噬菌体扩增和测滴度方法
第一天17:00:后用接种环取一单克隆细菌接种于LB培养液中,37°C摇床过夜(不要超过16小时) 第二天 7:30:打开紫外灯,照射半小时(将器械放入通风橱中);8:00:将20mL的LB培养液放入250mL的三角烧瓶中,按1:100的比例稀释过夜培养的细(即放入200ul 的细菌液体),将其放入37°C摇床,培养约3.5个小时;11:00:打开紫外灯,照射半小时;11:30:取10μL阳性噬菌体液加至20mL细菌培养物中(对数生长期早期),再放入摇床中37°C剧烈摇动(300转/分)4.5小时;15:30:打开紫外灯,照射半小时。同时让高速离心机预温;16:00:将三角烧瓶中培养物转至一离心管中,40°C ,10,000rpm离心10min,将上清转至另一干净离心管中,再次离心。吸取部分上清按1:1的比例和甘油混合保种,放在-200C保存。吸取 80%上清至另一离心管中,加1/6体积PEG/NA......阅读全文
噬菌体扩增和测滴度方法
第一天17:00:后用接种环取一单克隆细菌接种于LB培养液中,37°C摇床过夜(不要超过16小时) 第二天 7:30:打开紫外灯,照射半小时(将器械放入通风橱中);8:00:将20mL的LB培养液放入250mL的三角烧瓶中,按1:100的比例稀释过夜培养的细(即放入200ul
噬菌体滴度的测定的方法
在宿主细胞过量的情况下,噬斑的数量随着噬菌体的增加呈线性增加。由于这个原因,在感染以前,要将噬菌体进行稀释,而不是将宿主细胞稀释。以低MOI(感染重复性)铺板,也可确保每一个噬斑仅包含一个DNA 序列。材料和试剂1. 微波炉2. LB/IPTG/Xgal培养 板3. lb培养基4. 顶层琼脂糖凝胶操
噬菌体滴度的测定的方法
在宿主细胞过量的情况下,噬斑的数量随着噬菌体的增加呈线性增加。由于这个原因,在感染以前,要将噬菌体进行稀释,而不是将宿主细胞稀释。以低MOI(感染重复性)铺板,也可确保每一个噬斑仅包含一个DNA 序列。材料和试剂1. 微波炉2. LB/IPTG/Xgal培养 板3. lb培养基4. 顶层琼脂糖凝胶操
pfu及噬菌体滴度测定方法
pfu指的是噬菌体的空斑形成单位。以下是关于测定M13效价的一个方法:测定噬菌体滴度只有当噬菌体的感染复度MOI (multiplicity of infection)值远低于1时(即细胞过量时),噬菌斑的数量才会随着加入噬菌体的量而呈线性增加。正因如此,建议检测噬菌体贮液的滴度时,在感染前进行
噬菌体文库的扩增实验
基本方案 实验材料 噬菌体 试剂、试剂盒
噬菌体文库的扩增实验
文库一旦包装就应该尽快进行扩增,它可以大大增加文库的拷贝数,但在扩增时由于克隆的生长速率不同,文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。文库一旦包装就应该尽快进行扩增,它可以大大增加文库的拷贝数,但
噬菌体文库的扩增实验
实验材料 噬菌体试剂、试剂盒 MgSO4麦芽糖琼脂糖氯仿DMSOSM仪器、耗材 离心机分光光度计水浴锅实验步骤 1. 制备铺平板菌(1)2.5 ml 新鲜过夜培养的宿主菌液接种于250 ml 含0.2%麦芽糖和10 mmol/l MgSO4的LB培养液中。(2)在37℃恒温摇床剧烈摇荡2~4 h,
噬菌体的扩增和定量实验
Part 1杂交瘤、单细胞克隆和噬菌体展示技术是抗体发现的三种主流技术,其中噬菌体展示技术作为诺奖级别的技术,在生物创新医药研发过程中有着十分重要的作用,极大的加快了抗体类药物研发的进程。噬菌体展示技术不仅在新的抗体和多肽的发现及优化过程中有着核心的作用,还能和传统的动物免疫技术相结合,与纳米抗体、
滴度的概念
滴度,是一种表述浓度的用词,通常在化学,病理学和免疫学中使用。滴度是稀释度的倒数。病毒滴度即病毒悬液的浓度,又称病毒的效价,噬菌斑形成单位数或感染中心数,就是指pfu的数值。
