RAPD分析技术2
（2）扩增结果差，条带模糊或难以辨认。――更换Taq聚合酶缓冲液。――检查引物（使用另外一个引物，或者将引物末端标记，在 16% 6mol/L尿素聚丙烯酰胺胶上电泳检测）。――检查Taq聚合酶活性（与不同批量的酶作比较）。――改变DNA浓度。（3）高相对分子质量产物弥散状分布>4kb。――降低DNA浓度。――降低Taq聚合酶浓度。――减少凝胶上样量。―― 可能是由于循环数过多的结果（Bell和Demarini 1991），减少循环数。――确认是否使用正确的缓冲液（不是水！）制备凝胶。―― 在较低的电压下电泳。（4）在对照和所有检测样品中均为一条很强的单一带。――确认引物序列不是回文结构。这可能是引物多聚体造成的结果。使用不同的引物。（5）带谱不可重复。――DNA过多或过少。把基因组DNA浓度控制在10～100ng范围之内，DNA量太少时，“真正”靶序列与引物的结合效率低，因此引物扩增会产生假的条带，这就称为引物伪迹；DNA......阅读全文
细胞组分的分析方法——定量细胞化学分析技术2
5.固定方法(1)福尔马林法： 在单细胞悬液中加入等体积含8％甲醛的盐水G，4℃下固定12至18小时。该法常用于Acriflavine-Feulgen染色。(2)乙醇法： 细胞被重新悬浮于5ml冷盐水G中，慢慢加入-20℃95％的乙醇15ml，其最终浓度为70％，冰浴30分钟。此法常用于EB及P
薄层液基细胞涂片技术的应用与分析(2)
2.1 胸腹水共检407例，液基涂片检出恶性瘤细胞（含可疑）73例，常规涂片64例，灵敏度提高12.3％；痰液共检164例，液基涂片检出阳性数8例，常规涂片6例，灵敏度提高25％；尿液共检229例，液基涂片检出阳性28例，常规涂片18例，灵敏度提高35.7％；宫颈涂片157例，液基涂片报告鳞状
细胞化学技术2
二、 免疫细胞化学技术 免疫细胞化学技术（immunocytochemistry）是根据免疫学原理，利用抗原抗体特异结合的特性定位组织和细胞中特异大分子的一类技术。它包括光镜水平（简称免疫组化）和电镜水平(简称免疫电镜)的免疫细胞化学技术。应用免疫细胞化学技术可在原位检测细胞的各种大分子，
分子杂交技术－2
一、Southern杂交 Southern杂交可用来检测经限制性内切酶切割后的DNA片段中是否存在与探针同源的序列,它包括下列步骤: (1) 酶切DNA, 凝胶电泳分离各酶切片段,然后使DNA原位变性。 (2) 将DNA片段转移到固体支持物(硝酸纤维素滤膜或尼龙膜)上。 (3) 预杂交滤
基因技术专题2
RNAi技术RNA干扰(RNA interference， RNAi)是近年来发现的研究生物体基因表达、调控与功能的一项崭新技术，它利用了由小干扰RNA(small interfering RNA， siRNA)引起的生物细胞内同源基因的特异性沉默(silencing)现象，其本质是siRNA与对应
动物实验技术2
2．于第①、②、③管内分别加乙型溶血性链球菌培养物、四联球菌培养物、生理盐水各0.5m1。 3．上述3支试管每管加入5%氯化钙0.2ml，摇匀，置37℃水浴10min，待血液凝固，再继续37℃水浴约30min，观察结果。 【结果】 l．观察时，可将小试管慢慢倾斜至30°
Southern－杂交技术2
三：操作(一)转膜1电泳2切胶 在紫外下，切取凝胶有条带部分3脱嘌啉0.25NHCL浸泡凝胶10分钟，蒸馏水洗胶（大于15kb的DNA片段转移时做此步骤）4变性，变性液（0.5MNaOH、1.5MNaCL）浸泡凝胶2次，每次15分钟，蒸馏水洗胶5中和,中和液（0.5Mtris-HCL,pH7.0、3
DNA重组技术2
感受态细胞的制备(一)制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞 下述操作方案是由Hanahan(1983)提供的，所制备的大肠杆菌DHl、DH5和ＭＭ249感受态细胞培养物能使每微克超螺旋ＤＮＡ以≥5x108转化菌落的频率进行转化，其他大多数大肠杆菌菌株的最高转化率大约只有前述菌株的1/10-1/5。
cDNA合成技术2
