吉凯基因Dr.L的私家实验笔记——稳定株
1、什么是瞬时表达和稳定表达？ 课前热身，了解的同学请直接进入题2 瞬时表达：外源片段不能随细胞分裂而一同复制，导致表达时间短暂，且表达量随时间逐渐下降。 稳定表达：是指外源片段整合入细胞基因组中，并能随细胞分裂稳定传递下去，表达量长时间处于稳定水平。 那稳定株，顾名思义当然是属于稳定表达的体系了。 2、我的实验是否需要筛选稳定株？ 能够达到稳定表达的方法不止稳定株一种哦。我们使用慢病毒感染细胞，也一样可以达到稳定表达的效果。什么原理呢？ *慢病毒是整合型的逆转录病毒载体，感染细胞后，携带的外源片段会直接整合入细胞的基因组DNA中，并能够随细胞分裂稳定传代。所以对于大多数实验，包括细胞周期、凋亡、增殖等功能学实验，甚至裸鼠成瘤等长时间的实验，只要细胞感染效率较高（70%～80%以上），感染一次慢病毒就可以达到长时间、高效的基因操作的目的，满足实验要求，无须筛选稳定细胞株。 3、......阅读全文
吉凯基因Dr.L的私家实验笔记——稳定株
1、什么是瞬时表达和稳定表达？ 课前热身，了解的同学请直接进入题2 瞬时表达：外源片段不能随细胞分裂而一同复制，导致表达时间短暂，且表达量随时间逐渐下降。 稳定表达：是指外源片段整合入细胞基因组中，并能随细胞分裂稳定传递下去，表达量长时间处于稳定水平。 那稳定株，顾名思义
实验是否需要筛选稳定株？
实验是否需要筛选稳定株？能够达到稳定表达的方法不止稳定株一种哦。我们使用慢病毒感染细胞，也一样可以达到稳定表达的效果。什么原理呢？*慢病毒是整合型的逆转录病毒载体，感染细胞后，携带的外源片段会直接整合入细胞的基因组DNA中，并能够随细胞分裂稳定传代。所以对于大多数实验，包括细胞周期、凋亡、增殖等功能
吉凯基因—布鲁克“4D+”计划启动暨合作实验室揭牌
由蛋白质组学驱动的精准医学带来了精确诊断与精准治疗统一的第三代医学革命。离子淌度分离概念的引入，使得蛋白质组学进入4D新时代，定义了蛋白质组学分析新标准。4D-蛋白质组学是新一代蛋白质组学分析技术，由布鲁克公司与蛋白质组学领域的领军人物Matthias Mann，Ruedi Aebersold，
稳定细胞株构建
稳转细胞系（稳定表达细胞株）指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上，使细胞长期稳定表达该基因。稳转细胞株包括多克隆稳转细胞株和单克隆稳转细胞株。慢病毒感染目的细胞后，通过抗性基因筛选得到的细胞株是多个细胞克隆的组合。单克隆细胞株是从多克隆细
吉凯基因获B轮1亿融资，弘晖资本等投资
近日，吉凯基因正式宣布完成B轮融资，本轮融资金额为1亿元人民币。投资方包括医疗专业基金弘晖资本、华夏信诺、华兴资本旗下基金华晟资本以及上市公司澳洋科技等。 上海吉凯基因化学技术有限公司是国内最大的疾病诊疗关键基因研究服务供应商，建立了国内最大的慢病毒文库和一系列研究平台，发现了数百个在特定肿瘤
稳定表达细胞株的建立
1、将转染后的细胞按照一定的比例接种到6孔板中（一般选用1：10和1：100两个梯度），分别采用1200mg/ml，1000mg/ml和800mg/ml的G418进行筛选；以转染携带EGFP质粒载体的细胞作为阳性对照，以未转染质粒载体的细胞作为阴性对照；2、每3～4天换液一次；3、筛选20～30天，
稳定转染细胞株的构建
1. 2 稳定转染细胞株的构建原理：稳定转染，就是转染的质粒DNA整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代，从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。应用：
长海医院与吉凯基因合作－利用CART治疗白血病获得突破
日前召开的全国临床肿瘤学大会上，第二军医大学附属长海医院血液内科主任杨建民告诉记者一个令人振奋的消息：在长海医院血液科，CAR-T技术在难治复发急性淋巴细胞白血病的临床试验中，已治疗的14例患者都得到不同程度的控制，其中12例急性淋巴细胞白血病患者达到完全缓解，2例淋巴瘤患者症状稳定，至今无一例
