固相载体上的斑点免疫金银染色法

实验概要本实验介绍了硝酸纤维素膜(NC膜)上的斑点免疫金银染色操作流程。实验原理蛋白质抗原通过直接点样或转移电泳吸附在硝酸纤维素膜(NC膜)上,与特异性抗体反应后,在滴加(或浸入)胶体金标记的第二抗体,结果在抗原抗体发生金颗粒聚集,形成肉眼可见的粉红色斑点,称为斑点免疫金染色(dot-IGS)。此反应可再提高银显色液增强,即斑点免疫金银染色法(dot-IGS/IGSS)。主要试剂1. 20mol/L,pH7.6 PBS2. BSA3. 定影液:20%硫代硫酸钠。4. 0.05% NaN35. 一抗(1-2mg/ml,用含0.1%BSA和正常羊或兔血清的TBS稀释)6. 金标二抗溶液(金标抗体用含0.4%明胶和0.1%BSA的TBS适当稀释)7. 0.2mol/L,pH3.5枸橼酸缓冲液8. 银显色液9. 定影液主要设备1. NC膜2. 电泳仪和电转仪3. 微量加样器实验步骤1. 用微量加样器在NC膜上直接点样1-2ml(若抗原含......阅读全文

固相载体上的斑点免疫金银染色法

实验概要本实验介绍了硝酸纤维素膜(NC膜)上的斑点免疫金银染色操作流程。实验原理蛋白质抗原通过直接点样或转移电泳吸附在硝酸纤维素膜(NC膜)上,与特异性抗体反应后,在滴加(或浸入)胶体金标记的第二抗体,结果在抗原抗体发生金颗粒聚集,形成肉眼可见的粉红色斑点,称为斑点免疫金染色(dot-IGS)。此反

固相载体上的斑点免疫金银染色法

实验概要本实验介绍了硝酸纤维素膜(NC膜)上的斑点免疫金银染色操作流程。实验原理蛋白质抗原通过直接点样或转移电泳吸附在硝酸纤维素膜(NC膜)上,与特异性抗体反应后,在滴加(或浸入)胶体金标记的第二抗体,结果在抗原抗体发生金颗粒聚集,形成肉眼可见的粉红色斑点,称为斑点免疫金染色(dot-IGS)。此反

斑点免疫金银染色检测牛结核血清抗体

实验概要本实验应用斑点免疫金银染色(Dot-IGSS)检测了牛结核血清抗体。主要试剂1.抗原牛结核PPD。2.血清待检血清、标准结核阳性血清和结核阴性血清。3.硝酸纤维膜孔径0.45µm。4.氯化金(优质)5.0.2Mol/L PB液6.0.05Mol/L Tris—HCl缓冲液7.硝酸银显影液(现

斑点免疫金银染色检测牛结核血清抗体

实验概要本实验应用斑点免疫金银染色(Dot-IGSS)检测了牛结核血清抗体。主要试剂1.抗原牛结核PPD。2.血清待检血清、标准结核阳性血清和结核阴性血清。3.硝酸纤维膜孔径0.45µm。4.氯化金(优质)5.0.2Mol/L PB液6.0.05Mol/L Tris—HCl缓冲液7.硝酸银显影液(现

胶体金固相免疫测定法方法介绍

胶体金固相免疫测定法(1)斑点免疫金银染色法(Dot-IGS/IGSS)是将斑点ELISA与免疫胶体金结合起来的一种方法。将蛋白质抗原直接点样在硝酸纤维膜上,与特异性抗体反应后,再滴加胶体金标记的第二抗体,结果在抗原抗体反应处发生金颗粒聚集,形成肉眼可见的红色斑点,此称为斑点免疫金染色法(Dot-I

免疫酶染色试验——斑点免疫酶染色法

斑点免疫酶染色法 (dot-ELISA)实验 (以检测轮状病毒抗原为例说明)实验方法原理该技术是进行 ELISA 测定时,借用了免疫印迹技术的某些原理和方法,利用硝酸纤维素膜为固相载体,使抗原抗体反应在膜上进行,结合在硝酸纤维素膜上的酶抗体结合物通过将底物分解成不溶性的产物而沉积,在硝酸纤维素膜上形

胶体金标记技术在免疫学中的应用

胶体金标记技术由于标记物的制备简便,方法敏感、特异,不需要使用放射性同位素,或有潜在致癌物质的酶显色底物,也不要荧光显微镜,它的应用范围广,除应用于光镜或电镜的免疫组化法外,更广泛地应用于各种液相免疫测定和固相免疫分析以及流式细胞术等。1.液相免疫测定:将胶体金与抗体结合,建立微量凝集试验检测相应的

