单克隆抗体制备
1. 免疫动物：三只Balb/c小鼠 2. 佐剂：首先用完全弗氏佐剂（CFA），后用不完全弗氏佐剂（IFA）。 3. 免疫原：蛋白或KLH偶联多肽。每次免疫使用50-100µg免疫原。 4. 免疫：用PBS稀释免疫原，然后与相应的佐剂1：1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂，将该乳剂在小鼠双肩周围的皮肤下进行皮下注射和后腿进行肌肉注射。每个区域大约用1/8的免疫原。接着将1/2的免疫原进行腹腔注射，这样免疫原可以持久存在从而提高免疫应答。以后每个星期进行腹腔注射直到达到要求的效价。 5. 第0星期 预采血 完全弗氏佐剂（CFA）混合的100µg抗原免疫小鼠。 第2星期 完全弗氏佐剂（CFA）混合的50µg抗原免疫小鼠。 第3星期 不完全弗氏佐剂（IFA）混合的50µg抗原免疫小鼠。 第4星期 溶解在PBS中的50......阅读全文
制备单克隆抗体靶向制剂主要方法有哪些
单抗靶向制剂用的比较多的就是贝伐单抗，联合化疗药物用，实际意义因人而异。1、被动靶向制剂（脂质体、乳剂、微球、纳米囊和纳米球等）2、主动靶向制剂（修饰脂质体、长循环脂质体、免疫脂质体等）3、物理化学靶向制剂（磁性靶向制剂、栓塞靶向制剂、热敏靶向制剂、PH靶向制剂）
单克隆抗体上清制备实验——大量制备杂交瘤或细胞系
实验步骤1. 同备择方案 1 中大规模制备 MAb 上清的步骤 1～4，但等细胞长到合适的密度时就应收获细胞，或者是在细胞生长的平台期收获。2. 将细胞倒入无菌的 250 ml 锥形离心管中，于 4℃ 250 g 离心 15 min, 弃上清，置细胞沉淀于冰上。3. 将 10 瓶细胞沉淀用 4℃ 的
单克隆抗体培养上清与腹水的制备——上清的大规模制备
实验步骤附 加 材 料（其他材料见基本方案 1)含有 5〜10 mmol/L HEPES 的 DMEM 完全培养基和 DMEM-IO 完 全 培 养 基（附录1) ， pH 为 7. 2〜7.47 0 % (VAO 乙醇FBS1 0 % (m A O 叠氮钠，可选的850 cm2 滚筒式培养瓶和滚筒
抗磷酸肽的单克隆抗体制备实验
实验方法原理 实验材料 融合后的候选杂交瘤细胞系BSA 交联的同种磷酸肽BSA 交联的同种非磷酸肽BSA 交联的非同种磷酸酪氨酸肽BSA 交联的同源磷酸肽试剂、试剂盒 筛选稀释液阴性对照（用于制备杂交瘤系的小鼠的免疫前血清）阳性对照（用于制备杂交瘤系的小鼠的免疫后血清）仪器、耗材 HT 培养基96
关于单克隆抗体制备脾细胞的选择介绍
1．材料 (1)免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。 单克隆抗体制备流程 单克隆抗体制备流程 (2)1640培养液(3)2.5%FCS－1640营养液 2．操作方法 (1)拉颈或用CO2处死小白鼠。 (2)将小鼠放于70%酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在无菌条件下取脾。 (
抗磷酸肽的单克隆抗体制备实验
实验材料融合后的候选杂交瘤细胞系BSA 交联的同种磷酸肽BSA 交联的同种非磷酸肽BSA 交联的非同种磷酸酪氨酸肽BSA 交联的同源磷酸肽试剂、试剂盒筛选稀释液阴性对照（用于制备杂交瘤系的小鼠的免疫前血清）阳性对照（用于制备杂交瘤系的小鼠的免疫后血清）仪器、耗材HT 培养基96 孔聚苯乙烯组织培养板
抗磷酸肽的单克隆抗体制备实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 融合后的候选杂交瘤细胞系 BSA 交联
单克隆抗体腹水制备实验——杂交瘤细胞接种
实验方法原理高滴度的单克隆抗体的制备可以通过在小鼠的腹腔内接种能产生 MAb 的杂交瘤细胞，从而产生腹水来获得。腹水可收集几次，经热灭活、滴定后储存。实验材料裸鼠（6～8 周龄 无特定病原体／注射了鼠鼠杂交瘤细胞的同系宿主）目的杂交瘤试剂、试剂盒完全DMEM-10培养液（含10mmol／L HEPE
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备方法
制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产，要经过几个月的一系列实验步骤，下面按照制备单克隆抗体的流程顺序，逐一介绍其实验方法。一、细胞融合前准备（一） 免疫方案选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。
