PCR实验中的污染预防及处理（二）
（二）环境污染：在排除试剂污染的可能性外，更换试剂后，若不久又发现试剂被污染了，如果预防措施比较严密，则考虑可能为环境污染。 环境污染中常见的污染源主要有： 1. 模板提取时真空抽干装置； 2. 凝胶电泳加样器； 3. 电泳装置； 4. 紫外分析仪； 5. 切胶用刀或手术刀片； &nbs......阅读全文
PCR－产物纯化实验
试剂、试剂盒 TE 或去离子水 PCR 产物 仪器、耗材 离心机和转子 PCR 滤 件
多重－PCR－扩增实验
试剂、试剂盒 Taq 聚合酶溶于水的 DNA引物仪器、耗材 热循环仪实验步骤 一、材料1. 酶和酶缓冲液Taq 聚合酶许多 Taq 聚合酶都可以用；作者发现 Roche 公司的 Taq 聚合酶可以满足大多数需要. 如果需要提高PCR 产物的特异性，应该使用热启动聚合酶。使用 Tag 聚合酶本身附带的
PCR实验技术（二）
【方法】方法一、基本的PCR方法下面介绍的基本PCR方法可作为任何PCR扩增的一般指导和出发点。由于各种PCR反应条件（如PCR扩增次数、温度、Taq DNA聚合酶的浓度、引物、氯化镁以及模板DNA）变异极大，应根据具体情况，对各种PCR反应条件进行相应调整。1．按以下次序，将各成分加入0.2 ml
PCR－扩増实验
这一方案设计包含 10 个反应还多 10%, 每次奇数循环之后相应地从 PCR 仪中取出样品，由第 15 个循环起始，到第 35 个循环终止。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒dNTP混合物基因特异的正向引物基因特异的反向引物单链cDNATaqDNA聚合酶RT
PCR实验技巧1
增加PCR的特异性： 1. prime理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些条件a. 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量b. GC% 40%~~~~60% c. 5'端和中间序列要多GC,以增
原位PCR实验步骤
原位PCR实验步骤，原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术，使得靶基因检测有了极大的改进。此技术是在细胞（爬片、甩片或涂片）或组织（石蜡、冰冻切片）上直接对靶基因片段进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。一、组织切片和细胞样品的制备试剂与配置10%福尔马
多元实时－PCR－实验
多元实时 PCR 时，在一个反应管中加入不同标记的成对引物，从而可以同时分析多个不同的基因。在许多反应中，用 JOE 标记看家基因对模板定量，用 FAM 标记目的基因,证明 LUX 引物非常有效。在标准的多元体系中，使用的引物浓度和加入的体积与进行一元反应时相同，如下。本实验来源于 PCR 实验指南
PCR－产物定量实验
试剂、试剂盒 DNA 标准TEPCR 产物仪器、耗材 荧光计金属箔纸微量离心管实验步骤 方法 A: 荧光测定法荧光测定法可以在纳克级范围精确定量。荧光计和 DNA 定量试剂盒许多公司都有出售。确定荧光计是否安装了适合于特定染料的激发和发射的部件至关重要。该方法在设计上适用于配有带蓝色 LED
FDDPCR－实验
本方案设计为 24 个 PCR 反应，使用 3 种 cDNA 亚群（利用方案 3 中的 H-T11M 引物进行 RT 反应），引物为荧光染料标记的锚定引物（FH-T11M) 与 24 种上游任意引物 (HAP) 的组合。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒cDN
PCR实验技巧2
5. touchdown PCR 原理很简单,但的确是一个很有用的方法。举个例子，ANNEALING TEMP. 55度 94 5min 94 30s 60 30s 72 1min 2cycles 94 30s 59 30s 72 1min 2cycles 94 30s 58 30s 72 1min
PCR－产物纯化实验
介绍一个采用 AmiconMicrocon-PCR 滤件（Millipore) 的方法，有效地去除冗余dNTP 和引物的方法纯化 PCR 产物。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒TE 或去离子水PCR 产物仪器、耗材离心机和转子PCR 滤 件微量离心管实验步骤
多元实时－PCR－实验
试剂、试剂盒 PCR Super Mix-UDGROX 染料蒸馏水反向引物正向引物仪器、耗材 ABIPrism7700型号系列检测系统实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂以50ul反应体系为例。Platinum Quantitative PCR Super Mix-UDG(Invitrogen
PCR－产物定量实验
试剂、试剂盒 DNA 标准 TE PCR 产物 仪器、耗材 荧光计 金属箔纸
PCR实验技术（一）
PCR（聚合酶链式反应）【原理】PCR（polymerase chain reaction）用于在体外将微量的目标DNA大量扩增，以便进行分析。反应体系：①样品DNA；②引物（primer），是人工合成的一对寡核苷酸链（约15-20个核苷酸），用于扩增夹在双引物与模板DNA互补区之间的区域；③4种d
PCR实验技巧4
④引物的额外序列与退火温度 若有额外的序列信息要加到引物中，例如T7RNA聚合酶结合位点、限制酶切位点或者GC发夹结构可以使用加长的引物。一般说来，引物5'端添加无关序列不会影响引物特异序列的退火。有时候，引物中添加了大量与模板不配对的碱基，可以在较低退火温度的条件下进行4到5个扩增循环；然
FDDPCR－实验
