毛细电泳实验常见的13个问题
一、无样品峰出现 A、检查电流是否稳定： ①没有电流。 可能原因——毛细管堵塞或断裂。 解决方法——用水冲洗毛细管，并观察是否有水流出，若无水流出请拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂；毛细管没有断裂的话可以用水反向高压冲洗以试图解决此问题。缓冲溶液需要过滤，将样品过滤或者离心去除其中的颗粒。 ②电流波动很大，直至几乎消失。 可能原因——缓冲溶液中有气泡产生或者区带中样品析出。 解决方法——将缓冲溶液超声脱气，如果还有此现象发生，则可能是样品区带有析出，可以通过降低样品浓度/延长ramp time来试图解决这一问题；对于在缓冲溶液中溶解度不高的样品则需要在缓冲溶液中加入添加剂以解决此问题。 ③电流初始值较小，后逐渐增大。 可能原因——样品进样量过大。 解决方法——减少进样量，通常进样参数设置在0.5psi,5sec左右。 ④电流正常。 可能原因：a样品浓......阅读全文
毛细电泳实验常见的13个问题
一、无样品峰出现 A、检查电流是否稳定： ①没有电流。 可能原因——毛细管堵塞或断裂。 解决方法——用水冲洗毛细管，并观察是否有水流出，若无水流出请拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂；毛细管没有断裂的话可以用水反向高压冲洗以试图解决此问题。缓冲溶液需要过滤，将样品过滤或
毛细管电泳实验常见问题解答
一、无样品峰出现 A、检查电流是否稳定： ①没有电流。 可能原因——毛细管堵塞或断裂。 解决方法——用水冲洗毛细管，并观察是否有水流出，若无水流出请拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂；毛细管没有断裂的话可以用水反向高压冲洗以试图解决此问题。缓冲溶液需要过滤，将样品过滤或者离心去除其中的
做电泳实验常见条带问题分析
一、微笑形区带（两边翘起，中间凹下）： 形成原因：主要是由凝胶中间部分凝固不均匀引起的，多出现于较厚的凝胶中。处理办法：待其充分凝固再做实验。二、皱眉形区带（两边向下，中间鼓起）：形成原因：主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是由两板之间的底部间隙气泡未排除干净引起的。处理办法：可在两板之间加入适量缓
做电泳实验常见条带问题分析
一、微笑形区带（两边翘起，中间凹下）： 形成原因：主要是由凝胶中间部分凝固不均匀引起的，多出现于较厚的凝胶中。 处理办法：待其充分凝固再做实验。 二、皱眉形区带（两边向下，中间鼓起）： 形成原因：主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是由两板之间的底部间隙气泡未排除干
双向凝胶电泳实验常见问题分析
(1)低拷贝蛋白的鉴定。人体的微量蛋白往往还是重要的调节蛋白。除增加双向凝胶电泳灵敏度的方法外，最有希望的还是把介质辅助的激光解吸/离子化质谱用到PVDF膜上，但当前的技术还不足以检出拷贝数低于1000的蛋白质。(2)极酸或极碱蛋白的分离。(3)极大（>200kD）或极小（
毛细管电泳仪常见问题解决方案
毛细管电泳仪常见问题解决方案：一、无电泳峰：1、检查结果：没有电流。可能原因：毛细管堵塞或断裂。解决方案：用水冲洗毛细管，观察是否有水流出。若无水流出，拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂。若毛细管没断裂，可用水反向高压冲洗。缓冲液需过滤，将样品过滤或离心去除其中的颗粒。2、检查结果：电流波动很大，
跑电泳常见条带问题分析
一、微笑形区带（两边翘起，中间凹下）： 形成原因：主要是由凝胶中间部分凝固不均匀引起的，多出现于较厚的凝胶中。处理办法：待其充分凝固再做实验。二、皱眉形区带（两边向下，中间鼓起）：形成原因：主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是由两板之间的底部间隙气泡未排除干净引起的。处理办法：可在两板之间加入适量缓
高效毛细管电泳仪常见问题解决方案
