酵母RNA的提取及含量测定(地衣酚显色法)
一、实验目的 (1)熟悉酵母RNA的提取方法(2)掌握地衣酚显色法测定酵母RNA含量的原理和方法二、实验原理 RNA与浓盐酸共热时,即发生降解,形成的核糖继而转变成糠醛,后者与3, 5-二羟甲苯反应呈鲜绿色,该反应需用三氯化铁和氯化铜作催化剂,反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20-250微克范围内,光吸收与RNA浓度 成正比。地衣酚反应特异性较差,凡是戊糖均有此反应。RNA和其他杂质也能给出类似的颜色。三、试剂与器材 分析天平、恒温水浴、分光光度计、沸水浴等。0.2%氢氧化钠、乙酸、95%乙醇、乙醚、地衣酚试剂四、操作方法 ① 酵母RNA的提取② RNA地衣酚法显色测定③ 数据处理及计算。五、关键步骤与注意事项该法反应特异性较差,凡是戊糖均有此反应。因此,测RNA含量时可先测定DNA的含量,再计算出RNA的含量......阅读全文
酵母RNA的提取及含量测定(地衣酚显色法)
一、实验目的 (1)熟悉酵母RNA的提取方法(2)掌握地衣酚显色法测定酵母RNA含量的原理和方法二、实验原理 RNA与浓盐酸共热时,即发生降解,形成的核糖继而转变成糠醛,后者与3, 5-二羟甲苯反应呈鲜绿色,该反应需用三氯化铁和氯化铜作催化剂,反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20-25
地衣酚显色法测定RNA含量
原理 核糖核酸与浓盐酸共热时,即发生降解,形成的核糖继而转变为糠醛,后者与3,5-二羟基甲苯(地衣酚)反应呈鲜绿色,该反应需用三氯化铁或氯化铜作催化剂,反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20~250μ g范围内,光吸收与RNA的浓度成正比。地衣酚反应特异性较差,凡戊糖均有此反应,DNA和其他
地衣酚显色法测定RNA含量实验原理和操作步骤
【实验原理】 RNA与浓盐酸共热时发生降解,产生的戊糖又可转变为糠醛,在FeCl3或CuCl2催化下,糠醛与地衣酚(3,5—二羟基甲苯)反应形成绿色复合物,该产物在670nm处有最大吸收。当RNA浓度为20μg/m1~250μg/m1时,吸光度与 RNA浓度成正比。 【实验材料】
核酸的定量测定实验——地衣酚显色法
实验方法原理RNA 与浓盐酸共热时发生降解, 产生的核糖又可转变为糖醛, 在FaCl3 或CuCl2催化下, 糖醛与3 , 5-二羟基甲苯( 地衣酚、苔黑酚)反应形成绿色复合物, 该产物在670 nm 处有最大吸收。当RNA 浓度为20~250 μg/ ml 时光密度与RNA 浓度成正比。实验材料蛋
动物总RNA的提取及含量测定
一、实验目的(1)了解制备RNA几种方法的原理及优缺点(2)掌握稀碱法提取兔肝RNA的原理和操作技术二、实验原理 细胞内大部份RNA均与蛋白质结合在一起,并且多以核蛋白的形式存在。因此,分离制备RNA时,首先遇到的是必须使RNA与蛋白解离,并除去蛋白质。由于RNA的种类来源和存在形式不同,所用的制备
动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定2
试剂和器材试剂1.DNA标准溶液(须经定磷确定其纯度):取小牛胸腺DNA钠盐以0.01mol/L氢氯化钠溶液配成200 µg/mL的溶液。2.样品待测液:准确称取DNA干燥制品以0.01mol/L氢氯化钠溶液配成100 µg/mL左右的溶液。在测定RNA制品中的DNA含量时,要求RNA制品的每mL待
酵母RNA提取与分离
一、目的:学习稀碱法提RNA的原理与技术。二、原理:由于RNA的来源和种类很多,因而提取制备方法也各异,一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验室最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后,RNA即溶于上层被酚饱和的水相中,DNA和蛋白质则留在酚层中,向水层加入乙醇后,RNA即以白色絮状沉淀析
动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定(二苯胺显色法和...
