探针的非放射性标记技术1
核酸探针是指能与特定核酸序列发生特异性互补的寡核苷酸链。核酸探针有双链DNA探针、单链DNA 探针、RNA探针和寡核苷酸探针。特异性探针来源于目的核酸的酶切片断、dd-PCR等差异显示中出现的差异片断、AFLP、RFLP、RAPD、SSR、CFLP等标记实验中出现的特异性基因标记片断。可以通过人工合成、酶切、PCR等手段富集探针。探针必须带上标记才能有用，不带标记的探针称为裸探针。探针标记是进行杂交及一些分子标记研究的前提。探针标记有单链标记、双链标记、直接标记及间接标记，放射性标记和非放标记。本实验主要介绍非放标记。目前国内外使用的非放标记主要有光敏生物素标记、地高辛标记及ECL直接化学发光标记等。1光敏生物素对探针的标记在强可见光的照射下，光敏生物素中的N3基团光解放出N2,生成反应活性极高的氮烯；N基团，易与核酸碱基中的伯胺基结合而形成共价标记。核酸中每100-150个碱基可结合一个生物素。一：仪器：光标记灯离心机二：......阅读全文
非放射性地高辛标记DNA探针法
实验概要掌握非放射性地高辛标记DNA探针法。 实验原理以往人们是用放射性同位素来标记探针DNA。近年来，非同位素标记方法发展很快，已有取代同位素标记法的趋势。地高辛配基随机标记DNA探针法，是较为成功的一种非同位素标记方法（Saiki等，1985）。其原理是：用化学方法把类固醇类半抗原地高辛分子连
非放射性标记探针的双重标记原位杂交
如果用不同的标记物标记不同的核酸探针，只要互相不影响各自的杂交反应，检测系统也不相互干扰，杂交信号易于分辨，原则上均能用于双重或多重标记原位杂交。应用非放射性标记探针的双重标记原位杂交。可克服放射性核素标记探针的分辨率低、时间长以及放射性污染等缺点。 1．应用生物素标记探针的双重标记
探针的非放射性标记技术2
一；仪器：同上 二：试剂：ECL标记盒，其余同上 三：操作：1：将待标记的DNA稀释至10ng/ml 2：将上述DNA在100℃5分钟，冰浴5分钟 3：离心后加入10ulECL标记混合物，混合均匀 4：加10ul戊二醛溶液混匀，37℃20分钟，此反应
探针的非放射性标记技术1
核酸探针是指能与特定核酸序列发生特异性互补的寡核苷酸链。核酸探针有双链DNA探针、单链DNA 探针、RNA探针和寡核苷酸探针。特异性探针来源于目的核酸的酶切片断、dd-PCR等差异显示中出现的差异片断、AFLP、RFLP、RAPD、SSR、CFLP等标记实验中出现的特异性基因标记片断。可以通过人
非放射性标记的方法介绍
中文名称非放射性标记英文名称nonradiometric labeling;nonradioactive labeling定 义用荧光、显色物质或稳定性同位素等非放射性物质代替放射性核素对化合物进行的标记。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
核酸探针标记
实验概要核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针;根据是否使用放射性标记物与否,可分为放射性标记探针和非放射性标记探针;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。实验原理分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于转基因
PCR扩增标记法探针标记
PCR扩增标记法探针标记 PCR扩增标记法的原理与普通的核酸PCR相同。即Taq DNA多聚酶以DNA为模板，在特异引物引导下，在PCR仪中合成cDNA探针。由于在反应体系中加入一定量的标记dNTP，因此扩增的同时又是一个标记过程。cDNA探针PCR扩增法标记原理
简述探针标记方法
①缺口平移标记法。利用的是DNA聚合酶I能修复DNA链的功能。该法先由DNaseI在DNA双链上随机切出切口，然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´；端核苷酸，同时在3´；端修复加入被标记核苷酸，切口平行推移。缺口平移法快速、简便、成本相对较低、比活性相对较高、标记均匀，多用于大分
