BioRad(伯乐)WesternBlot半干法转膜的十大注意事项
首先讲转膜仪的清洗:Do not immerse the unit in liquid. Use special care when cleaning the anode plate to avoid scratching or marring the platinum. Do not use abrasives or strong detergents. The cathode plate (stainless steel) can be cleaned with a mild abrasive to remove salt that may deposit during normal operation. The entire unit can also be periodically disassembled and cleaned with water to remove salt deposits.......阅读全文
Dry-Transfer-干法蛋白转膜
Trans-Bot SD Assembly1. Prepare the transfer buffer.2. Following electrophoresis, equilibrate the gels in transfer buffer. Equilibration facilitates
半干转是否要去膜?
半干转是否要去膜、滤纸、胶同样大小,因为胶大小不一定规则,膜和滤纸会大一点,那样会不会短路?可以相等,但是如果纸、膜比凝胶大就比较容易形成短路了,上下两层滤纸也不能因过大而相互接触,这样会短路,电流不会通过胶和滤纸。转移前和转移过程中看看电压就行,正常的半干转是慢慢变高的,最后结束时一般是开始的1.
BioRad(伯乐)Western-Blot半干法转膜的十大注意事项
首先讲转膜仪的清洗:Do not immerse the unit in liquid. Use special care when cleaning the anode plate to avoid scratching or marring the platinum. Do not use
半干转膜仪如何使用
以WEALTEC的YRDIMES半干转膜仪为例,首先确认是转蛋白质还是核酸。蛋白质可参考Bjerrum and Schafer-Nielsen或Towbin或Dunn缓冲液系统配置缓冲液,电泳后将凝胶浸入缓冲液平衡5分钟,将转印膜和滤纸裁切并浸入缓冲液,合上上盖,按说明书垫上BP-C纸,普通转印1或
做western转膜,用湿转电泳,还是半干转电泳好
半干转要用专门的半干转膜仪,而湿转用电泳仪配附件即可;半干转所需时间较短,但控制不好,中间发热比较大容易把膜和胶烘坏;而湿转耗时较长,尤其对大分子量的蛋白转膜效果较好。相对来讲,还是湿法转膜的实验室多一些。
电泳、转膜
转膜是把DNA从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物(一般是尼龙膜)上固定,是进行各种后续研究(如RFLP分析,阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究)的前提。实验目的:掌握Southern blotting的原理及操作步骤。实验原理:1. 转膜的方式: 向上的毛细管转移 向下的毛细管转移 同时向
半干电转印法
实验概要本方法是先将凝胶紧贴于一块硝酸纤维滤膜,然后再将这种夹层组合直接置于两个乎板电极之间,采用这种半干方法可将蛋白质从凝胶中转印至硝酸纤维素膜上。平板可以是石墨(这种平板较便宜,但使用100次后必须更换)制成的,也可以是铂金的(这种子板价格较贵,但使用寿命较长)。通过电洗脱将蛋白质从凝胶中转印至
半干电转印法
先将凝胶紧贴于一块硝酸纤维滤膜,然后再将这种夹层组合直接置于两个乎板电极之间,采用这种半干方法可将蛋白质从凝胶中转印至硝酸纤维素膜上(Kyhse-Andersen1984)。平板可以是石墨(这种平板较便宜,但使用100次后必须更换)制成的,也可以是铂金的(这种子板价格较贵,但使用寿命较长)。通过电洗
Western转膜步骤
下面的步骤适用于通过Xcell Ⅱ转印系统进行蛋白印记的大部分应用。为达到最佳效果,用户的优化是必要的。I. 所需材料:•Xcell SureLock™或Xcell Ⅱ™ Mini-Cell以及Blot Module(Cat. Nos. EI10001, EI9001及EI9051)•电泳后的迷你胶
Southern转膜方法
Southern转膜方法(毛细管虹吸印迹法、电转移法与真空转移法)将凝胶中的DNA进行碱变性并将pH值恢复至中性后,即可将凝胶中的DNA片段转移到固相支持物上。用于转膜的固相支持物有多种,包括硝酸纤维素滤膜(NCM)、尼龙膜、化学活性膜和滤纸等,Southern转膜时可根据需要选择不同的固相支持物用
电泳、转膜概述
转膜是把DNA 从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物(一般是尼龙膜)上固定,是进行各种后续研究(如 RFLP 分析,阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究)的前提。实验目的:掌握 Southern blotting 的原理及操作步骤实验原理:1.转膜的方式:向上的毛细管转移向下的毛细管转移同时向两张膜
SEI半干法烟气脱硫技术通过鉴定
中国石化工程建设有限公司(SEI)、清江石化共同开发的催化裂化烟气半干法双循环脱硫除尘成套技术,日前通过中国石化组织的成果鉴定。鉴定专家认为,该成套技术具有创新性,达到国际先进水平,建议加快推广应用。 该成套技术创新开发了流态化半干法双循环脱硫反应技术、催化裂化与半干法双循环烟气净化集成技术;
western转膜放置问题
1. 定义转膜时与胶接触的一面为“正”2. 封闭时使用封闭液,液体盖过膜就好,所以无所谓正反3. 假如用暗室显影法,将显影的试剂与“正”面接触,胶片与“正面”接触4. 假如用荧光的话,理论上“正”面朝下,扫描,但实际操作过程中貌似都可以的
小分子转膜时间
小分子的话就不要过夜转,采取100V一小时应该就可以了,注意降温。知识补充蛋白的分子量 是理论的分子量 其实还可能有一些修饰的 比如乙酰化 糖基化等那么要考虑分子量的问题 其次 你买的抗体怎么样?特异性 效价 亲和力等 是否适合做WB? 再次 你可以用预染的蛋白marker试一试 确定你的目的蛋白没
