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RFLP技术和RAPD技术2

第三节 RAPD技术一、 材料不同来源的DNA(50ng/ul)。二、设备PCR仪,PCR管或硅化的0.5ml eppendorf管,电泳装置。三、试剂1、随机引物(10mer) (5umol/L):购买成品。2、Taq酶:购买成品。3、10xPCR 缓冲液:配方见第八章。4、MgCl2 :25mmol/L。5、dNTP:每种2.5mmol/L。四、操作步骤:1. 在25ul反应体系中,加入模板DNA 1ul (50ng)随机引物 1ul (约5pmol)10xPCR Buffer 2.5ulMgCl2 2uldNTP 2ulTaq酶 1单位(U)加ddH2O 至 25ul混匀稍离心, 加一滴矿物油。2. 在加热至90℃以上的PCR仪中预变性94℃ 2分钟, 然后循环: 94℃ 1分钟, 36℃ 1分钟, 72℃ 1分钟,共40轮循环。3. 循环结束后, 72℃ 10分钟,4℃保存。4. 取PCR产物15ul加3ul上样缓冲液(......阅读全文

蛋白质组学在植物科学研究中的应用

1 植物群体遗传蛋白质组学 1.l 遗传多样性蛋白质研究基于基因组学的一些遗传标记,如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)、RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)、SSR(Simple Sequen

隐球菌病分子生物学研究进展

一、核酸提取技术的改进进行分子生物学研究的前提是取得高数量和高质量的核酸,即DNA和RNA。由于隐球菌细胞壁外有一层厚厚的荚膜,为破除真菌细胞壁造成很大困难。可靠地提取隐球菌DNA的方法建立于20世纪80年代后期,研究者先后建立了玻璃珠方法、超声粉碎、液氮冷冻研磨等破壁技术。后来,发展酶学方法取代物

PCR技术

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三用紫外分析仪常识

 三用紫外分析仪适用于核酸电泳、荧光的分析、检测, PCR 产物检测, DNA 指纹图谱分析,是开展 RFLP 研究, RAPD 产物分析的理想仪器。本机无需在暗室操作,便可对电泳凝胶进行紫外观察和照相,也可配备蛋白检测仪对蛋白进行观察和照相。紫外强而均匀。可接反射灯等。此产品多次出口。用

聚合酶链式反应(PCR)

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是

聚合酶链式反应(PCR)

实验概要聚合酶链式反应(Polymerase  Chain  Reaction,PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的

解析紫外分析仪的原理及其应用

      紫外分析仪的原理及其应用紫外分析仪是荧光技术的应用,荧光技术是什么呢? 首先了解一下什么是荧光,荧光又作"萤光",是指一种光致发光的冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光(通常是紫外线或X射线)照射,吸收光能后进入激发态,并且立即退

聚合酶链式反应(PCR)

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是

生物检测技术在食品检验中的应用研究

  [摘 要]本文以生物检测技术为例,通过阐述其在食品检测中的意义,介绍了生物检测技术的主要内容,并分析了生物检测技术在食品检验中的应用。   引言   食品安全及质量与人们生活健康息息相关,也是影响食品工业发展及对外贸易的重要因素。近些年发展的生物技术检测方法因其特异的生物识别

菌种保藏中的细菌鉴定方法

作为科研生产中最重要的基础性资源—菌毒种,其收集、保藏及相关的研究工作在我国正处于整理、整合以及全方面逐步正规化阶段.2003年7月23日,科技部在北京召开了“国家科技基础条件平台建设”部际联席会和专家顾问组成立大会,正式启动了国家科技基础条件平台建设工作.国家自然科技资源共享平台建设作为其中的一个

医学真菌检验技术

医学真菌学检查是诊断真菌病的重要依据,随着真菌感染病例的日益增多,对实验室的诊断也提出了更高的要求。不论是患者浅部或深部感染诊断,几乎全依赖于临床标本的真菌学检查。特别是系统性真菌感染,其早期特异的诊断方法是挽救患者生命的关键,而病原真菌的形态结构十分多样,在不同条件下同一真菌也可有不同特点的形态。

幽门螺杆菌研究进展

幽门螺杆菌研究进展幽门螺杆菌及其感染  1 概述  胃细菌学的研究,长期来是一个被忽视的领域。1983年Marshall和Warren从慢性活动性胃炎患者胃粘膜活检标本中分离到幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是对这一领域重要的突破。此后不久即在国际消化病学界引起了巨大轰动,

DNA分子标记技术研究进展(二)

2.第二代分子标记2.1 SSR标记技术    在真核生物基因组中存在许多非编码的重复序列,如重复单位长度在15~65个核苷酸的小卫星DNA(Minisatellite DNA),重复单位长度在2~6个核苷酸的微卫星DNA(Microsatellite DN

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DNA指纹图谱分析(图)

一. 实验目的1. 掌握DNA指纹图谱技术的概念、原理和基本操作过程2. 学习DNA的限制性酶切的基本技术3. 掌握琼脂糖凝胶电泳的基本操作技术,学习利用琼脂糖凝胶电泳测定DNA片段的长度,并能对实验结果进行分析。二. 实验原理1984年英国莱斯特大学的遗传学家Jefferys及其合作者首次将分离的

DNA指纹图谱分析[DNA Fingerprinting ]

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SSR分子标记技术及其在构建玉米DNA指纹库上的应用1

SSR分子标记技术及其在构建玉米DNA指纹库上的应用 康丽丽 周鸿飞(沈阳农业大学农学院) 玉 米是一种重要的饲用、粮用和工业加工作物,在国民经济中占有重要的地位。玉米育种方法的改进对农业发展具有重要意义。长期以来,育种家们大多数是借用易于 鉴别的形态学和同工酶等遗传标记来辅助育种,并取得了很大成功