高效毛细管电泳仪常见问题解决方案：一、无电泳峰： 1、检查结果：没有电流。 可能原因：毛细管堵塞或断裂。 解决方案：用水冲洗毛细管，观察是否有水流出。若无水流出，拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂。若毛细管没断裂，可用水反向高压冲洗。缓冲液需过滤，将样品过滤
高效毛细管电泳仪常见问题解决方案
高效毛细管电泳仪常见问题解决方案：一、无电泳峰： 1、检查结果：没有电流。 可能原因：毛细管堵塞或断裂。 解决方案：用水冲洗毛细管，观察是否有水流出。若无水流出，拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂。若毛细管没断裂，可用水反向高压冲洗。缓冲液需过滤，将样品过
高效毛细管电泳仪常见问题解决方案
高效毛细管电泳仪常见问题解决方案：一、无电泳峰： 1、检查结果：没有电流。 可能原因：毛细管堵塞或断裂。 解决方案：用水冲洗毛细管，观察是否有水流出。若无水流出，拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂。若毛细管没断裂，可用水反向高压冲洗。缓冲液需过滤，将样品过滤或离心去除
毛细管分析常见问题的解决
四、只有溶剂峰 1.注射器有毛病：用新注射器验证。 2.不正确的载气流速（太低）：检查流速，如有必要，调整之 3.样品太稀：注入已知样品以得出良好结果。如果结果很好，就提高灵敏度或加大注入量。 4.柱箱温度过高：检查温度，并根据需要调整 5.柱不能从溶剂峰中解析出组分：将柱更换成较厚涂
毛细管分析常见问题的解决
一、峰丢失 可能的原因及应采用的排除方法 1.注射器有毛病，用新注射器验证。 2.未接入检测器，或检测器不起作用，检查设定值 3.进样温度太低，检查温度，并根据需要调整 4.柱箱温度太低，检查温度，并根据需要调整 5.无载气流，检查压力调节器，并检查泄漏，验证柱进品流速 6.柱断裂
毛细管分析常见问题的解决
一、峰丢失可能的原因及应采用的排除方法1.注射器有毛病，用新注射器验证。2.未接入检测器，或检测器不起作用，检查设定值。3.进样温度太低，检查温度，并根据需要调整。4.柱箱温度太低，检查温度，并根据需要调整。5.无载气流，检查压力调节器，并检查泄漏，验证柱进品流速。6.柱断裂，如果柱断裂是在柱进口端
毛细管分析常见问题的解决
一、峰丢失 可能的原因及应采用的排除方法 1.注射器有毛病，用新注射器验证。 2.未接入检测器，或检测器不起作用，检查设定值 3.进样温度太低，检查温度，并根据需要调整 4.柱箱温度太低，检查温度，并根据需要调整 5.无载气流，检查压力调节器，并
毛细管分析常见问题的解决
一、峰丢失可能的原因及应采用的排除方法：1.注射器有毛病，用新注射器验证。2.未接入检测器，或检测器不起作用，检查设定值。3.进样温度太低，检查温度，并根据需要调整。4.柱箱温度太低，检查温度，并根据需要调整。5.无载气流，检查压力调节器，并检查泄漏，验证柱进品流速。6.柱断裂，如果柱断裂是在柱进口
毛细管分析常见问题的解决
峰丢失(进样后没峰出现) 可能的原因及采用的排除方法注射器有毛病，采用新注射器验证。未接入检测器，或检测器不起作用，检查设定值。进样温度太低，检查温度，并根据需要调整。柱温温度太低，检查温度，并根据需要调整。无载气流量，检查压力调节阀，并检查泄露，验证柱样品流速。柱断裂，如果柱断裂是在柱进样口端
凝胶电泳常见问题分析
要跑琼脂糖凝胶电泳， 5ng 就能很清楚的跑出来是这样吗？能够照相的清楚的条带，至少需要多少量呢？ 参考见解：5ng 已经可以了，但是或许20ng50ng-200ng效果好，在此范围内呈线性。 把210bp的pcr产物进行酶切,得到190+20bp的两个片段,请问能用琼脂糖凝
DNA－Marker电泳常见问题分析
Q：为什么marker条带非常模糊，无法辨别具体条带？ A：出现上述情况，可能有以下几个原因：1. marker条带出现了降解。请确保在使用过程中避免核酸酶污染；2.电泳缓冲液陈旧。电泳缓冲液多次使用后，离子浓度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果，建议经常更换电泳缓冲液；3.电泳条件
凝胶电泳常见问题分析