免疫胶体金技术的应用

  胶体金标记技术由于标记物的制备简便,方法敏感、特异,不需要使用放射性同位素,或有潜在致癌物质的酶显色底物,也不要荧光显微镜,它的应用范围广,除应用于光镜或电镜的免疫组化法外,更广泛地应用于各种液相免疫测定和固相免疫分析以及流式细胞术等。  1.液相免疫测定:将胶体金与抗体结合,建立微量凝集试验检

免疫胶体金技术的应用

胶体金标记技术由于标记物的制备简便,方法敏感、特异,不需要使用放射性同位素,或有潜在致癌物质的酶显色底物,也不要荧光显微镜,它的应用范围广,除应用于光镜或电镜的免疫组化法外,更广泛地应用于各种液相免疫测定和固相免疫分析以及流式细胞术等。1.液相免疫测定:将胶体金与抗体结合,建立微量凝集试验检测相应的

免疫胶体金技术3

为了得到颗粒均一的免疫金试剂,可将上述初步纯化的结合物再进一步用10%~30%蔗糖或甘油进行密度梯度离心,分带收集不同梯度的胶体金与蛋白的结合物。(2)凝胶过滤法:此法只适用于以BSA作稳定剂的胶体金蛋白结合物的纯化。将胶体金蛋白结合物装入透析袋,在硅胶中脱水浓缩至原体积的 1/5~1/10。再

免疫胶体金技术的测试原理及应用

  测试原理  层析法免疫胶体金检测试剂实际上是免疫金标记技术和抗原抗体反应相结合而形成的一种应用形式,相比ELISA试剂,除标记物不同外,同样服从于抗原抗体反应的特性。此种检测方法具有明显的优点:  *方便使用,体现在操作简单,不需经过特殊培训。  *短时间获得检测结果,一般10-15分钟即可得出

免疫印迹技术和免疫斑点技术

免疫印迹技术又称Western印迹法,它将凝胶电泳与固相免疫结合,首先通过蛋白质电泳技术将需要区分的蛋白质转移至固相载体如NC膜等上,再借助酶免疫、放射免疫等技术进行测定。该法能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子质量,常用于检测多种病毒抗体或抗原。免疫印迹技术又称Western印迹法,它将凝胶电泳

ELISA试剂盒的固相载体

为比较不同固相在某一ELISA测定中的优劣,可应用如下的试验:用其他免疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和阴性标本,将它们进行一系列稀释后,在不同的固相载体上按预定的ELISA操纵步骤进行测定,然后比较结果。ELISA试剂盒可作ELISA中载体的材料良多,最常用的是聚苯乙烯。在ELISA试剂盒中用作

ELISA固相上抗原抗体相互作用的免疫化学

一、ELISA的基本原理酶联免疫吸附试验(ELISA)顾名思义就是以酶作为标记指示物、以抗原抗体免疫反应为基础的固相吸附测定方法。因此,一个ELISA测定试剂,其有机组成部分包括三个方面,即固相支持物及包被的抗原或抗体、酶标记的抗体或抗原和酶反应底物等。抗原或抗体的固相化并不影响其免疫结合活性,酶标

胶体金标记技术(制备方法和应用)

胶体金标记技术是以胶体金作为示踪标志物或显色剂,应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。由于它不存在内源酶干扰及放射性同位素污染等问题,且利用不同颗粒大小的胶体金还可以作双重甚至多重标记,使定位更加精确。因此已成为继荧光素、酶、同位素及乳胶标记技术之后的一种新型标记技术。现已广泛应用于电镜、流式细

固相免疫测定的概念

中文名称固相免疫测定英文名称solid-phase immunoassay定  义将抗原或抗体包被在固相载体上进行免疫测定的技术。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫学检测和诊断(三级学科)

彩色免疫金银法概述

彩色免疫金银法(colouredIGSS简称CIGSS)是在IGSS基础上发展起来的一种新方法。其基本原理与彩色显影相似。IGSS方法染色在抗原位点处生成银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的作用即被氧化成溴化银,后者与彩色显影剂相接触立即被还原成金属银,而彩色显影剂本身则被氧化,其氧化产物使彩色成色剂由无色变

固相免疫测定的技术特点

中文名称固相免疫测定英文名称solid-phase immunoassay定  义将抗原或抗体包被在固相载体上进行免疫测定的技术。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫学检测和诊断(三级学科)