抗体滴度定义
打个比方,通过间接库姆伯斯试验(indirect Coombs test)检测一个孕妇血清中anti-Rh 抗体。一个患者可能报告通过此试验检出的抗体滴度为16,这表示只要血清的稀释度不超过1/16(1份比例的血清和15份比例的稀释液),此试验都能得到阳性结果,即可识别出抗原。如果稀释度超过1/
绝对定量滴度测定
慢病毒活性滴度用什么单位?看TU!看TU!看TU!TU=transducing units,即每毫升中含有的具有生物活性的病毒颗粒数。其他的VG/mL,VP/mL都是所有病毒颗粒数,死的活的都算上,一片虚假繁荣,请自由玩儿去!慢病毒活性滴度怎么标定最准?绝对定量!绝对定量!绝对定量!又绝对又定量的方
梅毒滴度的概念
梅毒滴度的概念是:梅毒滴度是梅毒血清血检查是检查血清中抗体的点子,滴度的高低就是反应患者血清中抗体的多少。 梅毒滴度患者是唯一的传染源。性接触传染占95%。关键通过性交由破损处传染,梅毒滴度螺旋体好多存在于皮肤粘膜伤害外貌,也见于唾液、乳汁、精液、尿液中。未经治疗的患者在劝化梅毒滴度一年内最具
什么是抗体滴度
抗体滴度用来衡量某种抗体(antibody)识别特定抗原决定部位(epitope)所需要的最低浓度(也即最大稀释度)。一般表示为:仍能产生阳性结果的最大稀释度。通常通过ELISA方法来检测抗体滴度。
病毒滴度的测定
稀释计数法滴度单位:TU/ml,指每毫升中含有的具有生物活性的病毒颗粒数。”TU”为”transducing units”的缩写,中文为“转导单位”,表示可以感染并进入到靶细胞中的病毒基因组数。第一天 细胞准备将生长状态良好的293T细胞消化计数后稀释至1×105/ml,加入96孔板,100µl/孔
病毒滴度的概念
也即病毒的毒力,或毒价,衡量病毒滴度的单位有最小致死量(MLD)、最小感染量(MID)和半数致死量(LD50),其中以LD50最常用。它是指在一定时间内能使半数实验动物致死的病毒量。然而,病毒对实验动物的致病作用不一定都以死亡为标志,例如以感染发病作指标,则可以半数感染量(ID50)测定;此外,当实
杆状病毒滴度检测
实验概要本实验介绍了检测病毒滴度的方法。实验原理根据噬菌斑数计算病毒滴度。主要试剂1. 4% agarose gel:2g agrose 50ml 水,高压灭菌2. 2×Grace(unsupplemented):9.14g粉末(invitrogen) 0.07gNaHCO3 H2O,调PH6.
利用血清筛选噬菌体文库PCR扩增的模板
[器材和试剂] ●MicroAmp反应管(PerkinElmer) ●洗脱缓冲液(20mmol/LTris—ClpH8.5,2mmol/LEDTA,1%TritonX—100) ●GeneAmp9600PCR仪(PerkinElmer) ●正向引物:5’—AGAGATTA
如何优雅的完成噬菌体的扩增和定量实验
Part 1杂交瘤、单细胞克隆和噬菌体展示技术是抗体发现的三种主流技术,其中噬菌体展示技术作为诺奖级别的技术,在生物创新医药研发过程中有着十分重要的作用,极大的加快了抗体类药物研发的进程。噬菌体展示技术不仅在新的抗体和多肽的发现及优化过程中有着核心的作用,还能和传统的动物免疫技术相结合,与纳米抗体、
关于乙肝抗体滴度的简介
乙肝抗体指的是乙肝保护性抗体,即乙肝表面抗体,而乙肝抗体滴度指的是乙肝表面抗体的浓度。当乙肝表面抗体浓度达到一定程度时才能够更有效的保护人体免受乙肝病毒的入侵。
简述乙肝抗体滴度的判断方法
乙肝抗体滴度可以通过乙肝标志物定量检测来获得,那么乙肝抗体滴度怎么看呢?在化验单上可以显示的是乙肝抗体滴度,通过查看滴度就可以判断滴度的大小。可以有效保护人体不受病毒感染的最小值是10mIU/mL,当检测结果显示乙肝抗体滴度小于10mIU/mL说明滴度比较低,还需要注射乙肝疫苗。如果大于10mI
