原代培养结肠平滑肌细胞(HCSMC)

实验步骤:(一)、取SD 大鼠一只,实验时断椎处死。(二)、在无菌条件下快速自肛门上2 cm 取结肠10 cm 左右,生理盐水中反复灌肠冲洗。(三)、移入含300 U/ml青霉素、300 U/ml 链霉素的HepesRinger缓冲液中浸泡,肠段内外各15 min。(四)、将经抗生素浸泡过的肠段移入含Hepes Ringer缓冲液的塑料培养板中(培养板预先铺上705胶),在体视显微镜下沿肠系膜对侧纵行切开肠段,皮内针固定好四角,仔细地刮除粘膜层,翻转至外侧,小心地撕去肠系膜,再仔细地刮去浆膜层。(五)、反复用镊子侧角刮肠段的内、外层,直至余下的组织层在体视显微镜下观察到呈透明的一层为止。将组织层剪碎匀浆,加入到4 ml 含0.1% Ⅱ 胶元酶和0.01% 大豆胰蛋白酶抑制剂的消化液中,30 ℃ 恒温水浴震荡20 min,离心,弃消化液。(六)、再加入6 ml消化液,30 ℃ 恒温水浴震荡30 min,加对倍缓冲液中止消化,用滴管......阅读全文

原代培养结肠平滑肌细胞(HCSMC)

实验步骤:(一)、取SD 大鼠一只,实验时断椎处死。(二)、在无菌条件下快速自肛门上2 cm 取结肠10 cm 左右,生理盐水中反复灌肠冲洗。(三)、移入含300 U/ml青霉素、300 U/ml 链霉素的HepesRinger缓冲液中浸泡,肠段内外各15 min。(四)、将经抗生素浸泡过的肠段移入

基底动脉平滑肌细胞原代培养方法

原代细胞培养:取5kg左右兔空气栓塞法处死后断头,于无菌条件下从枕大孔处用大止血箝扳开颅骨暴露并小心取出脑组织放入装有DMEM的培养皿中,用眼科镊分离基底动脉后按常规平滑肌方法贴块培养。传代:(1)吸除培养瓶内旧培养液。(2)D-Hanks液冲洗2遍。(3)加入消化液少许,以能覆盖瓶底为限。(4)倒

正常大鼠原代主动脉平滑肌细胞培养

一、实验试剂 1、培养基: PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement2、冻存液: PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO3、洗涤液: 1 × PBS (pH 7.4 )+ 1% P/S4、染色液

平滑肌细胞培养方法

贴壁法原代培养1.1 细胞培养1.1.1 培养液配制 DMEM(美国Gibco公司),Hepes(15mmol/L),青霉素(100u/ml),链霉素(100mg/ml),优质胎牛血清(原代培养浓度20%,传代培养浓度10%,美国Hyclone)。1.1.2 培养器皿 25cm2塑料培养瓶(Cost

兔膀胱平滑肌细胞培养

实验方法原理 运用显微手术器械在肉眼下仔细剔除膀胱黏膜层及浆膜层后,完整分离膀胱平滑肌层。然后以酶分离法获取兔膀胱平滑肌细胞,体外原代和传代培养分离细胞。在倒置显微镜下观察细胞形态及生长状况,同时进行细胞爬片H-E染色和透射电镜等形态学观察分析,并应用免疫荧光染色平滑肌特有的α-肌动蛋白进行细胞学鉴

平滑肌细胞的分离和培养

实验材料0.25%胰蛋白酶和EDTA混合液                                                          试剂、试剂盒平滑肌培养液                                                          仪

平滑肌细胞培养方法3

2 结果2.1 体外培养的胎儿脐动脉血管平滑肌细胞的形态观察 实验中观察到脐动脉组织块贴壁后5~7d可见有细胞以垂直方向从组织块周围游走出来(见图1),但并不是所有的组织块周围都有细胞游出,离组织块较远的区域也可以看到细胞,此为平滑肌细胞的漂移性生长特性(见图2),细胞形态多样,大小不一,多为长梭形