β内酰胺酶单克隆抗体和多克隆抗体的制备
β-内酰胺酶单克隆抗体和多克隆抗体的制备 目前，在我国奶牛养殖业中，青霉素和头孢菌素等β-内酰胺类抗生素对奶牛乳房炎等疾病的控制起着十分重要的作用。由于一些奶牛养殖商户滥用抗生素以及未严格遵守休药期，致使牛奶中抗生素残留超标，乳中残留的抗生素严重危害食品安全和人体健康。我国政府对超过一定限
高亲和力单克隆抗体制备问题及对策
1，细胞长的慢或细胞死亡正常生长情况下，细胞一天传代一次，生长越好，贴壁越多对策：①培养基配方不对；② 接种密度太低，低于10的4次方；③污染了支原体或者其他不明细菌，支原体的现状是出现小黑点；细菌污染是浑浊；霉菌污染是出现白色肉眼可见菌落；不明细菌污染出现砂状平铺背景，视野发暗。④细胞瓶刷洗不干净
显微镜操作法－单克隆抗体制备流程
在直径6cm培养皿中，加入1ml1.0×108细胞悬液放置5%CO2饱和湿度，37℃温箱中放置30min以上，倒置显微镜下，寻找那些与周围相距甚远的单个细胞，将毛细管口（一头有直角弯头毛细管，一头连接一尺长乳胶管，用口控制液体进入）水平置放于液面上，左右微动，直到看见管口，对准细胞，吸入毛细管，将管
单克隆抗体制备的基本原理与过程
单克隆抗体制备的原理：B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力、B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的、将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤
关于单克隆抗体制备骨髓瘤细胞的介绍
骨髓瘤细胞能产生并分泌大量的免疫球蛋白，这样的瘤细胞融合后，可能影响或降低所分泌抗体的滴度，所以必须选育出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤细胞。 选择骨髓瘤细胞的条件： ①该瘤细胞系的来源应与制备脾细胞小鼠为同一品系，以便两者的组织相容性抗原一致； ②骨髓瘤细胞必须是静息状态，不产生γ球蛋白
单克隆抗体培养上清与腹水的制备——杂交瘤的大规模制备
实验步骤附 加 材 料（其 他 材 料 见备选方案 1 )PBS, 4°C1.增 殖 杂 交 瘤（见备选方案 1 ，步 骤 1〜4)，但与之前不同的是，当细胞生长密度适中或处于稳定生长期时停止培养。根据所需细胞数量配置多个 175 cm2 培 养 瓶（每个培养瓶可盛 2. 4L 培养基，每毫升培养基
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备技术1
1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单克隆抗体包括动物免
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备技术3
抗体的制备方法与原理一、抗血清的制备 有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好（特异性强和效价高）的抗体。 （一）用于免疫的动物 作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备技术4
（二）细胞融合 1．细胞融合前准备 （1）骨髓瘤细胞系的选择：骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。常用的骨髓瘤细胞系见表2-4。表2-4用于融合试验的主要骨髓瘤细胞系名 称来 源耐 受 药 物Ig链H LP3/X63-Ag
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备技术5
免疫组化染色方法 SP法1）脱蜡、水化；2）PBS洗2～3次各5分钟；3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在TMA上，室温静置10分钟；4）PBS洗2～3次各5分钟； 5）抗原修复；6）PBS洗2～3次各5分钟；7）滴加正常山羊血清封闭液,室温20分钟。甩去多余液体。8）滴加Ⅰ抗50μl，室温静置1小
β内酰胺酶单克隆抗体和多克隆抗体的制备（上）