今凯基因药物实验室成立并落户郑州
4月23日，今凯基因药物实验室(南阳)有限公司在郑州召开新闻发布会，宣告该实验室正式成立并落户郑州市高新技术开发区，成为河南省首个公司制基因抗癌药物实验室。 作为河南省首个孵化器式实验室、首个风险投资直接介入基础研究的实验室，今凯基因药物实验室(南阳)有限公司，荟萃了一批美国、中国等在基因
医学资料笔记2－基因的转移和重组
细菌间基因的转移与重组是发生遗传性变异的重要原因之一。DNA可以从一种生物转移至另一生物，整合至染色体，改变其遗传信息的组成，这类基因转移的方式称之为基因水平转移。这类遗传物质的交流可发生在亲缘、远缘，甚至无亲缘关系的生物之间。根据DNA片段的来源及交换方式等不同，将基因转移和重组分为转化、转导
稳定株构建不出来怎么办？
下面两种情况，常规的稳定株构建式比较困难的，但是办法总比困难多！1）过表达：看基因功能。如果是抑制肿瘤细胞的增殖或促进肿瘤细胞的凋亡，那么是很难构建稳定株的（目的基因感染细胞后就会凋亡或不长）。2）干扰：建议构建可诱导表达的稳定株。RNA 干扰敲减的是细胞内源在用的基因，敲减后，短时间内会看到抑制效
哺乳动物细胞基因稳定转染的实验
基本方案 实验材料 哺乳动物细胞 试剂、试剂盒
哺乳动物细胞基因稳定转染的实验
分析基因的功能常需要形成含有稳定整合了该基因的哺乳动物细胞系。在转染中大约有1/104细胞将稳定整合外源因而可用一显性（正向）选择标记来分离稳定的转化细胞。用可高效转染的细胞系来确保转染成功。另外，应包括合适的对照以确定目的基因无细胞毒性。实验材料哺乳动物细胞试剂、试剂盒完全培养液仪器、耗材培养箱离
哺乳动物细胞基因稳定转染的实验
实验材料 哺乳动物细胞试剂、试剂盒 完全培养液仪器、耗材 培养箱离心管实验步骤 1. 确定所要转染的细抱系能呈独立集落生长。对于贴壁细胞，在10 cm 组织培养培养皿中接种约100个细胞，培养10~12天，毎4天换液1次。亚甲蓝染色后对成活的细胞集落进行计数。 2. 确定母代细胞的选择条件：将一
筛选稳定表达细胞株转染后多久药物筛选
稳定细胞株筛选是一个长期的过程，稳定细胞株筛选优化，有许多条件需要摸索，而且是从源头开始①在构建载体时，目的基因直接整合到细胞染色体组上，最好不要通过先瞬转在筛选稳定细胞株的这种方法，因为转染效率没有保证②高表达载体的构建，哺乳动物表达量一直是它自身的缺点，最好根据高表达载体定向的驯化细胞，提高蛋白
实验室记笔记的七大法则
实验室笔记本被误解为唯一的一种记录实验方案和实验结果的方式。其实，实验室笔记本的作用是远不止于此。它是一个组织工具和记忆辅助，因为笔记本对于所有的科学家而言是科研及活动的主要记录工具。另外，它也可作为想法和其研究成果所有权的法律记录。在这里，我为计算生物学研究人员如何做实验室笔记而整理了一些“干
G418筛选慢病毒感染稳定细胞株
用慢病毒筛选稳定细胞株，以G418筛选方法为例，筛选出稳定整合Neomycin抗性基因的细胞系。A、 G418抗生素最优浓度筛选 每种细胞对抗生素的敏感性不同，因此，准备建立稳定细胞系之前，需要确定能够在10-14天杀死细胞的最佳浓度。方法如下：1、将细胞稀释到1000个细胞/mL，接种到24孔板，
同样是稳定株，单克隆和混合克隆如何选择？
单克隆稳定株：来源于含有稳定整合外源片段的单个细胞的扩增。混合稳定株：由多个单克隆稳定株混合构成的克隆群，不同的单克隆其外源片段的整合位点不一样。由于不同细胞基因组背景存在差异，且不同整合位点的单克隆细胞株表现出来的细胞表型可能不一致，所以使用混合克隆株更能去除细胞间差异造成的干扰，否则需要对多个单
体内耐药细胞株的建立实验
实验方法原理 细胞与低剂量的药物长期接触，引起细胞本身药物化学过程的改变，细胞膜上出现Pgp糖蛋白，使细胞逐渐对药物耐受，随着药物浓度的递增，其耐受程度逐渐加强。实验材料 小鼠瘤株试剂、试剂盒 肝素生理盐水仪器、耗材 离心机实验步骤 一、材料准备1. 动物选择：根据欲建立的耐药细胞株，选择合适的动
抗药性突变株的分离实验
