斑马鱼基因敲除是怎么做的
一、基因敲除的设计方案 1.1 基因的基本信息 确认斑马鱼基因的基本信息，包括名称ID号等，一般会在NCBI等查询。 1.2 分析基因结构、氨基酸序列等做生物学信息的分析 1.3分析蛋白质的保守结构功能域 通过综合考虑，设计最佳的KO靶点。 1.4 分析并设计CRISPR，分析其效率及脱靶的情况 一般使用CCTOP，少数物种如没有可找其它专业网站。 二、CRISPR活性验证 2.1 分析并确认基因组序列 设计Genotyping引物，确认实际基因组序列与理论匹配情况，如CRISPR靶点验证与理论序列存在出入，需回到1.4重做。 该步骤还需要确认引物扩增条件，以备后用，如不能正常扩增需要重新设计，并且不能进行下一步操作。 2.2 合成sgRNA 使用Thermo转录试剂盒转录，完成后需测定浓度（不得低于400 ng/μl） 和OD......阅读全文
“太空养鱼”后续来了！4条斑马鱼状态良好
今年4月26日，载有4条斑马鱼和金鱼藻的小型受控生命生态实验组件由神舟十八号载人飞船送往中国空间站问天舱的生命生态科学实验系统的小型受控生命生态实验模块中，开展在轨实验，目前已经过去了二十余天，科研人员介绍，4条斑马鱼的状态良好。航天员成功开展了两次水样样品采集和一次鱼食盒更换操作，发现斑马鱼在微重
淋巴管帮助斑马鱼“培育”早期脑细胞
在大脑发育的胚胎阶段，一些神经元和突触可以正常形成并连接，但另一些不能，导致一些部分和部分被丢弃。这会留下死亡或垂死的细胞，这就需要中枢神经系统雇佣一种清理人员。小胶质细胞接受了这个挑战，“摄取”废物，因此对大脑发育至关重要。然而，科学家们对它们是如何在大脑中繁殖的还缺乏充分的了解。美国圣母大学生物
《干细胞》：斑马鱼细胞可修复人视网膜
在最新一期的《干细胞》（Stem Cells）杂志上，来自英国的研究人员发现，斑马鱼眼睛中的一类叫做Muller胶质细胞的特殊细胞对对视网膜的再生至关重要，该细胞还有助于视力的恢复。研究人员预言，这种Muller胶质细胞可能用于恢复人类受损视网膜。 已经知道，视网膜损伤是造成失明的主要原因，引起视
基因组学研究成果让斑马鱼研究“快马加鞭”
基因组学研究成果让斑马鱼研究快马加鞭（Genomics: Zebrafish earns its stripes）作者：谢训卫人类发育，生理功能及疾病发生的过程涉及到成千上万的基因和其变异体，但是大部分的基因和其变异体的功能依然是未知的。过去的20年里，斑马鱼逐渐成为研究人类基因功能的重要模式动物。
Blood：斑马鱼造血干细胞发育新的调控机制
人和动物的血液形成是一个有序而复杂的动态过程，造血干细胞的发生、分化与成熟受多种调控因子的精细调控。造血干细胞的发育和分化缺陷可引起多种疾病，包括贫血、免疫异常以及白血病等。近年来国外一个课题组应用全外显子组测序技术，发现一些剪接因子基因突变与骨髓增生异常综合征(MDS)以及继发性急性髓系白血病
控制基因敲除法
【探针技术用于检测由siRNA介导的基因调制】 为了研究基因功能，科学家们常常会有针对性地关断某些特定的基因。 而要验证这种基因沉默的有效性, 就需要运用适当的具特异性的检测方法。理想的检测方法不仅要测量准确, 而且还要能让细胞保持完好无损。 利用诸如RNA(核糖核酸)技
基因敲除技术简介
动物实验和实验动物都要求达到实验室操作规范（good laboratory practice, GLP）和标准操作程序（standard operating procedure, SOP）这些规范和操作对实验动物和实验室条件，工作人员素质，技术水平和操作方法都要求标准化。所有药物的安全评价试
基因敲除技术简介
基因敲除是一种遗传工程技术，是指通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。基因敲除针对某个序列已知但功能未知的序列，改变生物的遗传基因，令特定的基因功能丧失作用，从而使部分功能被屏蔽，并可进一步对生物体造成影响，进而推测出该基因的生物学功能。基因敲除技术克服了随机整合的盲目性和偶然性，是一种理
基因敲除技术简介
基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因