3. 第一链产量测定第一链掺入率(%)= 掺入cpm/总cpm ×100%掺入dNTP(nmol)=2nmol dNTP/μl ×反应体积(μl)×(第一链掺入率)设330为每mol dNTP的平均分子量合成cDNA量(ng)=掺入dNTP (nmol)×330ng/nmolmRNA向cDNA转变率
随机引物的PCR标记的相关内容
所用引物的核苷酸序列是随机的，其扩增的 DNA 区域事先未知。随机引物PCR扩增的 DNA 区段产生多态性的分子基础是模板 DNA 扩增区段上引物结合位点的碱基序列的突变，不同来源的基因组在该区段上表现为扩增产物有无差异或扩增片段大小的差异。随机引物PCR标记表现为显性或共显性。 ①随机扩增多
随机扩增多态性DNA的简介
随机扩增多态 DNA (randomly amplified polymorphic DNA, RAPD)，是美国学者Williams和Welsh于1990年首先提出的该技术是通过分析DNA的PCR产物的多态性来推测生物体内基因排布与外在性状表现的规律的技术。RAPD技术是以8-lObp的随机寡
CO2分析仪具备的技术功能
1、CO2分析仪体积小巧美观便于携带，触摸式按钮，大屏幕点阵式液晶显示，操作方便，全中文菜单操作，操作简捷方便。2、本产品弥补了以往记录仪只能从电脑设置记录间隔以及读取数据的缺点，一键式切换，可以手动记录也可脱离电脑随时设置采样间隔，自动记录数据。3、实时显示功能，把仪器与电脑连接，就可以在电脑上
骨髓象分析(2)
粒系细胞减少 见于 ：1．粒细胞减少，粒细胞缺乏症。2．再生障碍性贫血。3．急性造血停滞。粒系细胞形态异常1．胞核异常：⑴分叶过多见于严重感染、肿瘤、巨幼红细胞性贫血等；⑵Pelger-Huet畸形，见于先天性或继发于造血异常综合征（MDS）、白血病等。2．胞质异常：⑴中毒颗粒、空泡、吞噬异常；⑵胞
农作物种子纯度鉴定方法综述4
4．2 SSR(Simple sequence repeat，简单序列重复标记)由Moore等于1991年创立。SSR即微卫星DNA，是一类由几个(多为1～5个)碱基组成的基序(motif)串联重复而成的DNA串联重复序列，其长度一般较短，广泛分布于基因组的不同位置，如(cA)n、(AT)n、(GG
DNA分子标记技术研究进展（一）
遗传标记在遗传学的建立和发展过程中有着举足轻重的作用，随着遗传学的进一步发展和分子生物学的异军突起，遗传标记先后相应地经历了形态标记、细胞学标记、生化标记和DNA分子标记四个发展阶段。前三种标记都是以基因表达的结果为基础的，是对基因的间接反映；而DNA分子标记则是DNA水平遗传变异的直接反映，它具有
RAPD(randomly－amplifiled－polymorphic－DNA,随机扩增的多态性DNA
一、 原理运用随机引物扩增寻找多态性DNA片段可作为分子标记。这种方法即为RAPD(randomly amplifiled polymorphic DNA,随机扩增的多态性DNA.)该RAPD技术建立于PCR基础上，它是利用一系列(通常数百个)不同的随机排列碱基顺序的寡聚核苷酸单链(通常为十聚体
动物实验基本技术2
第五节 实验动物的采血法实验研究中，经常要采集实验动物的血液进行常规质量检测、细胞学实验或进行生物化学分析，故必须掌握正确的采集血液的技术。采血方法的选择，主要决定于实验的目的和所需血量以及动物种类。一、大鼠、小鼠的采血方法(一)剪尾采血：需血量很少时常用本法，如作红、白细胞计数、血红蛋白测定、制作
细胞培养技术2
◇湿热消毒的注意事项①不可用安全阀摘子排气。②消毒的过程中若出现漏气现象，可调节消毒器盖内的胶垫的位置。③灭菌完毕，不要急于取出消毒品，可利用消毒器的余热去除物品部分湿气，待半小时左右再移入干燥箱烘干。2.干热消毒 这种消毒方法主要用于玻璃器皿消毒，一般温度在160℃维持90—120分钟就可以杀死
体外DNA重组技术2
【注意事项】基因组DNA分子量大，所有操作必须轻柔，酚/氯仿对皮肤有腐蚀作用，应该戴手套操作。二、RNA的制备【实验目的】1.理解生物细胞中RNA制备方法的原理。2.熟悉组织细胞中RNA制备的基本操作。（一）细胞总RNA的提取1.异硫氰酸胍法【实验原理】异硫氰酸胍法提取细胞总RNA是目前常用的提取方
病毒蚀斑技术（2）