试剂、试剂盒 cDNA矿物油仪器、耗材 热循环仪薄壁 PCR 管实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂矿物油（可选）2. 核酸和寡核苷酸来自方案 3 的 cDNA3. 专用设备热循环仪 [推荐使用 GeneAmpPCRSystem9600(Perkin-Elmer)，或者 Mastercyder
PCR基因扩增实验
[实验目的]通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术。[实验原理]多聚酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）的原理类似于DNA的天然复制过程。在待扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增2n倍。1．变性：加
PCR实验技巧5
Trouble shooting guide 1．假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染
PCR－扩増实验
试剂、试剂盒 dNTP混合物基因特异的正向引物基因特异的反向引物单链cDNATaqDNA聚合酶RT-PCR缓冲液仪器、耗材 PCR仪PCR管实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂去除 RNA 酶的双蒸水10XRT-PCR 缓冲液（100 mmol/LTris-HCl、pH8.3,500 mmol
多重－PCR－扩增实验
多重PCR扩增实验可以用于：（1）在同一PCR反应管内同时检出多种病原微生物，或对有多个型别的目的基因进行分型，特别是用一滴血就可检测多种病原体；（2）多重PCR很适宜于成组病原体的检测，如肝炎病毒，肠道致病性细菌，性病，无芽胞厌氧菌，战伤感染细菌及细菌战剂的同时侦检；（3）多种病原体在同一反应管内
PCR实验技巧5
Trouble shooting guide 1．假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染
PCRELISA实验
实验概要本实验介绍了PCR-ELISA的操作流程。PCR-ELISA是用免疫学方法检测PCR产物，这比常规用电泳方法及Southern blot要简便、省时，可同时处理大量标本，便于自动化。实验原理PCR-ELISA的原理是在做PCR扩增时应用生物素(biotin)标记的引物，这样PCR的产物就可结
PCR－产物定量实验
测序之前对模板精确定量至关重要。根据 DNA 用量的多少，有几种不同的方法可供选择。下面介绍另外两种方法：荧光测定法和比较溴化物染色法。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒DNA 标准TEPCR 产物仪器、耗材荧光计金属箔纸微量离心管实验步骤方法 A: 荧光测定
PCRELISA实验
实验概要本实验介绍了PCR-ELISA的操作流程。PCR-ELISA是用免疫学方法检测PCR产物，这比常规用电泳方法及Southern blot要简便、省时，可同时处理大量标本，便于自动化。实验原理PCR-ELISA的原理是在做PCR扩增时应用生物素(biotin)标记的引物，这样PCR的产物就可结
免疫PCR实验步骤
免疫PCR实验步骤，主要程序（1） 抗原+生物素化抗体→抗原-生物素化抗体复合物；（2） 加亲合素→抗原-生物素化抗体-亲合素复合物；（3） 加生物素化DNA→抗原-生物素化抗体-亲合素-生物素化DNA；（4） PCR扩增生物素化DNA部分。免疫PCR实验步骤，实验步骤（1）制备生物素化DNA将噬粒
巢式PCR实验
巢式PCR标签： 巢式 PCR巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应（PCR），使用两对（而非一对）PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似。第二对引物称为巢式引物（因为他们在第一次PCR扩增片段的内部）结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增。实验方
PCR实验技术（三）
【注意事项】1. PCR引物设计：引物设计可能是PCR扩增成功最关键的因素。如引物设计欠佳，可能导致扩增产物不足，甚至扩增失败，其原因是设计欠佳的引物可导致非特异扩增和/或形成引物二聚体，此又成为PCR反应的竞争性产物，从而进一步抑制PCR产物形成。在引物设计时必须考虑以下几个因素，其中最重要的是引
pcr实验详细步骤
1、模板的取材主要依据PCR的圹增对象，可以是病原体标本如病毒、也可以是病理生理标本如细胞等。2、标本处理的基本要求是除去杂质，并部分纯化标本中的核酸。多数样品霓要经过SDS和蛋白 酶K处理。难以破碎的细菌，可用溶菌酶加EDTA处理。3、引物最好在模板cDNA的保守区内设计，引物长度一般在15~30
PCR实验常见问答
常见问答Q-1: LA PCR的反应条件? A-1: 因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。◇ 循环次数根据模板DNA的量以及扩增片段的大小，设定25 ~ 30个循环。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，则会出现Smear。 ◇ Anneal以及Extension合适的A
Single－Cell－PCR－单细胞PCR实验技术
Single Cell PCR(Protocol provided by Carolyn Troeger)Cell picking c Axiovert 100/Zeiss, extended glass capillary/Drummond, Broomall and a micromanipul