RFLP技术和RAPD技术2
第三节 RAPD技术一、 材料不同来源的DNA(50ng/ul)。二、设备PCR仪，PCR管或硅化的0.5ml eppendorf管，电泳装置。三、试剂1、随机引物(10mer) (5umol/L)：购买成品。2、Taq酶：购买成品。3、10xPCR 缓冲液：配方见第八章。4、MgCl2 ：25mmol/L。5、dNTP：每种2.5mmol/L。四、操作步骤：1. 在25ul反应体系中，加入模板DNA 1ul (50ng)随机引物 1ul (约5pmol)10xPCR Buffer 2.5ulMgCl2 2uldNTP 2ulTaq酶 1单位（U）加ddH2O 至 25ul混匀稍离心， 加一滴矿物油。2. 在加热至90℃以上的PCR仪中预变性94℃ 2分钟， 然后循环: 94℃ 1分钟， 36℃ 1分钟， 72℃ 1分钟，共40轮循环。3. 循环结束后， 72℃ 10分钟，4℃保存。4. 取PCR产物15ul加3ul上样缓冲液(......阅读全文
实验动物染毒途径和技术2
实验动物 呼吸量 最低呼吸量 静式染毒2h可放动物数
RAPD技术应用中的一些问题及对策
摘要：综述了RAPD技术的一些理论性问题，包括RAPD与其它分子标记技术相比的优点，影响结果重复性的因素，显性标记产生的原因，条带取舍的标准等。提出在实验中解决这些问题的一些方法：严格控制反应条件，采用单倍体和单剂量标记，系统学研究中要结合其它方法进行分析，定位基因时要选用合适的群体等。 1 RAP
关于微卫星标记的相关特点介绍
SSR 操作简单,仅需微量组织,即可使DNA 降解,进行有效地分析鉴定。其标记带型简单,记录条带一致,客观明确,PCR 技术的利用,使微卫星标记技术实现操作自动化。 与其它标记技术相比,具有以下特点：首先,在每个微卫星DNA 两端的序列多是相对保守的单拷贝序列,尤其在亲缘关系相近的物种间是保守
关于随机扩增多态性DNA的研究情况
由于随机引物在较低的复性温下能与基因组DM非特异性的结合，当相邻两个引物间的DNA小于2 000bp时，就能够得到扩增产物。与RFLP相比，RAPD具有很多优点。（1)不需要了解研究对象基因组的任何序列，只需很少纯度不高的模板，就可以检测出大量的信息。（2)无需专门设计RAW)反应引物，随机设计
微卫星标记法的特点
与其它标记技术相比，具有以下特点：首先，在每个微卫星DNA 两端的序列多是相对保守的单拷贝序列，尤其在亲缘关系相近的物种间是保守的，而且在一些紧密相关的物种中其重复单位和重复次数具有一定的相似性。其次，这些小的、串联排列的重复序列经常是通过核苷酸链的滑动错配或者其它未知的过程来改变它们的长度,从而导
RFLP标记的基本原理
RFLP标记:RFLP标记是发展最早的DNA标记技术。RFLP是指基因型之间限制性片段长度的差异，这种差异是由限制性酶切位点上碱基的插入、缺失、失重排或点突变所引起的...RAPD标记的基本原理是利用合成的随机引物
细菌接种、分离纯化和培养技术（2）
２、涂布平板法首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。（图３－５，b）３、平板划线法最简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。划线的
分子生物学常用实验技术（十）
第二节RFLP 技术一、材料 基因组DNA(大于50kb,分别来自不同的材料)。二、设备 电泳仪及电泳槽， 照相用塑料盆5 只，玻璃或塑料板(比胶块略大) 4 块，吸水纸若干，尼龙膜(依胶大小而定)，滤纸，eppendorf 管(0.5ml)若干。三、试剂：1、限制性内切酶(BamHⅠ, Ec
父子关系的分子分析实验——通过－RFLP－技术进行－VNTR－分析
实验材料待测个体的DNA一般从全血分离试剂、试剂盒限制性内切核酸酶及合适的缓冲液微型琼脂糖凝胶DNA 分子质量大小标记分析琼脂糖凝胶1 X TBE 缓冲液溴化乙锭NaOH2 X SSC仪器、耗材放射性或非同位素标记的 DNA 探针尼龙膜Whatman 3MM 滤纸X 线胶片孵育器实验步骤1.选择合适
