酶活力测定的影响因素
影响酶活性的因素包括底物的浓度、酶浓度、酶反应的最适pH、最适温度、酶的激活剂、抑制作用,另外还包括试剂中表面活性剂的作用等因素。1.反应速度:大多数酶促反应是可逆反应,其速度既受底物浓度的影响,也受产物生成量的影响。酶反应动力学中所指速度是反应的初速度。当底物浓度较高时,在反应的初期,其浓度变化甚微,产物生成量也很少,此时反应速度可看作是恒定的。2.底物浓度:米氏方程是反映酶促反应速度与底物浓度关系[S]:底物浓度。ν:不同[S]时的反应速度。νmax:最大反应速度。Km:米氏常数。Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。Km值是酶的特征常数之一,只与酶的性质有关,而与酶浓度无关。不同的酶,Km值不同。同一个酶有几种底物时,则对每一种底物各有一特定的Km值,其中Km值最小的底物一般称为该酶的最适底物或天然底物。3.测定酶活力时需注意(1)酶促反应过程中,要用初速度表示酶促反应速度。(2)要规定时间、温度、pH等反应......阅读全文
血清酶的生理变异的影响因素
(一)性别大多数酶在男女之间无大差异,但少数酶如CK、GGT在男女之间有明显差异,因此不能以一个参考值作为判断标准。建议以130U/L为男性正常参考上限,100U/L为女性参考值上限。(二)年龄不少酶在儿童时期与成人有所不同,例如新生儿的CK、LD.苹果酸脱氢酶(MD)、ACP和谷氨酸脱氢酶(GLD
胰蛋白酶的制备及活力的测定1
目的要求1.学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法。2.了解酶的活性与比活性的概念。实验原理胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中,在Ca2+的存在下,被肠激酶或有活性的胰蛋白酶自身激活,从肽链N端赖氨酸和异亮氨酸残基之间的肽键断开,失去一段六肽,分子构象发生一定改变后转变为有活性的胰蛋白酶。胰
胰蛋白酶的制备及活力的测定(1)
实验原理胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中,在Ca2+的存在下,被肠激酶或有活性的胰蛋白酶自身激活,从肽链N端赖氨酸和异亮氨酸残基之间的肽键断开,失去一段六肽,分子构象发生一定改变后转变为有活性的胰蛋白酶。胰蛋白酶原的分子量约为24000,其等电点约为pH8.9,胰蛋白酶的分子量与其酶原接
胰蛋白酶的制备及活力的测定2
(9)0.8 mol/L pH9.0硼酸缓冲液:取20ml 0.8 mol/L硼酸溶液,加80ml 0.2 mol/L四硼酸钠溶液,混合后,用pH计检查校正。(10)0.4 mol/L pH9.0硼酸缓冲液(用0.8 mol/L稀释1倍即可);(11)0.2 mol/L pH8.0硼酸缓冲液:取70
胰蛋白酶的制备及活力的测定(2)
三、仪器食品加工机和高速分散器;研钵;大玻璃漏斗;布氏漏斗;抽滤瓶;纱布;恒温水浴;紫外分光光度计;秒表;pH试纸。操作方法一、猪胰蛋白酶制备(一)猪胰蛋白酶原的提取猪胰脏1.0Kg(新鲜的或杀后立即冷藏的),除去脂肪和结缔组织后,绞碎。加入2倍体积预冷的乙酸酸化水(pH2.5)于10~15℃搅拌提
什么是酶活力?