用寡聚（dT）作引物合成放射性标记的扣除cDNA探针
本方案描述通过与 mRNA 驱动方杂交，继之以羟基磷灰石层析纯化单链放射性标记的 cDNA，制备扣除 cDNA 探针。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理本方案描述通过与 mRNA 驱动方杂交，继之以羟基磷灰石层析纯化单链放射性标记的 cDNA，制备扣除 cDNA 探针。实验
用寡聚（dT）作引物合成放射性标记的扣除cDNA探针
实验方法原理 本方案描述通过与 mRNA 驱动方杂交，继之以羟基磷灰石层析纯化单链放射性标记的 cDNA，制备扣除 cDNA 探针。实验材料 反转录酶反转录酶缓冲液驱动方 mRNA模板 mRNA试剂、试剂盒 乙酸铵DTTEDTA乙醇HCl异丁醇NaOH酚氯仿胎盘 RNA 酶抑制剂SDSSDS EDT
放射性碘标记
在RIA中，标记抗原质量的优劣，直接影响测定结果，必须制备比放射性强、纯度高的标记抗原，并保持免疫活性不受丧失。 一、同位素的选择 同位素有稳定性和放射性两种。放射性同位素可利用其衰变时放出的放射线进行测量，这种测量较灵敏而方便，故多用放射性同位素。标记抗原，常用的放射性同位素有3H、14C、1
方案13阵列探针标记及激酶底物相互作用放射性印迹检测
实验材料合适的激酶目标蛋白制备有蛋白质阵列的玻片试剂、试剂盒ATPDektol 显影剂干燥剂激酶缓冲液照相用定影剂NTB-2 放射自显影感光乳液冲洗缓冲液仪器、耗材β-射线盒离心机孵育箱光学扫描显微镜实验步骤展开
放射性标记的探针与固定在膜上的核酸Southern杂交
放射性标记的探针与固定在膜上的核酸Southern杂交1. 将含有靶DNA的膜漂浮在盛有6×SSC（或6×SSPE）的皿中直到膜自下面而上完全浸湿。将膜浸于溶液中2 min。2. 用下列方法之一进行预杂交在热密封的袋中进行的杂交a. 将膜塞入热密封袋中（如Sears Seal-A-Mea
利用聚合酶链反应制备放射性标记的DNA探针
实验材料 耐热的 DNA 聚合酶模板 DNA试剂、试剂盒 乙酸铵扩增缓冲液氯仿乙醇TEdCTPdNTP 溶液仪器、耗材 屏障吸头微量离心管正向置换进样器Sephadex G-50 离心柱热循环仪实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液乙酸铵（10 mol/L)10X 扩增缓冲液用于乙醇沉淀放射性标记探针
利用聚合酶链反应制备放射性标记的DNA探针
实验材料 耐热的 DNA 聚合酶 模板 DNA 试剂、试剂盒 乙酸铵 扩增缓冲液
放射性标记探针与核酸杂交反应的步一般过程
1、配制所需试剂SSC 溶液(20×):3mol/L NaCl,0.3mol/L 柠檬酸钠。Denhardt’s溶液(50×):聚蔗糖5g,聚乙烯吡咯烷酮5g,牛血清白蛋白(BSA)5g,加水至500mL。预杂交液:6×SSC,5×Denhardt’s溶液,0.5%SDS,100μg/mL 经变性或
利用聚合酶链反应制备放射性标记的DNA探针
实验材料耐热的 DNA 聚合酶模板 DNA试剂、试剂盒乙酸铵扩增缓冲液氯仿乙醇TEdCTPdNTP 溶液仪器、耗材屏障吸头微量离心管正向置换进样器Sephadex G-50 离心柱热循环仪实验步骤一、材料1. 缓冲液和溶液乙酸铵（10 mol/L)10X 扩增缓冲液用于乙醇沉淀放射性标记探针的载体氯
基因探针的标记方法
为了确定探针是否与相应的基因组DNA杂交，有必要对探针加以标记，以便在结合部位获得可识别的信号,通常采用放射性同位素32P标记探针的某种核苷酸α磷酸基。但近年来已发展了一些用非同位素如生物素、地高辛配体等作为标记物的方法。但都不及同位素敏感。非同位素标记的优点是保存时间较长,而且避免了同位素的污染。
地高辛对探针的标记
实验概要本实验拟通过随机引物及PCR方法，将DNA探针片段用DIG标记，进一步掌握探针的标记技术。实验原理带有地高辛标记的dUTP（图1）通过缺口翻译、随机翻译或PCR等反应而使探针核酸片段带有地高辛，进一步可与带有AP、CSP等各种抗地高辛抗体复合物发生免疫反应，使探针上带有AP等分钟，进一步能催