分子生物学常用实验技术（九）
第三节从动物组织提取基因组DNA一、材料 哺乳动物新鲜组织。二、设备 移液管、高速冷冻离心机、台式离心机、水浴锅。三、试剂1、分离缓冲液：10mmol/L Tris?Cl pH7.4, 10mmol/L NaCl, 25mmol/L EDTA。2、其它试剂：10% SDS，蛋白酶K (20mg/
常用的几种分子标记
RAPD利用 10 个碱基的一个或几个随机引物非定点地扩增 DNA 片段，一般一个引物可扩增 6-12 条 DNA 片段，利用凝胶电泳分开扩增的片段，从而进行基因多态性研究。 RAPD 是一种能快速进行基因多态性研究的技术，并且由于不涉及印迹杂交、放射性自显影等技术，因此简便易行。 SSR 真核生物
几种标记实验的特点
RAPD利用 10 个碱基的一个或几个随机引物非定点地扩增 DNA 片段，一般一个引物可扩增 6-12 条 DNA 片段，利用凝胶电泳分开扩增的片段，从而进行基因多态性研究。 RAPD 是一种能快速进行基因多态性研究的技术，并且由于不涉及印迹杂交、放射性自显影等技术，因此简便易行。SSR 真核生物的
PCR技术导论、实验条件和试验程序(2)
2.2.2.3 操作程序1．在无菌的Eppendorf管内加入以下反应物：2．93℃ 反应2 min后开始以下循环： 93℃变性反应1 min； 50℃退火反应1 min； 72℃延伸反应3 min。 经过17～35循环后，最后一个循环72℃增加5 min。循环结束后反应产物置于40
基因技术专题2
RNAi技术RNA干扰(RNA interference， RNAi)是近年来发现的研究生物体基因表达、调控与功能的一项崭新技术，它利用了由小干扰RNA(small interfering RNA， siRNA)引起的生物细胞内同源基因的特异性沉默(silencing)现象，其本质是siRNA与对应
动物实验技术2
2．于第①、②、③管内分别加乙型溶血性链球菌培养物、四联球菌培养物、生理盐水各0.5m1。 3．上述3支试管每管加入5%氯化钙0.2ml，摇匀，置37℃水浴10min，待血液凝固，再继续37℃水浴约30min，观察结果。 【结果】 l．观察时，可将小试管慢慢倾斜至30°
Southern－杂交技术2
三：操作(一)转膜1电泳2切胶 在紫外下，切取凝胶有条带部分3脱嘌啉0.25NHCL浸泡凝胶10分钟，蒸馏水洗胶（大于15kb的DNA片段转移时做此步骤）4变性，变性液（0.5MNaOH、1.5MNaCL）浸泡凝胶2次，每次15分钟，蒸馏水洗胶5中和,中和液（0.5Mtris-HCL,pH7.0、3
分子杂交技术－2
一、Southern杂交 Southern杂交可用来检测经限制性内切酶切割后的DNA片段中是否存在与探针同源的序列,它包括下列步骤: (1) 酶切DNA, 凝胶电泳分离各酶切片段,然后使DNA原位变性。 (2) 将DNA片段转移到固体支持物(硝酸纤维素滤膜或尼龙膜)上。 (3) 预杂交滤
DNA重组技术2
感受态细胞的制备(一)制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞 下述操作方案是由Hanahan(1983)提供的，所制备的大肠杆菌DHl、DH5和ＭＭ249感受态细胞培养物能使每微克超螺旋ＤＮＡ以≥5x108转化菌落的频率进行转化，其他大多数大肠杆菌菌株的最高转化率大约只有前述菌株的1/10-1/5。
cDNA合成技术2
3. 第一链产量测定第一链掺入率(%)= 掺入cpm/总cpm ×100%掺入dNTP(nmol)=2nmol dNTP/μl ×反应体积(μl)×(第一链掺入率)设330为每mol dNTP的平均分子量合成cDNA量(ng)=掺入dNTP (nmol)×330ng/nmolmRNA向cDNA转变率
细胞化学技术2