酶催化化学反应的能力叫酶活力(或称酶活性,active unit)。1961年国际酶学会议规定:1个酶活力单位是指在特定条件(25℃,其它为最适条件)下,在1min内能转化1μmol底物的酶量,或是转化底物中1μmol的有关基团的酶量。
酶联免疫(ELISA)法的影响因素
酶联免疫(ELISA)是如今检验科常用的免疫学检测方法之一,其操作简单,无须特殊设备,使其在各级医院都有应用。但是,如果忽视了影响其结果的因素,难免会造成假阴性或假阳性,因此,了解影响实验的因素,减少差错事故的发生是极其必要的。素质因素实验室人员的素质主要包括五个方面:思想素质、文化素质、技术素质、
核酸内切酶的影响及因素
限制性酶切反应速度与底物的性质有很大的关系,底物的单双链结构、分子的构型、DNA链中酶识别位点的数目以及位点附近的序列等都影响着酶的催化反应。共价闭合环(超螺旋构型)DNA比其相应的线性分子的酶解作用要慢,要使超螺旋构型DNA彻底降解,需要的酶量就大。对于DNA-RNA杂合双链的酶切作用,Mol
谷物种子萌发时淀粉酶活力的测定
几乎所有植物中都存在淀粉酶,尤其是萌发的禾谷类种子,淀粉酶活性最强。主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。种子萌发时,淀粉酶活性随萌发时间迅速增加,将淀粉分解成小分子糖类,供幼苗生长。α-淀粉酶随机水解淀粉的α-1,4-糖苷键,作为淀粉分解的起始酶而起主要作用;其水解产物为麦芽糖、麦芽三糖、糊精
多酚氧化酶的提取、纯化和活力测定
实验概要本文介绍了多酚氧化酶提取、纯化和活力测定的原理及方法等。实验原理很多植物受到机械损伤时在空气中会逐渐变成褐色,这是损伤时植物细胞破碎,原来彼此分开的多酚氧化酶和多酚类物质接触反应的结果。反应如下:+H2O多酚氧化酶+1/2O2多酚氧化酶(po1yphenoloxidase,PP0)是一种含铜
多酚氧化酶的提取、纯化和活力测定
实验概要本文介绍了多酚氧化酶提取、纯化和活力测定的原理及方法等。实验原理很多植物受到机械损伤时在空气中会逐渐变成褐色,这是损伤时植物细胞破碎,原来彼此分开的多酚氧化酶和多酚类物质接触反应的结果。反应如下:+H2O多酚氧化酶+1/2O2多酚氧化酶(po1yphenoloxidase,PP0)是一种含铜
植物组织中脂肪氧化酶活力的测定方法
脂肪氧化酶(LOX)是一种含非血红素铁的蛋白质,专一催化具有顺、顺-1,4-戊二烯结构的多元不饱和脂肪酸加氧反应,氧化生成具有共轭双键的过氧化氢物。它广泛存在于高等植物 体内,与植物的生长发育、植物的衰老、脂质过氧化作用和光合作用、伤反应及其他胁迫反应等有关。 【原理】 根据基质浓度一
溶菌酶分离纯化及酶活力、蛋白浓度测定1
一、实验目的和内容目的:1. 通过本次实验的学习和操作,要求学生掌握离子层析的原理以及离子交换层析的操作方法;2. 掌握离子交换树脂的再生和保存;3.掌握比色法测定溶菌酶的酶活。内容:采用离子交换层析对实验二获得的初提液,进行进一步的分离纯化以得到较高纯度的溶菌酶。具体来说包括:1.离子交换层析分离
测定酶活力时分别有什么注意事项
(1)酶促反应过程中,要用初速度表示酶促反应速度。 (2)要规定时间、温度、pH等反应条件,并在酶测定过程中保持这些反应条件的恒定。 (3)配制的底物浓度应准确且足够大,底物液中应加入不抑制该酶活力的防腐剂并保存于冰箱中,以防止底物被分解。 (4)标本要新鲜,应保存于冰箱中。用血浆时,应考
测定酶活力时分别有什么注意事项?
(1)酶促反应过程中,要用初速度表示酶促反应速度。 (2)要规定时间、温度、pH等反应条件,并在酶测定过程中保持这些反应条件的恒定。 (3)配制的底物浓度应准确且足够大,底物液中应加入不抑制该酶活力的防腐剂并保存于冰箱中,以防止底物被分解。 (4)标本要新鲜,应保存于冰箱中。用血浆时,应考
溶菌酶分离纯化及酶活力、蛋白浓度测定2
2.加样蛋白浓度低于20 mg/mL,上样体积小于柱体积的1/3。3. 在整个实验过程中,流速必须得到一定的控制。过大,会使填料压缩紧密,导致流速过低,层析柱有可能堵塞而实验失败,流速过小,实验时间过长,引起酶的活性变化。对于CM Sepharose FF填料,最适流速在100cm/h以下。
琥珀酸脱氢酶活力测定方法简介
1、硫酸甲酯吩嗪(PMS)反应法 琥珀酸脱氢酶能通过一系列人工电子受体,如与PMS(吩嗪二甲酯硫酸盐),DCPIP(2,6-二氯酚靛酚)等发生反应催化琥珀酸的氧化,而借助这些中间产物的颜色变化,通过分光光度计检测即可加以定量反映,其反应式为:①Succinate+PMS→Fumarate+PM
谷物种子萌发时淀粉酶活力测定