平滑肌细胞的分离和培养

实验材料0.25%胰蛋白酶和EDTA混合液试剂、试剂盒平滑肌培养液仪器、耗材Petri培养皿手术刀和10号手术刀片解剖剪组织镊实验步骤1. 从小牛取胸主动脉。2. 将胸主动脉浸入 Hanks 液。3. 分离细胞之前将动脉放在冰上。4. 将动脉放入 150 mm × 25 mm Petri 培养皿。5

平滑肌细胞培养方法2

1 材料与方法1.1 材料 9~12d新生健康清洁级KM小鼠,雌雄不限,购自重庆医科大学实验动物中心。RPMI-1640干粉培养基,D-Hanks粉,标准胎牛血清,胰蛋白酶粉(1∶250)均购自Hy-Clone公司;青霉素钠、硫酸链霉素购自华北制药厂;鼠抗兔平滑肌α肌动蛋白单克隆抗体,购自Zymed

平滑肌细胞培养方法4

 动脉平滑肌细胞培养的几个问题组织块大小边缘密度翻面时间观察时间对原代细胞萌发的影响对于贴块法的原代培养来源,由于细胞并非直接获得,而是从组织块边缘长出,其中有一“突破过程”,且细胞萌发后尚需一定的细胞密度才能使其存活、增殖,故组织块大小、边缘、密度均影响细胞萌出与否及细胞存活、增殖。公认的方法是将

新生大鼠心肌细胞原代培养实验——原代培养技术

新生大鼠心肌细胞原代培养可应用于:(1)细胞保种;(2)用于细胞形态研究;(3)应用于临床研究。实验方法原理将大鼠的心肌细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料SD 乳鼠试剂、试剂盒低糖 DMEM、胰酶EDTA青链

兔膀胱平滑肌细胞培养实验

酶分离法             实验方法原理 运用显微手术器械在肉眼下仔细剔除膀胱黏膜层及浆膜层后,完整分离膀胱平滑肌层。然后以酶分离法获取兔膀胱平滑肌细胞,体外原代和传代培养分离

兔膀胱平滑肌细胞培养实验

酶分离法             实验方法原理 运用显微手术器械在肉眼下仔细剔除膀胱黏膜层及浆膜层后,完整分离膀胱平滑肌层。然后以酶分离法获取兔膀胱平滑肌细胞,体外原代和传代培养分离

一分钟带你了解动脉平滑肌细胞的原代培养流程

 动脉平滑肌细胞又叫平滑肌纤维,系构成平滑肌的纤维状长细胞。在制作切片标本时,如肌细胞收缩则可变粗,核也随之变粗,甚至可出现螺旋形的扭曲。平滑肌细胞外面包有1层肌膜。每个平滑肌细胞周围有少量纤细的胶质纤维、弹力纤维及网状纤维,包绕于肌膜的表面。    动脉平滑肌细胞培养:取5kg左右实验兔,于无菌条

正常小鼠原代骨骼肌细胞培养

PriCells –正常小鼠原代骨骼肌细胞培养 一、实验试剂1、培养基: PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement2、冻存液: PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO3、洗涤液: 1 × PBS

原代心肌细胞培养方法探讨

摘要 探讨培养Wister新生大鼠心肌细胞的可靠方法。采用心肌组织块差别消化结合化学纯化的培养方法,通过倒置显微镜、HE染色、透射电镜、台盼篮、免疫细胞化学,鉴定心肌细胞生长情况及纯度。结果细胞生长迅速、自行搏动,细胞形态完整,细胞内肌丝、线粒体清晰;细胞成活率达94.6%;肌动蛋白(HHF35)经

人脐动脉平滑肌细胞培养实验

消化法 贴块法             实验方法原理 运用消化法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的培养,并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定。

人脐动脉平滑肌细胞培养实验

消化法 贴块法             实验方法原理 运用消化法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的培养,并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定。

大鼠主动脉平滑肌细胞培养

实验方法原理 运用组织块贴壁法进行SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞培养,并用倒置相差显微镜观察、HE染色后形态学观察以及用免疫组化对培养细胞进行鉴定。实验材料 SD大鼠试剂、试剂盒 PBSFBSDMEM仪器、耗材 手术剪手术钳眼科剪刀眼科镊子大头针手术刀培养皿实验步骤 一、实验步骤1. SD 大鼠(150

