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PCR的退火温度对反应的影响

引物退火温度是影响PCR的主要因素之一,一般来说每个引物都对应着各自的退火温度。影响:以文献作参考,在一定的温度范围内,退火温度越高,扩增的特异性也就越高。退火温度越低,扩增产物的特异性也就降低。如果退火温度过高,引物与模板结合差,电泳条带差,甚至没有扩增。如果温度过低,扩增特异性差,杂带较多,背景深。......阅读全文

PCR的退火温度对反应的影响

引物退火温度是影响PCR的主要因素之一,一般来说每个引物都对应着各自的退火温度。影响:以文献作参考,在一定的温度范围内,退火温度越高,扩增的特异性也就越高。退火温度越低,扩增产物的特异性也就降低。如果退火温度过高,引物与模板结合差,电泳条带差,甚至没有扩增。如果温度过低,扩增特异性差,杂带较多,背景

PCR的退火温度对反应的影响

引物退火温度是影响PCR的主要因素之一,一般来说每个引物都对应着各自的退火温度。影响:以文献作参考,在一定的温度范围内,退火温度越高,扩增的特异性也就越高。退火温度越低,扩增产物的特异性也就降低。如果退火温度过高,引物与模板结合差,电泳条带差,甚至没有扩增。如果温度过低,扩增特异性差,杂带较多,背景

变性、退火温度对PCR热循环的影响

PCR退火温度应如何设置? 在PCR自动热循环中,最关键的因素是变性与退火的温度。如操作范例所示,其变性、退火、延伸的条件是:94℃60s, 37℃60s, 72℃120s,共25~30个循环,扩增片段500bp。在这里,每一步的时间应从反应混合液达到所要求的温度后开始计算。在自动热循环仪

变性、退火温度对PCR热循环的影响

PCR退火温度应如何设置?在PCR自动热循环中,最关键的因素是变性与退火的温度。如操作范例所示,其变性、退火、延伸的条件是:94℃60s, 37℃60s, 72℃120s,共25~30个循环,扩增片段500bp。在这里,每一步的时间应从反应混合液达到所要求的温度后开始计算。在自动热循环仪内由混合液原

退火温度低会对PCR产生什么影响

通常来说,退火温度是由引物的GC%含量决定的,但是反应体系的条件改变也会影响引物的退火温度(如Mg,Na等离子浓度)。建议你去http://www.idtdna.com/analyzer/Applications/OligoAnalyzer/分析一下你的PCR体系中的引物退火温度,而不是仅仅由公式计

梯度PCR退火温度的设计

温度梯度PCR是指在退火温度不太明确时,为了找到最优退火温度,在一台PCR仪上同时做多管PCR,每一管放在仪器 内不同列(有的是不同行)上,分别进行PCR(如50℃~60℃可以分6管,分别为50,52,54,56,58,60度),最后看看哪个温度的效果最好。总之是用来进行退火温度优化的。

PCR的退火温度怎么设定

PCR中退火的那步是引物与模板结合,一般来说,退火温度比Tm值要低上5度左右。另外,也可以根据你设计引物的软件比如primer5.0或Olige 6 推荐的温度。但这些都不是绝对的。你要是在他的推荐温度下没有目的条带,你可以试试做一个温度梯度,摸索一下退火温度。

PCR反应退火温度的高低与什么因素有关

退火温度是影响PCR反应特异性的重要因素。引物与模板复性所需要的退火温度取决于引物的长度、碱基组成及其浓度。引物长度越短,引物中G+C的含量越低,所需的退火温度越低。虽然降低退火温度可能增加扩增产量,但引物与模板间的错配现象也会增多,导致非特异性扩增上升。相反,提高退火温度虽然可以提高反应的特异性,

pcr退火温度太高有什么缺点

说影响得看情况,退火温度太高肯定会影响引物的结合效率的。但是,实际上,好的引物一般是上下游引物的退火温度比较接近。有时候,我们可能会通过牺牲特异性的手段(当GC含量过高时,减少引物长度)来平衡两条引物的退火温度。高的退火温度是不利于复性的,所以不会因为使模板复性而降低扩增效率,倒是可能因为影响引物结

pcr退火温度一般为多少

唉,这种题就是中国特色,完全理论脱离实际。PCR退火温度是一个范围,一般是50度到65度,或者到70度做两步法PCR。其中,模板的GC含量、模板的组成(单一模板还是cDNA还是全基因组DNA还是别的什么)等等条件都会影响tm值。没有一个确定的说是多少比较好,都是具体情况具体分析。有的时候引物设计回来