要跑琼脂糖凝胶电泳， 5ng 就能很清楚的跑出来是这样吗？能够照相的清楚的条带，至少需要多少量呢？参考见解：5ng 已经可以了，但是或许20ng50ng-200ng效果好，在此范围内呈线性。把210bp的pcr产物进行酶切,得到190+20bp的两个片段,请问能用琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果吗?用多大
凝胶电泳常见问题分析
1、要跑琼脂糖凝胶电泳，5ng就能很清楚的跑出来，是这样吗？能够照相的清楚的条带，至少需要多少量呢？ 参考见解 ： 5ng已经可以了，但是或许20ng～200ng效果好，在此范围内呈线性。 2、把210bp的PCR产物进行酶切，
微量制备毛细管电泳实验
实验方法原理 实验材料 多肽：ACTH 4-10试剂、试剂盒 血管紧缩素I和血管紧缩素II 0.05 mmol／L 和 0.25 mmol／L 磷酸钠缓冲液(pH 2.30 存储于 4℃)0.1 mol／L 氢氧化钠仪器、耗材 75 μm 内径的融合硅毛细管柱CE 仪器锥形微量瓶实验步骤 1. 低压
微量制备毛细管电泳实验
多次分离 单次分离 实验方法原理 实验材料 多肽：ACTH 4-10
毛细管电泳实验讲义（一）
实验目的：1 进一步理解毛细管电泳的基本原理；2 熟悉毛细管电泳仪器的构成；3 了解影响毛细管电泳分离的主要操作参数。实验原理：1．电泳淌度毛细管电泳（CE）是以电渗流 (EOF)为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的一种液相微分离技术。离子在自由溶液中的
毛细管电泳实验讲义（二）
表1 6种CE分离模式的分离依据及应用范围全屏显示表格分离模式分离依据应用范围毛细管区带电泳（CZE）溶质在自由溶液中的淌度差异可解离的或离子化合物、手性化合物及蛋白质、多肽等毛细管胶束电动色谱（MECC）溶质在胶束与水相间分配系数的差异中性或强疏水性化合物、核酸、多环芳烃、结构相似的肽段毛细管凝
双向电泳的常见问题解析
重泡胀后的胶可以不用转移到另一个电泳槽，直接跑 2D 的一向吗？一般情况下是可以的。但当上样量特别大时，可能会有一部分蛋白质没有被胶条吸收，这样跑完 1D 和 2D 胶后，会有很多横向条纹。所以在这种情况下，最好在重泡胀后，将胶条转移到另外一个电泳漕中进行电泳。为什么我在等电聚焦前加的矿物油在聚焦后
解决电泳仪的常见故障问题
为什么电泳仪输出达不到设置值？ 如果电泳仪输出达不到电压设置值，应首先观察电流（黄色）指示灯是否已亮，“电流恒定指示灯亮”说明已经恒流控制或已经达到电流zui大极限值。反之，“电压恒定指示灯亮”说明已经恒压控制或已经达到电流zui大极限值。 如果电流未达到极限值，则只要调整电流调整钮改变整个输出电压
解决电泳仪的常见故障问题
为什么电泳仪输出达不到设置值？ 如果电泳仪输出达不到电压设置值，应首先观察电流（黄色）指示灯是否已亮，“电流恒定指示灯亮”说明已经恒流控制或已经达到电流zui大极限值。反之，“电压恒定指示灯亮”说明已经恒压控制或已经达到电流zui大极限值。 如果电流未达到极限值，则只要调整电流调整钮改变整个输出电压
双向电泳仪的常见问题
重泡胀后的胶可以不用转移到另一个电泳槽，直接跑 2D 的一向吗？一般情况下是可以的。但当上样量特别大时，可能会有一部分蛋白质没有被胶条吸收，这样跑完 1D 和 2D 胶后，会有很多横向条纹。所以在这种情况下，最好在重泡胀后，将胶条转移到另外一个电泳漕中进行电泳。为什么我在等电聚焦前加的矿物油在聚焦后
电泳和Western转印的常见问题
表1 Common problems for electrophoresis and western bloting问 题可能原因建议解决方法推荐电压条件下电泳时间过长。电泳缓冲液过稀。配制新鲜缓冲液，使用1X稀释液。推荐电压条件下电流过高，热量过大。电泳缓冲液过稀。配制新鲜缓冲液，使用1X稀释液。
解决电泳仪的常见故障问题
为什么电泳仪输出达不到设置值？ 如果电泳仪输出达不到电压设置值，应首先观察电流（黄色）指示灯是否已亮，“电流恒定指示灯亮”说明已经恒流控制或已经达到电流zui大极限值。反之，“电压恒定指示灯亮”说明已经恒压控制或已经达到电流zui大极限值。 如果电流未达到极限值，则只要调整电流调整钮改变整个