(三) 操作实例1.赤羽病病毒(AKV)的滴定或纯化 (1) 于55mm直径的灭菌塑料培养皿中培养绿猴肾细胞(Vero)，使形成单层。细胞培养时间约3－4天，接种量约为2 000 000/ml个细胞。选取单层细胞全部覆盖，不留有空洞的培养皿用作试验。 (2) 用细胞培养液对AKV病毒作10倍
动物实验基本技术2
第三节 实验动物的麻醉方法 麻醉(anesthesia)的基本任务是消除实验过程中所至的疼痛和不适感觉，保障实验动物的安全，使动物在实验中服从操作，确保实验顺利进行。 一、常用的麻醉药 (一)常用局部麻醉剂：普鲁卡因，此药毒性小，见效快，常用于局部浸润麻醉，用时配成0.5％
动物实验基本技术2
第五节 实验动物的采血法实验研究中，经常要采集实验动物的血液进行常规质量检测、细胞学实验或进行生物化学分析，故必须掌握正确的采集血液的技术。采血方法的选择，主要决定于实验的目的和所需血量以及动物种类。一、大鼠、小鼠的采血方法(一)剪尾采血：需血量很少时常用本法，如作红、白细胞计数、血红蛋白测定、制作
动物实验基本技术2
第三节 实验动物的麻醉方法麻醉(anesthesia)的基本任务是消除实验过程中所至的疼痛和不适感觉，保障实验动物的安全，使动物在实验中服从操作，确保实验顺利进行。一、常用的麻醉药(一)常用局部麻醉剂：普鲁卡因，此药毒性小，见效快，常用于局部浸润麻醉，用时配成0.5％～1％；利多卡因，此药见效快，组
RTPCR技术2
三：操作１：反转录反应按下表准备反应液样品 体积 终浓度５×反应缓冲液 10μl １×dNTP混合液 1μl 0.2mM下游引物 50pmol* 1μm上游引物 50pmol* 1μm25mM MgSO4 2μL 1mMAMV反转录酶 1μl 0.1μ/μlTflDNA聚合酶 1μl 0.1μ/μl
干细胞再生技术2
应用情况中国的 皮肤干细胞原位器官复制技术已进入应用领域，人类在器官复制研究上取得了革命性成果。荣祥教授则带来了一次医学革命。他的皮肤再生机理是：首先在烧伤后可启动皮肤伤处原位活组织细胞再生为干细胞，而后调控其皮肤干细胞，转变成皮肤组织，使干细胞在原位组织中直接转化为皮肤器官。徐荣祥教授认为，这项技
土壤测试化验技术2
2 、土壤有效磷的提取测定 土壤中的磷素均来自于含磷矿物的风化，中国主要土类中无机磷形态的组成分布，与土壤风化的地带密切相关。蒋柏藩（ 1983 ）认为，南方高度风化的砖红壤和红壤中，土壤无机磷形态主要是以被氧化铁胶膜包被的闭蓄态磷酸盐存在，其中大部分是磷酸铁盐，在非闭蓄态磷酸盐中，也是以 磷酸铁盐
DNA的测序技术2
一：仪器:离心机,PCR仪,高压电泳仪, 测序槽 ,摇床 ,染色,脱色缸易生物仪器库：http://www.ebioe.com/yp/product-list-42.html易生物试剂库：http://www.ebioe.com/yp/product-list-43.html二：试剂：测序反应试剂
通过2－△△CT－方法,利用实时定量PCR技术分析相对基...（三）
2. 2－△Cf方法2.1. 2－△Cf方法的推导通过内标RNA 可以对加入 RNA 的量的差异进行校正。2－△△CT方法的数据分析的一个特点就是能够利用实时PCR 实验的一部分数据来完成这种校正。在其它的方法不能定量初始 RNA 量的时候：例如，在能得到的 RNA 量非常有限的时候或者需要处理高通
通过2－△△CT－方法,利用实时定量PCR技术分析相对基...（一）
通过2 -△△CT 方法,利用实时定量PCR技术分析相对基因表达差异摘要:现在最常用的两种分析实时定量 PCR 实验数据的方法是绝对定量和相对定量。绝对定量通过标准曲线计算起始模板的拷贝数；相对定量方法则是比较经过处理的样品和未经处理的样品目标转录本之间的 表达差异。 2 - △△ CT
通过2－△△CT－方法,利用实时定量PCR技术分析相对基...（二）
要使△△CT计算方法有效，目标序列和内参序列的扩增效率必须相等。看两个反应是否具有相同的扩增效率的方法是看他们模板浓度梯度稀释後扩增产物△CT如何变化。图1 显示的是 cDNA 样品在 100 倍稀释范围内的实验结果。对于每一个稀释样本，都用GAPDH 和c-myc 特异的荧光探针及引物进行扩增。计