新生大鼠心肌细胞原代培养实验

原代培养技术             实验方法原理 将大鼠的心肌细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。

新生大鼠心肌细胞原代培养实验

原代培养技术             实验方法原理 将大鼠的心肌细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。

大鼠主动脉平滑肌细胞培养实验

贴块法             实验方法原理 运用组织块贴壁法进行SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞培养,并用倒置相差显微镜观察、HE染色后形态学观察以及用免疫组化对培养细胞进行鉴定。

小鼠支气管平滑肌细胞的分离培养方法

平滑肌即无纹肌的通称,平滑肌是由长纺锤形的单核细胞构成。它不构成独立的器官,而只是成为构成体壁和内脏壁的因素(肌层)。平滑肌细胞互相连接,形成管状结构或中空器官;在功能上可以通过缩短和产生张力使器官发生运动和变形,也可产生连续收缩或紧张性收缩,使器官对抗所加负荷而保持原有的形状。小鼠支气管平滑肌细胞

新生大鼠心肌细胞原代培养实验(二)

 3.   用第二套手术器械进行下列操作。用眼科直镊和眼科弯剪把培养皿中的心脏周边的血凝块及纤维组织剔除掉,放在另一个预先装好D-Hank's液的培养皿中,把心脏组织再洗一遍后,将心脏组织放在另外一个培养皿中(或者其它合适容器中,视个人习惯),加少许 0.06%胰酶,用眼科弯剪将心脏

新生大鼠心肌细胞原代培养实验(一)

新生大鼠心肌细胞原代培养可以:(1)细胞保种;(2)用于细胞形态研究;(3)应用于临床研究。实验方法胰酶消化法实验方法原理将大鼠的心肌细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料SD 乳鼠试剂、试剂盒低糖 DMEM、胰

正常大兔主动脉平滑肌细胞培养

实验材料:1. 正常大兔主动脉2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素,pH7.23. 消化液:0.125%胰蛋白酶,0.1%胶原酶Ⅰ4. 细胞培养瓶(T25)5. 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪,眼科镊6. 网筛(100目)7. 离心管(15m

人脐动脉平滑肌细胞培养实验——消化法

人脐动脉平滑肌细胞培养可以:(1)获得人脐动脉平滑肌细胞;(2)作为重大动脉疾病的研究底物;(3)研究血管模型;(4)对血管疾病的药理学和治疗继续提供信息。实验方法原理运用消化法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的培养,并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定。实验材料脐带试剂、试剂盒胶原

细胞技术专题:兔膀胱平滑肌细胞培养实验(一)

兔膀胱平滑肌细胞培养可以:(1)分离得到高纯度兔膀胱平滑肌细胞;(2)进行细胞学鉴定研究;(3)用于细胞学其他研究。实验方法酶分离法 实验方法原理运用显微手术器械在肉眼下仔细剔除膀胱黏膜层及浆膜层后,完整分离膀胱平滑肌层。然后以酶分离法获取兔膀胱平滑肌细胞,体外原代和传代培养分离细胞。在倒置显微镜下

细胞技术专题:人脐动脉平滑肌细胞培养实验

人脐动脉平滑肌细胞培养可以:(1)获得人脐动脉平滑肌细胞;(2)作为重大动脉疾病的研究底物;(3)研究血管模型;(4)对血管疾病的药理学和治疗继续提供信息。实验方法消化法 贴块法 实验方法原理运用消化法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的培养,并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定。 实

大鼠平滑肌细胞的另一种培养方法

显微器械:眼科剪一把,直弯眼科镊各一把,细结镊一把,手术刀一把,针头诺干杀老鼠器械:手术剪一把,大镊子一把,弯眼科镊一把,组织钳一把,50ml烧杯一个(锡纸包好)另外:10ml离心管两个,培养皿两个,10ml的瓶子三个,小滤器两个,硅胶板一块,培养瓶盖子诺干贰。试剂D-HANKS液250ml,双抗2