引物退火温度
一般低4、5度就好了。如果你用软件设计的引物，比如oligo6什么的，它会在tm之外给你一个operate t，就是操作温度，用这个就好了。......阅读全文
引物退火温度
一般低4、5度就好了。如果你用软件设计的引物，比如oligo6什么的，它会在tm之外给你一个operate t，就是操作温度，用这个就好了。
引物的熔解温度与退火温度
primer的一个重要参数是熔解温度(Tm)。这是当50%的primer和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.Tm对于设定PCR退火温度 是必需的。在理想状态下，退火温度足够低，以保证primer同目的序列有效退火， 同时还要足够高，以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般
根据引物合成单如何设定PCR退火温度？
问题：引物单上数据如下上游TTACAAGATGGAGCCTCACC(GC含量50%)Tm(1M Na+)：68.2Tm(50mM Na+)：46.6下游CAAAGAATAACCCAGGACGA(GC含量45%)Tm(1M Na+)：66.2Tm(50mM Na+)：44.6顺便问下大家，Tm(1M
根据引物合成单如何设定PCR退火温度？
PCR退火温度应如何设置？ 问题：引物单上数据如下 上游TTACAAGATGGAGCCTCACC(GC含量50%) Tm(1M Na+)：68.2 Tm(50mM Na+)：46.6 下游CAAAGAATAACCCAGGACGA(GC含量45%) Tm(1M Na+)：
退火温度与引物的TM值有什么联系
退火温度与引物的TM值的关系主要和DNA聚合酶与其buffer有关。有些退火温度要比TM低5度、3度，有些还会高3度，有些是一模一样的。主要参考不同公司所生产的DNA聚合酶的说明书。
shrna引物退火原理
1. 载体取2-5ug，在25ul体系中，用2.5ul的酶切30min-1h，回收载体：载体:---2ul（2-5ug）酶---------2.5ulBuf--------2.5ul水---------18ul回收的时候希望浓度高点。2. Oligo退火形成双链若为2OD=5.4nmol的话，则每个
为什么引物中GC含量越高，需要设定更高的退火温度？
GC碱基互补配对时形成三个氢键，非特异性配对后需要较高的温度才能打开氢键，从而促进特异性配对。
tm值与退火温度
我用primer 5设计出来的Tm值从来都是直接当退火温度用。用引物primer-blast的话我都是直接贴序列上去。有其他菌的匹配很正常，有些进化亲缘性很近的，只要在同一物种中没有匹配上的问题应该不大！
梯度PCR退火温度的设计
温度梯度PCR是指在退火温度不太明确时，为了找到最优退火温度，在一台PCR仪上同时做多管PCR，每一管放在仪器 内不同列(有的是不同行)上，分别进行PCR(如50℃~60℃可以分6管，分别为50，52，54，56，58，60度)，最后看看哪个温度的效果最好。总之是用来进行退火温度优化的。
PCR的退火温度怎么设定
PCR中退火的那步是引物与模板结合，一般来说，退火温度比Tm值要低上5度左右。另外，也可以根据你设计引物的软件比如primer5.0或Olige 6 推荐的温度。但这些都不是绝对的。你要是在他的推荐温度下没有目的条带，你可以试试做一个温度梯度，摸索一下退火温度。
pcr退火温度太高有什么缺点
说影响得看情况，退火温度太高肯定会影响引物的结合效率的。但是，实际上，好的引物一般是上下游引物的退火温度比较接近。有时候，我们可能会通过牺牲特异性的手段（当GC含量过高时，减少引物长度）来平衡两条引物的退火温度。高的退火温度是不利于复性的，所以不会因为使模板复性而降低扩增效率，倒是可能因为影响引物结
PCR的退火温度对反应的影响
引物退火温度是影响PCR的主要因素之一，一般来说每个引物都对应着各自的退火温度。影响：以文献作参考，在一定的温度范围内，退火温度越高，扩增的特异性也就越高。退火温度越低，扩增产物的特异性也就降低。如果退火温度过高，引物与模板结合差，电泳条带差，甚至没有扩增。如果温度过低，扩增特异性差，杂带较多，背景
pcr退火温度是根据什么原则设计？
在模板变性后温度快速冷却至40℃～60℃(某个退火温度 )的时候，可使引物和模板发生结合。由于模板DNA 比引物复杂得多，引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞，这就使PCR后期的过程成为可能。退火温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长度。对于20个核苷酸
PCR的退火温度对反应的影响
引物退火温度是影响PCR的主要因素之一，一般来说每个引物都对应着各自的退火温度。影响：以文献作参考，在一定的温度范围内，退火温度越高，扩增的特异性也就越高。退火温度越低，扩增产物的特异性也就降低。如果退火温度过高，引物与模板结合差，电泳条带差，甚至没有扩增。如果温度过低，扩增特异性差，杂带较多，背景
pcr退火温度一般为多少
唉，这种题就是中国特色，完全理论脱离实际。PCR退火温度是一个范围，一般是50度到65度，或者到70度做两步法PCR。其中，模板的GC含量、模板的组成（单一模板还是cDNA还是全基因组DNA还是别的什么）等等条件都会影响tm值。没有一个确定的说是多少比较好，都是具体情况具体分析。有的时候引物设计回来
退火温度低会对PCR产生什么影响