GnRH3在早期PGCs的增殖和性别分化中扮演重要角色
促性腺激素释放激素（Gonadotropin-releasing hormone, GnRH）是脊椎动物“下丘脑-垂体-性腺（hypothalamic-pituitary-gonad, HPG）轴”上的一个关键因子，在脊椎动物性腺发育成熟及繁殖中发挥着重要作用。利用斑马鱼模型，中国科学院水生生物
生命应对基因无义突变的分子机制获破解
生命进化出来许多应对基因突变的办法，其中之一就是“遗传补偿效应”。然而，长期以来科学界对遗传补偿效应怎样起作用的分子机制却知之甚少。 4月4日，《自然》在线报道了浙江大学教授陈军和彭金荣课题组在遗传补偿效应分子机制方面的重要研究进展。课题组首次揭示基因补偿效应是由携带提前终止密码子的信使核糖核
生命应对基因无义突变的分子机制获破解
生命进化出来许多应对基因突变的办法，其中之一就是“遗传补偿效应”。然而，长期以来科学界对遗传补偿效应怎样起作用的分子机制却知之甚少。 4月4日，《自然》在线报道了浙江大学教授陈军和彭金荣课题组在遗传补偿效应分子机制方面的重要研究进展。课题组首次揭示基因补偿效应是由携带提前终止密码子的信使核糖核
Nature:生命应对基因无义突变的分子机制获破解
生命进化出来许多应对基因突变的办法，其中之一就是“遗传补偿效应”。然而，长期以来科学界对遗传补偿效应怎样起作用的分子机制却知之甚少。 4月4日，《自然》在线报道了浙江大学教授陈军和彭金荣课题组在遗传补偿效应分子机制方面的重要研究进展。课题组首次揭示基因补偿效应是由携带提前终止密码子的信使核糖核
水生所精氨酸甲基转移酶prmt5在斑马鱼性腺发育中机制
蛋白质精氨酸甲基化是一类重要的蛋白质翻译后修饰型式，它受精氨酸甲基化转移酶基因家族的介导，在RNA加工、DNA修复、蛋白与蛋白相互作用及基因调控等方面起非常重要的作用。精氨酸甲基转移酶prmt5为该基因家族成员之一，属II型精氨酸甲基化转移酶，介导对称性精氨酸双甲基化。由于Prmt5基因在小鼠中
精氨酸甲基转移酶prmt5在斑马鱼性腺发育中的功能和机制
蛋白质精氨酸甲基化是一类重要的蛋白质翻译后修饰型式，它受精氨酸甲基化转移酶基因家族的介导，在RNA加工、DNA修复、蛋白与蛋白相互作用及基因调控等方面起非常重要的作用。精氨酸甲基转移酶prmt5为该基因家族成员之一，属II型精氨酸甲基化转移酶，介导对称性精氨酸双甲基化。由于Prmt5基因在小鼠中
Cell－Res:中国学者用韩春雨基因编辑新技术研究斑马鱼
2016年，生命科学界的一个热门人物，当属河北科技大学生物科学与工程学院生命科学系副教授韩春雨。在今年的5月份，他作为通讯作者在国际学术期刊《Nature Biotechnology》提出一种新的基因编辑技术——NgAgo-gDNA，向当前最火热的“第三代”基因编辑技术CRISPR-Cas9发起
Cell－Res报道韩春雨基因编辑新技术有效
2016年，生命科学界的一个热门人物，当属河北科技大学生物科学与工程学院生命科学系副教授韩春雨。在今年的5月份，他作为通讯作者在国际学术期刊《Nature Biotechnology》提出一种新的基因编辑技术——NgAgo-gDNA，向当前最火热的“第三代”基因编辑技术CRISPR-Cas9发起
应用模式动物斑马鱼开展农药环境毒理的研究（二）
图1图1为96h之后福美锌（ziram）引起的斑马鱼胚胎的死亡率和发育障碍情况。其中A为受精24,48,72和96h胚胎的累计死亡率；B为受精72和96h胚胎的累计孵化率；C为受精48,72和96h胚胎20s内的心跳；D为受精48,72和96h胚胎的脊索畸变率。从图1可以看出：1、斑马鱼受精96h时
斑马鱼胚胎细胞的培养——成纤维细胞饲养层
实验方法原理通过用链酶蛋白酶除去绒毛膜、用添加成分的 FGF 培养液培养细胞和采用不同的胰蛋白酶消化筛选成纤维细胞，用原肠胚期斑马龟的胚胎成纤维细胞制备饲养层 [ Sun et al., 1995a ]。实验材料链酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTA受精后8h的胚胎FB
胚胎和成年斑马鱼眼情的组织学准备