二、 免疫细胞化学技术 免疫细胞化学技术（immunocytochemistry）是根据免疫学原理，利用抗原抗体特异结合的特性定位组织和细胞中特异大分子的一类技术。它包括光镜水平（简称免疫组化）和电镜水平(简称免疫电镜)的免疫细胞化学技术。应用免疫细胞化学技术可在原位检测细胞的各种大分子，
农作物种子纯度鉴定方法综述4
4．2 SSR(Simple sequence repeat，简单序列重复标记)由Moore等于1991年创立。SSR即微卫星DNA，是一类由几个(多为1～5个)碱基组成的基序(motif)串联重复而成的DNA串联重复序列，其长度一般较短，广泛分布于基因组的不同位置，如(cA)n、(AT)n、(GG
RAPD操作要点
一、 材料 不同来源的DNA(50ng/ul)。 二、设备 PCR仪，PCR管或硅化的0.5ml eppendorf管，电泳装置。 三、试剂 1、随机引物(10mer) (5umol/L)：购买成品。 2、Taq酶：购买成品。 3、10xPCR 缓冲液：配方见第八章。 4
RFLP操作要点
RFLP操作要点 一、 材料 基因组DNA(大于50kb,分别来自不同的材料)。 二、设备 电泳仪及电泳槽， 照相用塑料盆5只，玻璃或塑料板(比胶块略大) 4块，吸水纸若干，尼龙膜(依胶大小而定)，滤纸 ，eppendorf管(0.5ml)若干。 三、试剂： 1、限制性内
什么是RFLP
限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RF LP )简称PCR-RFLP 分析。它主要是设计适当的扩增引物，使扩增片段包括一个或数个多态性的限制性内切酶识别序列，在PCR 扩增后用该限制酶切割PCR 产物，根据电泳后酶切(Amp-FL
RNAi的实验原理和操作实用技术(2)
2.体外转录以DNA Oligo为模版，通过体外转录合成siRNAs，成本相对化学合成法而言比较低，而且能够比化学合成法更快的得到siRNAs。不足之处是实验的规模受到限制，虽然一次体外转录合成能提供足够做数百次转染的siRNAs，但是反应规模和量始终有一定的限制。而且和化学合成相比，还是需要占
三用紫外分析仪的相关介绍
三用紫外分析仪适用于核酸电泳、荧光的分析、检测， PCR 产物检测， DNA 指纹图谱分析，是开展 RFLP 研究， RAPD 产物分析的理想仪器。本机无需在暗室操作，便可对电泳凝胶进行紫外观察和照相，也可配备蛋白检测仪对蛋白进行观察和照相。紫外强而均匀。可接反射灯等。此产品多次出口。 技术参
体外DNA重组技术2
【注意事项】基因组DNA分子量大，所有操作必须轻柔，酚/氯仿对皮肤有腐蚀作用，应该戴手套操作。二、RNA的制备【实验目的】1.理解生物细胞中RNA制备方法的原理。2.熟悉组织细胞中RNA制备的基本操作。（一）细胞总RNA的提取1.异硫氰酸胍法【实验原理】异硫氰酸胍法提取细胞总RNA是目前常用的提取方
DNA的测序技术2
一：仪器:离心机,PCR仪,高压电泳仪, 测序槽 ,摇床 ,染色,脱色缸易生物仪器库：http://www.ebioe.com/yp/product-list-42.html易生物试剂库：http://www.ebioe.com/yp/product-list-43.html二：试剂：测序反应试剂
干细胞再生技术2
应用情况中国的 皮肤干细胞原位器官复制技术已进入应用领域，人类在器官复制研究上取得了革命性成果。荣祥教授则带来了一次医学革命。他的皮肤再生机理是：首先在烧伤后可启动皮肤伤处原位活组织细胞再生为干细胞，而后调控其皮肤干细胞，转变成皮肤组织，使干细胞在原位组织中直接转化为皮肤器官。徐荣祥教授认为，这项技
标记免疫分析技术2
四、发光免疫分析：发光免疫分析：直接用发光物质标记抗原或抗体生物的发光剂：荧火虫荧光素（酶催化发光）化学的发光剂：鲁米那、吖啶脂等在有过氧化氢的弱碱溶液中即可迅速发光。美国CHIRON公司生产的ACS-180使用类均相的包被抗体的磁性微粒，扩大了反应面，加速了免疫反应，又应用吖啶脂作标记的化学发光分