通常来说，退火温度是由引物的GC%含量决定的，但是反应体系的条件改变也会影响引物的退火温度（如Mg,Na等离子浓度）。建议你去http://www.idtdna.com/analyzer/Applications/OligoAnalyzer/分析一下你的PCR体系中的引物退火温度，而不是仅仅由公式计
荧光定量pcrct值太高，怎么调退火温度
标准曲线按照标准曲线计算般都相量则用delta delta CT计算举例： 照组基ACT值20 内参（比βactin)CT值15实验组基A CT值18内参CT值14 首先算加量：delta CT=15-14=1212说
变性、退火温度对PCR热循环的影响
PCR退火温度应如何设置？ 在PCR自动热循环中，最关键的因素是变性与退火的温度。如操作范例所示，其变性、退火、延伸的条件是：94℃60s, 37℃60s, 72℃120s，共25～30个循环，扩增片段500bp。在这里，每一步的时间应从反应混合液达到所要求的温度后开始计算。在自动热循环仪
变性、退火温度对PCR热循环的影响
PCR退火温度应如何设置？在PCR自动热循环中，最关键的因素是变性与退火的温度。如操作范例所示，其变性、退火、延伸的条件是：94℃60s, 37℃60s, 72℃120s，共25～30个循环，扩增片段500bp。在这里，每一步的时间应从反应混合液达到所要求的温度后开始计算。在自动热循环仪内由混合液原
引物片段退火后不能连接到载体上是什么问题？
连接反应需要引物的5’磷酸基团。如果需要将合成的引物退火直接连接相应的载体上，引物需要磷酸化。磷酸化的产物如果还不能连接载体上，需要检查载体的酶切效果，需要改善引物退火的条件。SiRNA分子具有特殊的对称结构，退火的难度较大，退火时需要提高退火温度。
退火炉温度控制系统的发展现状
真空退火是随着精密机械制造、航天、国防等尖端工业而发展起来的新型热处理方法，特别是近些年来，对零件性能、精度要求的提高使真空退火炉越来越受到人们的重视。国际上从上世纪70年代开始就开始了退火炉计算机控制的研究，近年来由于计算机技术以及新的控制技术的迅速发展，退火炉的计算机控制得到了迅速的发展，退火炉
PCR反应退火温度的高低与什么因素有关
退火温度是影响PCR反应特异性的重要因素。引物与模板复性所需要的退火温度取决于引物的长度、碱基组成及其浓度。引物长度越短，引物中G+C的含量越低，所需的退火温度越低。虽然降低退火温度可能增加扩增产量，但引物与模板间的错配现象也会增多，导致非特异性扩增上升。相反，提高退火温度虽然可以提高反应的特异性，
退火和真空快速退火炉
退火是一种金属热处理工艺，指的是将金属缓慢加热到一定温度，保持足够时间，然后以适宜速度冷却，有时是自然冷却，有时是控制速度冷却的热处理方法。 退火的目的： 1. 降低硬度，软化工件，改善切削加工性。2. 改善或消除钢铁在铸造、锻压、轧制和焊接过程中造成的各种组织缺陷以及残余应力，减少工件变形、开裂或
引物与模板链正确连接的保证因素
1. 退火温度很重要。 （1）引物与模板结合的温度参数。要保证退火温度足够低，保证引物与目的序列的有效结合；退火温度又要足够高，以减少非特异性结合。 （2）退火温度与碱基比例关系很大。 ①GC（40%-60%），比例太高会使退火温度过高，从而无法实现引物与模板结合。 ②两种
退火的目的
(1) 降低硬度，改善切削加工性.(2)降低残余应力，稳定尺寸，减少变形与裂纹倾向；(3)细化晶粒，调整组织，消除组织缺陷。(4)均匀材料组织和成分，改善材料性能或为以后热处理做组织准备。在生产中，退火工艺应用很广泛。根据工件要求退火的目的不同，退火的工艺规范有多种，常用的有完全退火、球化退火、和去
定量PCR仪引物长度设定
① 引物长度 一般引物长度为18~30碱基。总的说来，决定引物退火温度（Tm值）最重要的因素就是引物的长度。有以下公式可以用于粗略计算引物的退火温度。 在引物长度小于20bp时：[4(G+C)+2(A+T)]-5℃ 在引物长度大于20bp时：62.3℃+0.41℃(%G-C)-
定量PCR仪引物长度设定
① 引物长度 一般引物长度为18~30碱基。总的说来，决定引物退火温度（Tm值）最重要的因素就是引物的长度。有以下公式可以用于粗略计算引物的退火温度。 在引物长度小于20bp时：[4(G+C)+2(A+T)]-5℃ 在引物长度大于20bp时：62.3℃+0.41℃(%G-C)-
如何做好荧光定量PCR实验？（二）
2.4 实时多重PCR探针的选择：多重实时PCR的多种含意有两种：一为选择保守的探针和引物，利用不同的染料标记探针，在检测时可根据荧光的颜色来判定不同的产物。另一种为选择保守的引物，扩增不同长度的目的片段，反应中加入SYBRN染料，最后根据不同目的片段的Tm值来判定不同的物品。多重实时PCR的荧光探
如何提高扩增效率和PCR的特异性
引物引物设计：引物长度适当，18-24mers，并保证序列独特性，以降低序列在非目的片段中存在的可能性，但长度大于24核苷的引物并不意味着有更高的特异性，较长的序列可能会与错误配对序列杂交，反而降低特异性，而且长序列比短序列杂交慢，影响产量； 引物浓度：引物的浓度会影响特异性。最佳的引物浓度一般在0
PCR反应技术的反应基本步骤
PCR 全过程包括三个基本步骤,即双链 DNA 模板加热变性成单链(变性);在低温下引物与单链DNA互补配对(退火);在适宜温度下 Taq DNA 聚合酶以单链 DNA 为模板,利用4种脱氧核苷三磷酸(dNTP)催化引物引导的 DNA 合成(延伸)。这三个基本步骤构成的循环重复进行,可使特异性 DN