β-内酰胺酶单克隆抗体和多克隆抗体的制备目前，在我国奶牛养殖业中，青霉素和头孢菌素等β-内酰胺类抗生素对奶牛乳房炎等疾病的控制起着十分重要的作用。由于一些奶牛养殖商户滥用抗生素以及未严格遵守休药期，致使牛奶中抗生素残留超标，乳中残留的抗生素严重危害食品安全和人体健康。我国政府对超过一定限量抗生素的原
β内酰胺酶单克隆抗体和多克隆抗体的制备（下）
1.7 抗体纯化1.7.1 多克隆抗体的纯化采用辛酸-饱和硫酸铵法纯化抗β-内酰胺酶的兔血清，2次滴加饱和硫酸铵的最终体积分数分别为50%和40%。将沉淀用少量PBS溶解后转入透析袋中，用PBS溶液透析48h，利用紫外分析法检测透析液直至透析完全。1.7.2 单克隆抗体的纯化采用PEG6000沉淀法
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备技术2
检测抗体的方法应根据抗原的性质、抗体的类型不同，选择不同的筛选方法，一般以快速、简便、特异、敏感的方法为原则。 常用的方法有: 1. ELISA用于可溶性抗原蛋白质、细胞和病毒等McAb的检测。 2. RIA用于可溶性抗原、细胞McAb的检测。 3. FACS荧光激活细胞分类仪用于检查细胞
上海巴斯德所合作开发出人单克隆抗体新型制备技术
2011年12月25日，Molecular Biotechnology 在线发表了中科院上海巴斯德研究所周保罗研究组题为“用波浪生物反应器进行灌注培养稳转了人单克隆抗体基因的果蝇细胞系高产人单克隆抗体”的文章。这是首次关于用波浪生物反应器灌注培养稳转了人单克隆抗体基因的果蝇S2细胞来产生人单克隆
单克隆抗体制备中两次筛选的方法及原理
第一次筛选的原理与方法 细胞融合后 杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键 普遍采用的HAT选择培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H） 氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）其依据是细胞中的DNA合成有两条途径是生物合成途径（D途径）即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸 为DNA分子的
抗体的概念动物产生抗体的机理及单克隆抗体的制备方法
抗体的概念 动物机体受到抗原物质的刺激后, 由B淋巴细胞转化为浆细胞产生的, 能与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白, 这类免疫球蛋白称为抗体(Antibody,简称 Ab)。 免疫球蛋白 免疫球蛋白(Immunogolobulin, 简称Ig) 是指存在于人和动物血液(
单克隆抗体
· Tips and hints for the storage of antibodies (Synaptic Systems)· Purification of IgG Using Protein A- or Protein G-Agarose(KPL)·
单－克－隆－抗－体－的－制－备——单克隆抗体制备中的免疫接种
实验步骤 材料靶抗原：表达于细胞的抗原，或蛋白质、多肽生理盐水无血清培养基：仅用于细胞接种弗 氏 完 全 佐 剂（ complete Freunds adjuvant， CFA)， Sigma 公司实验动物：无 病 原 体 大 鼠 、小 鼠（推 荐 使 用 BALB/c小 鼠）或 仓 鼠（推荐使用C
单克隆抗体技术
实验概要显微镜下观察血片或骨髓片，找出异常细胞。实验原理B淋巴细胞能够产生抗体，但在体外不能进行无限分裂；而骨髓瘤细胞可以在体外无限传代，但不能产生抗体。将这两种细胞融合后，用一特殊选择培养基(HAT)阻断正常细胞或自体融合细胞的DNA合成通路，而杂交瘤细胞可利用补救通路合成DNA得以生存，且既能产
单克隆抗体技术
实验原理 B淋巴细胞能够产生抗体，但在体外不能进行无限分裂；而骨髓瘤细胞可以在体外无限传代，但不能产生抗体。将这两种细胞融合后，用一特殊选择培养 基（HAT）阻断正常细胞或自体融合细胞的DNA合成通路，而杂交瘤细胞可利用补救通路合成DNA得以生存，且既能产生抗体，又能无限增殖，并以此生产抗
单克隆抗体技术
实验概要显微镜下观察血片或骨髓片，找出异常细胞。实验原理B淋巴细胞能够产生抗体，但在体外不能进行无限分裂；而骨髓瘤细胞可以在体外无限传代，但不能产生抗体。将这两种细胞融合后，用一特殊选择培养基(HAT)阻断正常细胞或自体融合细胞的DNA合成通路，而杂交瘤细胞可利用补救通路合成DNA得以生存，且既能产