓冲液20 × 环核
Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶分析实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 1 mg ml 钙调蛋白（- 70℃ 小量储存）
Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶分析实验
实验方法原理 实验材料 1 mg ml 钙调蛋白（- 70℃ 小量储存）有 CaM 激酶活性的酶样品10 mmol L 合成肽底物溶液试剂、试剂盒 [γ-32P] ATP 溶液5 × CaM 激酶反应缓冲液仪器、耗材 30℃ 水浴实验步骤 1. 对 1.5 ml 微量离心管做双管标记，每个反应按以下
蛋白质硝酸银染色试剂盒产品说明书
主要用途 YIJI蛋白质硝酸银染色试剂是一种旨在使用硝酸银通过固着、清洗和染色，直接在聚丙烯酰胺凝胶上显 色，在清晰背景上产生灵敏度10 纳克以下蛋白质的银色条带的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科 学家精心研制、成功实验证明的。其适用于蛋白电泳包括 IEF 的检测。产品即
铜蛋白电泳染色试剂盒产品说明书（中文版）
铜蛋白电泳染色试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 YIJI铜蛋白电泳染色试剂是一种旨在使用二乙基二硫代氨基甲酸钠染色剂直接在聚丙烯酰胺凝胶上进行染色，在清晰背景上产生灵敏度50纳克以上蛋白质棕色条带的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于铜蛋白电泳的特异
OsAGAP蛋白的Arf－GTPase激活活性测定
实验概要本实验诱导表达了Arf-GST和OsAGAP-GST融合蛋白，纯化后测定了OsAGAP蛋白的Arf GTPase激活活性。主要试剂1. GST融合蛋白纯化试剂盒(Pharmacia公司)2. Enzcheck TM Phosphate检测试剂盒(Molecular ProbesCo.)实验步
T－细－胞－中－丝－裂－原－活－化－的－蛋－白－激－酶（MAPK)－活性分析
实验步骤基 本 方 案 1 免疫复合物蛋白激酶测定此方法可用于测定 E R K 、 J N K 和 p38 M A P K 的活性，也可使用针对每个 M A P K组分的商品化抗体。然而，特定的抗体对各组分内特定的亚型会显示一定的特异性。材 料基本方案 2 固相蛋白激酶法检测 J N K 活性这种方
寡核苷酸5末端磷酸化实验
以下介绍的是标记 10pmol 高比活度的寡核苷酸的反应，标记不同量的寡核苷酸可以通过增加或减少反应体积而保持各组分的相应浓度来实现。也可用类似的反应条件，将非放射性的磷酸加到用于定点突变的合成寡核苷酸 5'末端。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）上册，作者：黄培堂。试剂、试剂盒T4噬菌
寡核苷酸5末端磷酸化实验
试剂、试剂盒 T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液Tris-ClT4噬菌体多核苷酸激酶寡核苷酸[γ-32P]ATP仪器、耗材 微量离心管水浴箱实验步骤 材料缓冲液与溶液稀释贮存液至适当浓度10XT4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液Tris-Cl(1mol/L,pH8.0)酶和缓冲液T4噬菌体多核苷酸激酶野生型T4噬
寡核苷酸5末端磷酸化实验
试剂、试剂盒 T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液 Tris-Cl T4噬菌体多核苷酸激酶 寡核苷酸 [γ-32P]ATP
含5’突出羟基端的DNA分子磷酸化
本方案用磷酸酶去除核酸的 5' 磷酸根，然后在 T4 噬菌体多核苷酸激酶的催化下，以放射性标记的形式重新将磷酸加到核酸上，这是一种广泛应用于 32P 标记探针的技术。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理本方案用磷酸酶去除核酸的 5' 磷酸根，然后在 T4 噬菌
用[32P]磷酸标记细胞实验
标记单层培养细胞标记悬浮培养的HeLa细胞实验材料HeLa 细胞 试剂、试剂盒FCS
用[32P]磷酸标记细胞实验
实验材料 HeLa 细胞试剂、试剂盒 FCS磷酸盐仪器、耗材 无磷酸培养基实验步骤 1. 在含 10% FCS 的培养基中单层培养 HeLa 细胞至铺满 50% 左右。2. 倒掉完全培养基，加入新鲜的无磷酸培养基，培养 3~4 小时以耗尽胞内的磷酸储备。3. 换新鲜的无磷酸培养基，并加 32P 磷酸
用[32P]磷酸标记细胞实验
标记单层培养细胞 标记悬浮培养的HeLa细胞 实验材料 HeLa 细胞
含5’突出羟基端的DNA分子磷酸化