基因探针标记的介绍
探针是能与特异靶分子反应并带有供反应后检测的合适标记物的分子。利用核苷酸碱基顺序互补的原理,用特异的基因探针即识别特异碱基序列的有标记的一段单链DNA（或RNA）分子,与被测定的靶序列互补,以检测被测靶序列的技术叫核酸探针技术。探针制备就是将目的基因进行标记。特异性探针有三种形式——cDNA、R
核酸探针标记的简介
核酸探针根据核酸的性质,可分为DNA和RNA探针；根据是否使用放射性标记物的与否,可分为放射性标记探针和非放射性标记探针；根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针；根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。下面将介绍各种类型的探针及标记方法。
随机引物法标记探针
实验概要本实验探针标记采用TAKARA公司的随机引物标记试剂盒Ver.2。实验步骤1．于1.5ml离心管中加入5μl H2O，2μl引物(N6)，5μl DNA(0.1μg-1μg)。2．充分混匀，98°C 3分钟。3．离心1秒钟，将离心管盖上的汽化水甩下。4．加入2.5μl dNTPs(各2.5m
关于探针标记的简述
探针是能与特异靶分子反应并带有供反应后检测的合适标记物的分子。利用核苷酸碱基顺序互补的原理，用特异的基因探针即识别特异碱基序列的有标记的一段单链DNA（或RNA）分子，与被测定的靶序列互补，以检测被测靶序列的技术叫核酸探针技术。探针制备就是将目的基因进行标记。特异性探针有三种形式——cDNA、R
RNA－放射性标记
实验材料 [α32P]UTP 或 CTP(800Ci ml 10mCi ml) UTP 或 CTP T4 多核苷酸激酶 (γ32P)ATP
RNA－放射性标记
实验材料 [α32P]UTP 或 CTP(800Ci ml10mCi ml) UTP 或 CTP T4 多核苷酸激酶(γ32P)ATP 牛小肠磷酸酶T4RNA 连接酶 [32P]pCpATP2Oumol L 无 tRNA 酶的牛血清白蛋白试剂、试剂盒 10XT4 多核苷酸激酶缓冲液 DEPC 处理的
放射性标记的探针与固定在膜上的核酸的Southern杂交
Southern 杂交获得的信号强度取决于若干因素，包括固定的 DNA 与探针互补的比例、探针的大小及特异活性以及转移到膜上的基因组 DNA 的数量。在最佳条件下，这种方法的敏感度足以检测到与 32P 标记的高度特异（>109 cpm/μg）的探针互补的109 cpm/μg）的探针互补的
放射性标记的探针与固定在膜上的核酸的Southern杂交
实验方法原理 Southern 杂交获得的信号强度取决于若干因素，包括固定的 DNA 与探针互补的比例、探针的大小及特异活性以及转移到膜上的基因组 DNA 的数量。在最佳条件下，这种方法的敏感度足以检测到与 32P 标记的高度特异（>109
放射性标记的探针与固定在膜上的核酸的Southern杂交
实验方法原理 Southern 杂交获得的信号强度取决于若干因素，包括固定的 DNA 与探针互补的比例、探针的大小及特异活性以及转移到膜上的基因组 DNA 的数量。在最佳条件下，这种方法的敏感度足以检测到与 32P 标记的高度特异（>109 cpm/μg）的探针互补的
核酸探针标记的实验过程
实验原理分子生物研究中，zui常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于转基因植物拷贝数的鉴定、临床诊断等方面。双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可
核酸探针标记的实验过程
实验原理分子生物研究中，zui常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于转基因植物拷贝数的鉴定、临床诊断等方面。双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将