实验方法原理 生物的抗药性突变是 DNA 分子的某一特定位置的结构改变所致，与药物的存在无关，某种药物的存在只是作为分离某种抗药性菌株的一种手段，而不是作为引发突变的诱导物，因而在含有一定抑制生长药物浓度的平板上涂布大量的细胞群体，极个别抗性突变的细胞会在平板上长成菌落。将这些菌落挑取纯化，进一
体内耐药细胞株的建立实验
体内耐药细胞株的建立实验是通过细胞与低剂量的药物长期接触，引起细胞本身生物化学过程的改变，细胞膜上出现Pgp（或P-170）糖蛋白，使细胞逐渐对药物耐受。实验方法原理细胞与低剂量的药物长期接触，引起细胞本身药物化学过程的改变，细胞膜上出现Pgp糖蛋白，使细胞逐渐对药物耐受，随着药物浓度的递增，其耐受
3000株水稻基因序列公开发表
近日，3000株水稻基因组测序文章在GigaScience正式发表，且整套水稻基因序列以可引用形式在该杂志的附属开放获取数据库GigaDB中公开。 该项目产生的数据是目前已公开水稻序列数据量的四倍。该成果标志着3000株水稻基因组项目第一阶段的完成，主要由中国农业科学院、国际水稻研究
EBV所转录的miRNA－BART1－抑癌基因PTEN而促进鼻咽癌细胞转移
Nature子刊揭示鼻咽癌转移新机制 鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma, NPC）是我国华南地区常见的恶性肿瘤之一，主要发生于鼻咽腔顶部和侧壁，长期以来发病率一直为耳鼻咽喉恶性肿瘤之首。我国每年鼻咽癌的新发病例达2.8万例，其中广东地区鼻咽癌发病率占全国60%，死亡
在稳定株筛选过程中，如何提高单克隆细胞的活性？
最近，单抗市场又迎来了一个关注的热潮。实验室的技术人员以及各大设备厂家，也都逐渐把目光和精力都投向了如何提高单抗药物研发和生产的效率问题上了。在这一层面，各大单抗研发生产企业似乎都在进行赛跑。谁在整个流程中领先一小步，那么极有可能在整个单抗药物市场中赢得先机。在这里，今天我们要讨论的是关于在稳定株筛
玉米株高连续降低的基因被发现
中国农业科学院生物技术研究所玉米耐密高产功能基因组创新团队联合安徽农业大学、华南农业大学，发现了一种通过针对性基因编辑Br2基因实现玉米株高连续降低的方法，为玉米耐密、抗倒改良提供了重要的技术支撑。相关成果日前发表在国际期刊《植物生物技术杂志》上。玉米目前在全球谷物生产中排名第一，对保障全球粮食和饲
肺癌研究中慢病毒工具在体内外模型中的应用
引言：上海吉凯基因化学技术有限公司成立于2002年，拥有国内最大的慢病毒文库，同时也是国内最大的疾病关键基因科研服务供应商，在疾病研究领域的实验积累已逾14年！在这里，我们为大家特别整理了10多个研究领域的经验所得，将最实用的精华分享给大家！肺癌作为世界范围内第一大常见肿瘤，这次就当仁不让先来分享，
肺癌研究中慢病毒工具在体内外模型中的应用
引言：上海吉凯基因化学技术有限公司成立于2002年，拥有国内最大的慢病毒文库，同时也是国内最大的疾病关键基因科研服务供应商，在疾病研究领域的实验积累已逾14年！在这里，我们为大家特别整理了10多个研究领域的经验所得，将最实用的精华分享给大家！肺癌作为世界范围内第一大常见肿瘤，这次就当仁不让先来分
转染细胞的稳定筛选实验
本实验主要用于获得含目的外源基因的真核细胞。实验方法原理外源基因转染真核细胞后整合入基因组DNA，能够长期存在于细胞中，随染色体复制而传给子代。外源基因进入培养细胞一般要经过几天才能够整合入基因组DNA。实验材料转染细胞试剂、试剂盒抗生素培养基胰酶仪器、耗材6孔板24孔板96孔板CO2培养箱滤纸片培
转染细胞的稳定筛选实验
实验方法原理 外源基因转染真核细胞后整合入基因组DNA，能够长期存在于细胞中，随染色体复制而传给子代。外源基因进入培养细胞一般要经过几天才能够整合入基因组DNA。 实验材料
转染细胞的稳定筛选实验
实验材料 转染细胞试剂、试剂盒 抗生素培养基胰酶仪器、耗材 6孔板24孔板96孔板CO2培养箱滤纸片培养瓶实验步骤 1．确定抗生素作用的最佳浓度：不同的细胞株对各种抗生素有不同的敏感性，因此在筛选前要做预试验，确定抗生素对所选择细胞的最低作用浓度。1) 提前24 小时在96 孔板或24 孔板中接种细