实验方法原理 本方案用磷酸酶去除核酸的 5' 磷酸根，然后在 T4 噬菌体多核苷酸激酶的催化下，以放射性标记的形式重新将磷酸加到核酸上，这是一种广泛应用于 32P 标记探针的技术。
含5’突出羟基端的DNA分子磷酸化
实验方法原理 本方案用磷酸酶去除核酸的 5' 磷酸根，然后在 T4 噬菌体多核苷酸激酶的催化下，以放射性标记的形式重新将磷酸加到核酸上，这是一种广泛应用于 32P 标记探针的技术。实验材料 T4 噬菌体多核苷酸激酶DNA试剂、试剂盒 乙酸铵EDTA乙醇T4 噬菌体多核苷酸激酶缓冲液仪器、耗材
用[32P]磷酸标记细胞实验_标记单层培养细胞
实验材料HeLa 细胞试剂、试剂盒FCS磷酸盐仪器、耗材无磷酸培养基实验步骤1. 在含 10% FCS 的培养基中单层培养 HeLa 细胞至铺满 50% 左右。2. 倒掉完全培养基，加入新鲜的无磷酸培养基，培养 3~4 小时以耗尽胞内的磷酸储备。3. 换新鲜的无磷酸培养基，并加 32P 磷酸盐至 2
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离
实验方法原理磷酸化分析的原理研究的最常见的磷酸化类型是丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的磷酸酯化。已知发生的磷酸化还有精氨酸、组氨酸和赖氨酸的亚酰胺化，以及天冬氨酸和谷氨酸的酰化。这些修饰中的其中一些是化学不稳定的，通常观察不到，除非采取特殊的保护措施防止他们在蛋内质分离过程中消失。举例来说，组氨酸磷酸化是一
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离
实验方法原理 磷酸化分析的原理研究的最常见的磷酸化类型是丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的磷酸酯化。已知发生的磷酸化还有精氨酸、组氨酸和赖氨酸的亚酰胺化，以及天冬氨酸和谷氨酸的酰化。这些修饰中的其中一些是化学不稳定的，通常观察不到，除非采取特殊的保护措
开发出酪氨酸磷酸化监测新方法
近日，中科院大连化学物理研究所研究员卿光焱团队开发了一种无标记、通用、实时、高通量监测酪氨酸磷酸化的新方法。该研究为激酶抑制剂筛选、癌症靶向药物研发提供了新的方法。相关研究成果发表在中国化学会旗舰期刊CCS Chemistry上。 蛋白在各种激酶的催化下发生磷酸化反应，蛋白磷酸化异常与许多疾病
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验——酪蛋白激酶
试剂、试剂盒酪蛋白激酶分析缓冲液β-酪蛋白β-酪蛋白储存液实验步骤1. 在置于冰上的离心管内配制含下列成分的 20 μl 反应混合物：5X 酪蛋白激酶分析缓冲液 4 μl β-酪蛋白
酪蛋白激酶分析实验_用－β酪蛋白
实验材料β-酪蛋白（溶于水）有酪蛋白激酶活性的酶样品试剂、试剂盒[γ-32P] ATP 溶液酪蛋白激酶反应缓冲液TCASDS-PAGE 样品缓冲液仪器、耗材30℃ 水浴P81 磷酸纤维素膜离心管离心机实验步骤1. 每个鉴定反应按以下比例将各反应组分加入 1.5 ml 微量离心管中：4 μl 5 ×
酪蛋白激酶分析实验
实验方法原理 实验材料 β-酪蛋白（溶于水）有酪蛋白激酶活性的酶样品试剂、试剂盒 [γ-32P] ATP 溶液酪蛋白激酶反应缓冲液TCA SDS-PAGE 样品缓冲液仪器、耗材 30℃ 水浴P81 磷酸纤维素膜离心管离心机实验步骤 每个鉴定反应按以下比例将各反应组分加入 1.5 ml 微量离心管中：
GST蛋白纯化步骤
制备细胞裂解物：1.每100ml培养物的细胞沉淀悬于4mlPBS；2.加入溶菌酶至终浓度1mg/ml，冰上放置30min；3.用针筒将10ml 0.2%Triton X-100强行注入细胞裂解物中，剧烈震动数次混匀；4.加入DNase和RNase至终浓度5μg/ml，4℃震动温育10min；5.4℃
GST融合蛋白表达与纯化的实验步骤与注意事项（二）
7、转化BL21(DE3)pLysS菌株检测GST融合蛋白的表达(1)冰上融化BL21(DE3)pLysS感受态细胞(天根)(2)2 ml离心管中，加入25μl BL21+ 3μl质粒(300-500ng)，混匀(质粒≤感受态1/10)(3)冰上放置30min(4)42°C，90s(5)冰上放置2-
GST融合蛋白表达与纯化的实验步骤与注意事项（一）
GST表达融合蛋白 pGEX-KG大小：5006bp，氨苄青霉素抗性(Ampr)，IPTG诱导表达酶切位点：BamHI 930、SmaI 937、EcoRI 962、XbaI 966、NcoI 974、SalI 980、XhoI 985、SacI 992、HindIII 994GST分子量：构建pG
凝胶中激酶直接分析实验
实验方法原理 盐酸胍或脲都能使蛋白质变性，选用哪一种取决于不同的激酶，但一般首选盐酸胍，因为对大多数激酶而言它的变性效果更好。实验材料 10 mmol L 激酶底物有激酶活性的酶样品试剂、试剂盒 2-丙醇Tris•Cl盐酸胍 脲DTTTween 20匹配的激酶反应缓冲液 Mg／ATP 溶液 [γ-3