几乎所有植物中都存在淀粉酶,尤其是萌发的禾谷类种子,淀粉酶活性最强。主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。种子萌发时,淀粉酶活性随萌发时间迅速增加,将淀粉分解成小分子糖类,供幼苗生长。α-淀粉酶随机水解淀粉的α-1,4-糖苷键,作为淀粉分解的起始酶而起主要作用;其水解产物为麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖;β
溶菌酶分离纯化及酶活力、蛋白浓度测定3
同时,为了监测分离纯化的效果,我们必须对相应的结果进行检测。对于酶而言,主要通过其催化特异的反应进行监测。溶菌酶对革兰氏阳性菌的细胞壁有明显的破坏作用,可利用这一特性进行溶菌酶活性的监测,以便我们区分在纯化过程中,含有溶菌酶的组分。类似的采用 DEAE- 纤维素对抗体进行精制,特别是经过初步纯化后的
ELISA法手工测定的影响因素
ELISA法具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点,并具有操作简便、无放射性危害的优点,因而多年来广泛应用于血站和医院的实验室中,但在测定中常会出现一些误差和问题。我们通过几年的实验观察,认为影响结果的因素有如下方面。 1 试剂盒 (1)抗原、抗体活性对效价的影响:主要是试剂中
ELISA法手工测定的影响因素
ELISA法具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点,并具有操作简便、无放射性危害的优点,因而多年来广泛应用于血站和医院的实验室中,但在测定中常会出现一些误差和问题。我们通过几年的实验观察,认为影响结果的因素有如下方面。 1 试剂盒 (1)抗原、抗体活性对效价的影响:主要是试
ELISA法手工测定的影响因素
ELISA法具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点,并具有操作简便、无放射性危害的优点,因而多年来广泛应用于血站和医院的实验室中,但在测定中常会出现一些误差和问题。我们通过几年的实验观察,认为影响结果的因素有如下方面。 1 试剂盒 (1)抗原、抗体活性对效价的影响:主要是试剂中抗体
血糖测定样本的常见影响因素
(1)血糖测定结果与标本性质有关: 血糖测定可以测定血浆、血清和全血葡萄糖。用血浆或血清测定血糖结果更为可靠。因为葡萄糖可溶于自由水,而红细胞中所含的自由水较少,所以全血葡萄糖浓度比血浆或血清低10%-15%,且受红细胞比容影响。(2)血糖测定结果受饮食、取血部位和测定方法影响: 餐后血糖升高,静脉
COD测定的影响因素有哪些
1.火焰原吸收光光度1.1测定范围本直接火焰原吸收络合萃取火焰原吸收测铜低检测浓度别0.200.0075mg/l若水盐浓度高产干扰用标准加入加校采用吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(apdc)螯合
铜蓝蛋白测定的影响因素
雌激素与含此类激素的避孕药物,酰胺咪嗪、美沙酮、苯巴比妥、苯妥英、三苯氧胺等约物可使血清铜蓝蛋白水平升高;而天冬酰胺酶可使其降低。
测定纯水pH值的影响因素
纯水pH值的测量要想获得一个比较满意的结果,是一件比较困难的事情,特别是用常规的复合电极在实验室敞放式的测量更是如此。表现情况往往是:响应缓慢,示值漂移,重复性差,准确度低等。 一、产生的原因: 1、由于纯水中离子浓度非常低,而参比电极盐桥溶液选中高浓度3mol/L的Kcl,相互之间的浓度
免疫比浊测定的影响因素
抗原抗体的比例 是浊度形成的关键因素。当抗原过量时,形成的IC分子小,而且会发生再解离,使浊度反而下降,光散射亦减少,这就是高剂量钩状效应。当抗体过量时,IC的形成随着抗原递增而增加,至抗原、抗体最适比例处达最高峰,这就是经典的海德堡曲线理论。在反应体系中需保持抗体适当过量,如形成抗原过量则造成测定
影响接触角测定的因素
接触角在实际测量时应该注意两个问题,平衡时间和体系温度的恒定,当体系未达平衡时,接触角会变化,这时的接触角称为动态接触角,动态接触角研究对于一些粘度较大的液体在固体平面上的流动或辅展有重要的意义,因粘度大,平衡时间长。同时对于温度变化较大的体系,由于表面张力的变化,接触角也会变化,因此,若一已基
影响接触角测定的因素
接触角在实际测量时应该注意两个问题,平衡时间和体系温度的恒定,当体系未达平衡时,接触角会变化,这时的接触角称为动态接触角,动态接触角研究对于一些粘度较大的液体在固体平面上的流动或辅展有重要的意义,因粘度大,平衡时间长。同时对于温度变化较大的体系,由于表面张力的变化,接触角也会变化,因此,若一已基平达
浅析种子水分测定的影响因素
浅析种子水分测定的影响因素农业部小麦玉米种子质量监督检验测试中心 高级农艺师 詹根印按照《农作物种子检验规程》的规定,种子的纯度、净度、发芽率、水分四项质量指标是种子检验的必检项目,其质量指标执行的是国家强制性标准,一批种子任何 一项指标达不到国家规定的标准,就要被判为不合格种子。作为反映种子质量指