动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定(二苯胺显色法和紫外吸收法[附2]二苯胺显色法测定DNA含量原理脱氧核糖核酸中的2-脱氧核糖在酸性环境中与二苯胺试剂一起加热产生蓝色反应,在595nm处有最大光吸收。 DNA在40-400 g范围内,光吸收与DNA的浓度成正比。在反应液中加入少量乙醛,可以
兔肝RNA的制备及测定实验原理和操作步骤
实验原理细胞内大部份RNA均与蛋白质结合在一起,并且多以核蛋白的形式存在。因此,分离制备RNA 时,首先遇到的是必须使RNA与蛋白解离,并除去蛋白质。由于RNA的种类来源和存在形式不同,所用的制备方法各异,一般常用的方法有,盐酸胍法,去污剂法和苯酚法。其中,以苯酚法使用较为广泛。产品纯度高,适合
酵母RNA的提取及组份鉴定(稀碱法)
实验原理由于RNA的来源和种类很多,因而提取制备方法也很各异。一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验是最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后,RNA即溶于上层被酚饱和的水相中,DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后,RNA即以白色絮状沉淀析出,此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方
兔肝RNA的制备及测定
实验原理: 细胞内大部份RNA均与蛋白质结合在一起,并且多以核蛋白的形式存在。因此,分离制备RNA 时,首先遇到的是必须使RNA与蛋白解离,并除去蛋白质。由于RNA的种类来源和存在形式不同,所用的制备方法各异,一般常用的方法有,盐酸胍法,去污剂法和苯酚法。其中,以苯酚法使用较为广泛。产品纯度高,适
酵母核糖核酸的提取、水解及组成成分的鉴定
目的和要求 了解核糖核酸(RNA)的提取方法及其组成成分的定性测定。 原理 核酸在机体生命活动中具有重要意义,核酸可分为核糖核酸和脱氧核糖核酸两类。酵母中富含的核糖核酸在碱处理下成为可溶性的钠盐与蛋白质等其它成分分开,然后用乙醇提取。加酸水解核酸,可鉴定其组成成分。 用硫酸水解RNA时,可以生成磷酸
多糖多酚植物RNA提取的利器
众多文献报道,许多植物由于未能有效地分离纯化出其组织中的RNA, 而阻碍了其分子生物学方面的研究进展。比如Northern杂交分析,体外翻译分析或建cDNA文库,RT-PCR及差异显示分析等研究,都需要高质量的RNA。因此,提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。RNA提取的常见难
酵母核糖核酸(RNA)的提取、水解及组成成分的鉴定
原理 核酸在机体生命活动中具有重要意义,核酸可分为核糖核酸和脱氧核糖核酸两类。酵母中富含的核糖核酸在碱处理下成为可溶性的钠盐与蛋白质等其它成分分开,然后用乙醇提取。加酸水解核酸,可鉴定其组成成分。 用硫酸水解RNA时,可以生成磷酸、戊糖和碱基。各种成分以下列反应鉴定: (1) 磷酸与钼酸
多糖多酚植物RNA快速提取的方法
操作步骤:提示:(1) 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶加入指定量无水乙醇!(2) 操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,如1 ml RLT 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLT 4℃可放置一个月。1. 直接研磨法(推荐):a. 新鲜植物组织称重后取100m
多糖多酚植物总RNA快速提取试剂提取水稻胚乳总RNA
实验概要采用TAKARA的试剂提取水稻胚乳,主要是后期的胚乳RNA量偏少,不易提取!实验步骤1. 称量100mg的新鲜或者超低温冻结的植物RNA提取样品,迅速转移至用液氮预冷的研钵中,用研杵研磨组织,其间不断加入液氮,直至研磨成粉末状。2. 向研钵中加入1000μL RNAiso-mate for
苯酚法提取酵母RNA实验原理和操作步骤
(一)原理细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起,以核蛋白的形式存在。因此,提取RNA时要把RNA与蛋白质分离并除去。将细胞置于含有十二烷基磺酸钠(Sodium dodecyl sulfate,SDS)的缓冲液中,加等体积水饱和酚,通过剧裂振荡,然后离心形成上层水相和下层酚相。核酸溶于
酵母菌RNA制备实验—热酸性酚抽提法
实验材料酵母菌试剂、试剂盒TES酸性酚氯仿乙酸钠乙醇仪器、耗材离心管离心机摇床实验步骤1. 酵母细胞在10 ml 培养基中生长至指数中期(OD600=1.0)。 2. 将培养液转移到50 ml,离心管,于4℃,1 500 g 离心3 min。 3. 弃上清,菌体沉淀用1 ml 冰冷的水重悬,转