INTRODUCTIONThis protocol describes the histological preparation of embryonic and adult zebrafish eyes. The methods described here can be easily adapt
新发现：斑马鱼脑内有游离的淋巴细胞
清除有害物质、扫荡毒害细胞的废物，大脑有自己的内在程序，这些程序也能为中风和痴呆等疾病提供保护措施。 澳大利亚昆士兰大学（UQ）的科学家们通过研究热带淡水斑马鱼（拥有着许多与人相同的细胞和器官），发现了一种新型的大脑“清道夫”淋巴细胞——脑膜壁淋巴管内皮细胞（meningeal mural l
斑马鱼帮助解码钙缺乏和结肠癌的关联
钙缺乏会引起异常的结肠生长，增加结肠癌风险，但是对于其中的机制还知之甚少。一个小的、透明的鱼胚胎和一连串的惊喜，带领科学家们更深入地了解低钙和结肠癌之间的复杂联系。 密歇根大学的研究人员通过研究斑马鱼胚胎皮肤，解码了能够导致钙缺乏人群中肿瘤和结肠癌的结肠细胞异常生长背后的细胞信息。他们也在
扫描电镜揭秘斑马鱼与血栓研究的关系（一）
血液是身体里"流动的长河"，如果生命的长河被血栓堵塞，能想象后果会有多么严重吗？ 目前，我国因血栓性疾病导致的死亡人数已占全球因血栓性疾病导致的死亡人数的 51% ，远超过肿瘤、传染性疾病、呼吸系统疾病等。因不易察觉，血栓被称为最隐蔽的杀手。斑马鱼（zebrafish），因其全身布满多条深蓝色条纹似
应用模式动物斑马鱼开展农药环境毒理的研究（一）
在未涉及正文分析介绍及阐述之前，首先给大家分享一个关于斑马鱼研究的框架图：从框架图可以看出，该研究的目的及主要思路是：评估福美锌（ziram）对斑马鱼发育的影响，主要从形态学、行为、生理学和分子四大方面来进行探讨。毋庸置疑，这也是今天将与大家分享的一篇使用Noldus（诺达思）的DanioVisio
扫描电镜揭秘斑马鱼与血栓研究的关系（二）
科普时间 上：纤维蛋白包裹红细胞与血小板形成血栓示意图；下：血管内壁血栓扫描电镜图为了建立研究凝血酶生成与纤维蛋白形成之间的关系，Schurgers 等人通过飞纳台式扫描电子显微镜对斑马鱼和人类凝血块与其中血纤维蛋白超微网状结构进行可视化分析与对比。 图 A 与图 B 分别为不同倍数下的斑马鱼与
平生医疗Micro－CT小动物成像在斑马鱼基因突变个体观察...
平生医疗Micro CT小动物成像在斑马鱼基因突变个体观察的应用前言 斑马鱼与哺乳动物基因组和蛋白调控机制有高度同源性，而且个体小、生殖周期短、繁殖能力强、易于饲养、体外受精、胚胎透明且发育迅速等诸多方面的优点，被广泛应用于药物筛选、毒性检测和发育研究等科学领域。由于硬骨鱼和人类在骨骼发育过程中的基
斑马鱼神经元助力人类出生缺陷研究
报道：斑马鱼（zebrafish），是一种类似于鲦鱼（minnow）的热带淡水鱼，原产于喜马拉雅地区东南部，是研究人类疾病（包括脑部疾病） 的一种公认的重要工具。利用斑马鱼，科学家们可以确定单个神经元如何发育、成熟和支持基本的功能，如呼吸、吞咽和咀嚼运动。目前，密苏里大学医学院的研究 人
斑马鱼模型有助研发关节炎新疗法
你相信么，鱼也会患上关节炎！美国南加州大学研究人员领导的一项研究发现，地球上早期出现的硬骨鱼很容易患上关节炎。研究人员表示，对鱼类关节炎患病机制的研究，或许会加速人类关节炎预防和治疗手段的研究进程。 长有四肢的骨脊椎动物，如人类，都是从肉鳍类鱼进化而来。在生物进化过程中，为更适应生存环境，陆
Nature子刊：斑马鱼帮助挽救重症淋巴病男孩
在丹尼尔10岁时，他有望成为一名足球运动员，那时他能够在25分钟里跑出5公里的距离。两年后，他的腿突然开始肿胀，出现呼吸困难的症状。医院诊断丹尼尔心脏周围有淋巴积液，并且淋巴液还在继续渗漏。丹尼尔的双腿和腹部像是海绵一样肿胀。他的肺部充满了积液以至于只能靠着氧气罐勉强维持生命。在接受了一种西罗莫
华大基因参与破译虎尾海马全基因组
2016年12月15日，由中国科学院南海海洋研究所、德国康斯坦茨大学、华大基因和新加坡A*STAR研究院共同组成的研究小组，联合破译了虎尾海马（Hippocampus comes）的全基因组，有关研究成果以封面文章的形式发表在Nature杂志上。 海马隶属于海龙科。与其他硬骨鱼不同，海马呈现高