彩色免疫金银法操作指南

1、基本原理 彩色免疫金银法(coloured IGSS, CIGSS)是在IGSS基础上发展起来的一种新方法。其基本原理与彩色显影相似。IGSS染色方法在抗原位点处生成银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的作用即被氧化成溴化银,后者与彩色显影剂相接触立即被还原成金属银,而彩色显影剂本

免疫金银染色双PAG法

实验概要本实验介绍了免疫金银染色双PAG法的操作步骤。实验原理免疫金银染色方法敏感、简便、省时、安全可靠,葡萄球菌A蛋白(SPA)金标记四步法是在此基础上发展起来的更为敏感的一种新方法。SPA和许多哺乳类动物IgG具有亲和性,且它们之间的连接不会干扰抗原—抗体的结合。简单的SPA金标记二步法后,第三

免疫金银法(IGSS)操作指南

一、基本原理免胶体金检测技术是用金属离子和金属蛋白复合物应用免疫组化原理检测组织内抗原抗体的技术,常用胶体金(铁、汞等)重金属离子。由于胶体金容易制成各种大小的颗粒且有很高的电子密度及分辨率,又不影响抗体的活性,因此既可用于免疫组化又适于免疫电镜技术。二、操作步骤1、脱蜡至0.05mol/L TBS

免疫金银法(IGSS)操作指南

一、基本原理免胶体金检测技术是用金属离子和金属蛋白复合物应用免疫组化原理检测组织内抗原抗体的技术,常用胶体金(铁、汞等)重金属离子。由于胶体金容易制成各种大小的颗粒且有很高的电子密度及分辨率,又不影响抗体的活性,因此既可用于免疫组化又适于免疫电镜技术。二、操作步骤1、脱蜡至0.05mol/L TBS

免疫胶体金技术(Immune-colloidal-gold-technique)

(一)  原理 免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,聚合成为特定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,称为胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷,可与蛋白质分子的正电

免疫胶体金技术(Immune-colloidal-gold-technique)大总结

(一) 原理免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原 抗体的一种新型的免疫标记技术。胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,聚合成为特定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,称为胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷,可与蛋白质分子的正电荷

气相色谱柱在固相上的物理化学常数

气相色谱柱除用于定量和定性分析外,还能测定样品在固定相上的分配系数、活度系数、分子量和比表面积等物理化学常数,是一种对混合气体中各组成分进行分析检测的仪器。广泛应用于石油、化工、生物化学、医药卫生、食品工业、环保等方面。它除了可以用来定量跟定性分析以外,还可测定样品在固定相上的分配系数、活度系数、分

气相色谱柱在固相上的物理化学常数

气相色谱柱除用于定量和定性分析外,还能测定样品在固定相上的分配系数、活度系数、分子量和比表面积等物理化学常数,是一种对混合气体中各组成分进行分析检测的仪器。广泛应用于石油、化工、生物化学、医药卫生、食品工业、环保等方面。它除了可以用来定量跟定性分析以外,还可测定样品在固定相上的分配系数、活度系数、分

兰州化物所磁性载体技术用于样品固相萃取取得进展

  磁性载体技术(MCT)自1973年建立后,吸引了广泛研究兴趣,主要用于生物分离。Fe3O4是一种常用的磁性载体,可作为磁性内核进行必要的修饰,用于目标分析物的萃取。   中国科学院兰州化学物理研究所中科院西北特色植物资源化学重点实验室师彦平研究员带领的药物化学成分小组一直致力于有关MCT的新方

固相放射免疫测定的概念

中文名称固相放射免疫测定英文名称solid-phase radioimmunoassay定  义将抗原或抗体吸附在固相载体上进行反应和检测的一种放射免疫分析技术。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫学检测和诊断(三级学科)

固相酶免疫测定技术的概述

  固相酶免疫测定主要是指ELISA,其基本原理是:使抗原或抗体结合到某种固相载体表面(包被),并保持其免疫活性;用酶标记(另一种)抗原或抗体,保留其免疫活性和酶活性;在测定时,把待测标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应;用洗涤的方法使固相载体上形

免疫斑点试验的原理

  硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜具有很强的静电吸附力,在中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子。因而,将抗原吸附于纤维素膜后,就可利用纤维素膜作为固相进行抗原抗体反应。当加入抗体后(即可与膜上的抗原结合,犎;后再加入带有标记物的抗体,使标记通过抗抗体和相应抗体的结合间接地交联于纤维素膜上。加入标记