植物水溶性总糖的提取和含量测定——蒽酮比色法
一、目的: 1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。 3.学习分光光度计的使用。 二、原理: 糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后,与蒽酮(C14H10O)脱水缩合,形成糠醛
地蒽酚的含量测定
照紫外可见分光光度法(通则0401)测定供试品溶液取本品,精密称定,加三氯甲烷溶解并定量稀释制成每1ml中约含10g的溶液测定法取供试品溶液,在356nm的波长处测定吸光度,按C14H10O3的吸收系数(E%)为463计算。
酚磺乙胺的含量测定
含量测定照高效液相色谱法(通则0512)测定。供试品溶液取本品适量,精密称定,加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液对照品溶液取酚磺乙胺对照品适量,精密称定,加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液。系统适用性溶液与色谱条件见有关物质项下。系统适用性要求除灵敏度要求外,其他
福林酚法检测提取物的总酚含量的原理
多酚类化合物在碱性溶液中,钨钼酸可以将多酚化合物定量氧化,自身被还原(使W6+变为W5+)生成蓝色的化合物,蓝色的深浅程度与含酚基团的数目成正比。如果试样中含有其它分类化合物或其他还原物质,也会被同时测定。
RNA的提取与核酸的颜色反应
一. 目的学习用浓盐法从酵母中提取RNA掌握用等电点法沉淀RNA观察核酸的颜色反应,了解核酸定性与定量测定的原理熟练掌握普通离心机的使用方法二. 原理酵母繁殖快,生长周期短;其细胞质中的核酸大部分是RNA,而DNA很少;RNA提取液与菌体分离比较容易。因此,酵母是提取RNA的好材料。将RNA从细胞中
核糖核酸的测定
【实验原理】RNA分子中的核糖在浓酸中加热,脱水转变成糖醛,后者在氯化铁存在下,与地衣酚试剂(3,5-二羟基甲苯)反应,缩合成绿色化合物,在670nm处有最大吸收峰,从而可进行定量测定。待测样品中的RNA浓度在20~200µg/mL之间时,其吸光度与浓度成正比。反应式如下:核 糖 糖 醛 绿色化合物
RNA提取心得(组织RNA提取和培养细胞的RNA提取)
一.组织RNA提取 1.最好新鲜组织,这样RNA提取的效果比较好,这是肯定的。 2. 如果不是新鲜的(最好在半年之内,-80℃或者液氮中冻存的)组织,注意不要反复冻融,从冰冻状态拿到0-4℃,注意不要拿到常温,待组织解冻后,用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织,称重后,放到预冷的匀浆器中,然后
比色法测定磷含量
钼精矿中钼的1删定,部颁标准[ 推荐用氧化性酸溶解样品,氨水分离铁的氧化物沉淀,滤液中钼用钼酸铅重量法测定.然后,碱熔酸不溶残渣.水浸熔块,用比色法测滤液中钼.两次测定之和为钼精矿中钼的含量.如此操作,手续较繁锁.本工作所改进的方法是用碳酸钠-硼酸钠于高温熔解,酸化熔块,加氨水除杂,用钼酸铅重量j击
天麻提取物的活性成分及含量测定
活性成分 化学成分含天麻甙(天麻素,gastrodin)、天麻甙元、天麻醚甙(gastrodioside)、 派立辛(parishin)、香草醇、β2甾醇、对羟基苯甲醛、柠檬酸、琥珀酸等。 含量测定 照高效液相色谱法测定。 色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-
丙泊酚的含量测定方法
照高效液相色谱法(通则0512)测定。对照品溶液取丙泊酚对照品,精密称定,加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含3mg的溶液,摇匀供试品溶液、系统适用性溶液、色谱条件与系统适用性要求见有关物质项下。测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液,分别注人液相色谱仪,记录色谱图。按外标法以峰面积计算。
己烯雌酚的含量测定方法
照高效液相色谱法(通则0512)测定。供试品溶液取本品适量,精密称定,加乙醇水(1:1)溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液对照品溶液取己烯雌酚对照品适量,精密称定,加乙醇水(1:1)溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液。系统适用性溶液、色谱条件与系统适用性要求见有关物质项下
对乙酰氨基酚的含量测定
照紫外可见分光光度法(通则0401)测定供试品溶液取本品约40mg,精密称定,置250m量瓶中,加0.4%氢氧化钠溶液50ml溶解后,用水稀释至刻度,摇匀,精密量取5ml,置100ml量瓶中,加0.4%氢氧化钠溶液10ml,用水稀释至刻度,摇匀。测定法取供试品溶液,在257nm的波长处测定吸光,按C