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式:10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体(例如NC膜)上,通常有两种方法:毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同,只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易,转移效率高;而后者适用于大胶的蛋白
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式:10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体(例如NC膜)上,通常有两种方法:毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同,只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易,转移效率高;而后者适用于大胶的蛋白
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式:10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体(例如NC膜)上,通常有两种方法:毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同,只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易,转移效率高;而后者适用于大胶的蛋白
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式:10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体(例如NC膜)上,通常有两种方法:毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同,只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易,转移效率高;而后者适用于大胶的蛋白
wb转膜条件公式
wb转膜条件公式:10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体(例如NC膜)上,通常有两种方法:毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同,只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易,转移效率高;而后者适用于大胶的蛋白
转膜后怎么分清楚膜的正反
转膜后分清楚膜的正反的方法:定义转膜时与胶接触的一面为“正”。封闭时使用封闭液,液体盖过膜就好,所以无所谓正反,假如用暗室显影法,将显影的试剂与“正”面接触,胶片与“正面”接触,假如用荧光的话,理论上“正”面朝下,扫描,但实际操作过程中貌似都可以的。湿电转膜仪:湿电转膜仪是用来转印蛋白的仪器。转移蛋
转膜后怎么分清楚膜的正反
转膜后分清楚膜的正反的方法:定义转膜时与胶接触的一面为“正”。封闭时使用封闭液,液体盖过膜就好,所以无所谓正反,假如用暗室显影法,将显影的试剂与“正”面接触,胶片与“正面”接触,假如用荧光的话,理论上“正”面朝下,扫描,但实际操作过程中貌似都可以的。湿电转膜仪:湿电转膜仪是用来转印蛋白的仪器。转移蛋
转膜后怎么分清楚膜的正反
转膜后分清楚膜的正反的方法:定义转膜时与胶接触的一面为“正”。封闭时使用封闭液,液体盖过膜就好,所以无所谓正反,假如用暗室显影法,将显影的试剂与“正”面接触,胶片与“正面”接触,假如用荧光的话,理论上“正”面朝下,扫描,但实际操作过程中貌似都可以的。湿电转膜仪:湿电转膜仪是用来转印蛋白的仪器。转移蛋
western-blot转膜的原理
电场力作用条件下,带电粒子(PAGE胶中的蛋白)会发生定向迁移;蛋白大小如果超过膜孔径(0.22μm or 0.45μm),不会透过膜;WB用的膜具有蛋白吸附作用;
western转膜时间和电流
300mA90分钟,我们是1.0的胶厚度,要是0.75也行,但1.5mm的厚胶要时间长一些,另外你做的蛋白如果超过100kd建议时间更长一些,若是小蛋白就减少转模时间,立春红确定最适时间
转膜时甲醇的作用
转膜 将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体(例如 NC 膜)上,通常有两种方法:毛细管印迹法和电泳印迹法毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同,只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易,转移效率高;而后者适用于大胶的蛋白转移,所
Western-转膜时用干转还是湿转效果比较好?
关键看效果怎么细分,干转,速度快,效率稍低,湿转,速度比较慢,转移效率高。但是最主要看蛋白的分子量大小。如果普通分子量为主,干转就挺好的,效率非常高,几分钟就做完了。分子量特别大,又没有其他人的方案做参考,可以先试试湿转。就是几个小时等得比较痛苦。好几个人做的话,真是等到花儿也谢了。至于说效果,不是
Western-转膜时用干转还是湿转效果比较好
关键看效果怎么细分,干转,速度快,效率稍低,湿转,速度比较慢,转移效率高。但是最主要看蛋白的分子量大小。如果普通分子量为主,干转就挺好的,效率非常高,几分钟就做完了。分子量特别大,又没有其他人的方案做参考,可以先试试湿转。就是几个小时等得比较痛苦。好几个人做的话,真是等到花儿也谢了。至于说效果,不是
western-blot-试验中蛋白转膜总转不上去
当然,首先要考虑的问题是你转过头了,蛋白质跑出去了。其次你的电流有点大,你也没说转了多久?用的干转还是湿转?是不是拿出来的时候很热?这种情况有可能使蛋白质降解。我们一般是湿转用100mA转2小时, 干转所需电流更小。
杂交膜转印膜*纤维素膜NC膜与PVDF膜的区别
1. *纤维素膜*纤维素膜是蛋白印迹广泛使用的转移介质,对蛋白有很强的结合能力,而且适用于各种显色方法,包括同位素,化学发光(Luminol类)、常规显色、染色和荧光显色;背景低,信噪比高。NC膜的使用也很简便,比如不需要甲醛预处理,只要在无离子水面浸润排出膜内气泡,再在电泳缓冲液中平衡几分钟就可以
半干转印系统操作使用说明
一.简介美国Bio-Rad公司的Trans-Blot SD型半干转印系统是在电场的作用下把聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶上的蛋白或核酸条带转移到硝酸纤维素膜上,其运用了电泳检测的方法,使得蛋白或核酸从凝胶中进行分离转移到硝酸纤维素膜上,由于硝酸纤维素膜的可支撑性,使得蛋白或核酸条带能够在电泳后继续做