乙肝抗体滴度的产生途径介绍
产生乙肝表面抗体一般有两种途径: 1、曾经感染的乙肝病毒,但是由于自身的免疫功能强大,消灭了乙型肝炎病毒并且产生了乙肝表面抗体。 2、注射乙肝疫苗后产生的。所以在打完乙肝疫苗后检查乙肝抗体滴度主要是看其浓度,乙肝抗体滴度的值越大,那就说明患者抵御乙肝病毒的能力越强。
乙肝抗体滴度检测的相关介绍
乙肝抗体滴度检查需要做乙肝两对半定量检测,因而乙肝抗体滴度检查费用通常要比乙肝两对半定性检查贵些。乙肝抗体定量检测费用一般在100元以内。但是乙肝抗体检查别没有统一的标准,需要根据各个地区的消费水平和医院的收费水准的不同,可能会存在一定的浮动。 由于乙肝抗体有效预防乙肝传染的条件是抗体滴度大于
关于乙肝抗体滴度的检查原因介绍
人体注射过乙肝疫苗后,体内的抗体的含量会随着时间的推移而逐渐下降,就会对身体的保护能力也下降。乙肝抗体滴度越大,对身体的保护能力就越强。所以进行乙肝表面抗体滴度的检查可以清楚的知道体内抗体的含量,以及是否需要进行注射乙肝疫苗的加强针,这对乙肝的预防有很重要的意义。另外,还有一些人注射过乙肝疫苗后
滴度在科学领域的不同定义
1. 所谓病毒滴度即病毒悬液的浓度,就是指pfu的数值。2. 滴度是稀释度的倒数。例如:稀释度( d i l u t i o n )是溶液被冲淡的程度。例如,1 m l 血清加1 7 9 m l 的生理盐水, 则稀释度为1 8 0。上例中的180 的稀释度,其滴度就是1:180 。效价是滴度的同义词
血凝试验和干扰滴定测定病毒滴度
实验方法原理 实验材料 待检的病毒标本试剂、试剂盒 0.85% 的无菌生理盐水阿氏 (Alsever)液磷酸盐缓冲液 (PBS) 红细胞悬液仪器、耗材 96 孔微量血凝板灭菌注射器三角烧瓶离心管实验步骤 1. 选择适当的 96 孔微量血凝板,如果使用鸡或火鸡红细胞,应选用 V 型微量血凝板;如果使用
血凝试验和干扰滴定测定病毒滴度
实验材料待检的病毒标本试剂、试剂盒0.85% 的无菌生理盐水阿氏 (Alsever)液磷酸盐缓冲液 (PBS)红细胞悬液仪器、耗材96 孔微量血凝板灭菌注射器三角烧瓶离心管实验步骤1. 选择适当的 96 孔微量血凝板,如果使用鸡或火鸡红细胞,应选用 V 型微量血凝板;如果使用豚鼠或人"O"型红细胞,
50%终点法测定病毒滴度实验
实验方法原理50% 终点 (50% endpoint) 法是将病毒悬浮液经一系列稀释后,接种至动物、鸡胚或培养成单层的细胞,将每个稀释度造成的动物、鸡胚致死量或细胞病变做成曲线,找出造成 50% 动物、鸡胚死亡或细胞病变的终点稀释度。 LD50 (50 % Lethal dose) 为造成 50%动
50%终点法测定病毒滴度实验
实验方法原理 实验材料 病毒试剂、试剂盒 含 2%小牛血清的 Eagle's 维持液仪器、耗材 细胞培养箱、细胞培养板实验步骤 1. 制备细胞 先制备好单层细胞培养物,在低倍显微镜下观察,挑选生长良好的细胞,按「传代细胞培养」法进行,将细胞单层洗涤、消化、计数。配制所需浓度的细胞悬液
乙肝表面抗原抗原滴度的介绍
把患者血清稀释2~12倍后,与已知浓度的表面抗体相混合,产生凝集反应的最高值便为表面抗原滴度。从这里可以看出,稀释数愈大而出现凝集时,说明血清中表面抗原含量愈多。血清中HBsAg含量与传染性成正变关系,但非肯定的一致关系。高滴度的HBsAg可作为有传染性的参考指标。临床可根据乙肝表面抗原滴度的高
基因组文库的扩增实验
通过平板培养可对重组噬菌体文库进行扩增,平板培养的原种可直接来源于本方案所述的包装混合物。但只要可能,该扩增过程可被省略,而感兴趣的 DNA 序列可从原始文库直接筛选。扩增将不可避免地降低文库的复杂性,部分原因在于在连续几轮的噬菌体生长中,对生长缓慢的重组噬菌体来说是十分不利的。本实验来源「分子克隆