器官选择性mRNA递送系统的机制,扩展mRNA和CRISPR技术应用

近年来,mRNA作为新型制药技术,短时间内在传染性疾病及肿瘤治疗领域取得了突破性进展。然而,如何将mRNA药物安全、高效地递送到特定靶细胞并保护其免于降解是目前mRNA疗法的主要障碍之一。 理想的递送载体必须是安全的、稳定的和器官特异性的。脂质纳米颗粒(LNP)是目前临床上最先进的mRNA递送载体。目前,所有正在研制或批准临床使用的新冠mRNA疫苗均采用LNP载体进行递送。LNP为mRNA递送提供了许多好处,包括制剂简单、模块化、生物相容性和较大的mRNA有效载荷。 然而,临床研究表明,LNP会在肝脏积聚,因此当前的LNP递送系统大多是肝脏靶向的,肝脏以外器官(如肺和肾)的有效递送问题亟待解决。 美国德克萨斯大学西南医学中心 Daniel Siegwart 教授、程强博士(现为北京大学未来技术学院研究员)作为共同通讯作者,在《美国科学院院刊》(PNAS)上发表了题为:On the mechanism of tissue......阅读全文

器官选择性mRNA递送系统的机制,扩展mRNA和CRISPR技术应用

  近年来,mRNA作为新型制药技术,短时间内在传染性疾病及肿瘤治疗领域取得了突破性进展。然而,如何将mRNA药物安全、高效地递送到特定靶细胞并保护其免于降解是目前mRNA疗法的主要障碍之一。  理想的递送载体必须是安全的、稳定的和器官特异性的。脂质纳米颗粒(LNP)是目前临床上最先进的mRNA递送

mRNA疫苗递送研究取得进展

mRNA疫苗进入人体后极易被降解,因此必须借助脂质纳米颗粒(LNP)作为“运输工具”。但传统LNP 存在一些问题:一方面,它们在体内的真实去向并不清楚;另一方面,大量载体会被肝脏“误捕获”,既降低了靶组织递送效率,也增加了潜在安全风险。近日,中国科学院精密测量科学与技术创新研究院团队,设计出一种“自

mRNA疫苗递送研究取得进展

mRNA疫苗进入人体后极易被降解,因此必须借助脂质纳米颗粒(LNP)作为“运输工具”。但传统LNP 存在一些问题:一方面,它们在体内的真实去向并不清楚;另一方面,大量载体会被肝脏“误捕获”,既降低了靶组织递送效率,也增加了潜在安全风险。近日,中国科学院精密测量科学与技术创新研究院团队,设计出一种“自

科研人员开发出高效植物mRNA递送系统

基因组编辑技术在农业领域的应用推动了作物改良,但以DNA形式递送基因编辑工具的方式存在外源DNA整合风险和脱靶效应。近年来,无外源DNA残留的基因组编辑递送技术备受关注。尽管基于核糖核蛋白的递送策略在小麦等作物中实现了T0代基因敲除,但其复杂的制备与操作限制了应用。相比之下,mRNA递送策略具有制备

科研人员开发出高效植物mRNA递送系统

基因组编辑技术在农业领域的应用推动了作物改良,但以DNA形式递送基因编辑工具的方式存在外源DNA整合风险和脱靶效应。近年来,无外源DNA残留的基因组编辑递送技术备受关注。尽管基于核糖核蛋白的递送策略在小麦等作物中实现了T0代基因敲除,但其复杂的制备与操作限制了应用。相比之下,mRNA递送策略具有制备

疫苗用mRNA递送系统性能的决定因素

mRNA递送系统性能的决定因素是多因素且相互作用的,包括:(1)它们递送到适当细胞并有效释放mRNA到细胞质翻译机制的效力或能力;(2)它们的佐剂性,可增强免疫应答;(3)将注射部位过度炎症或全身分布和脱靶表达可能引起的不良事件或毒性的任何作用降至最低。  1、剂量  目前SARS-CoV-2临床试

喂食mRNA-mimics和inhibitors研究昆虫mRNA调控发育的机制

  棉铃虫(Helicoverpa armigera),夜蛾科昆虫的一种,是棉花蕾铃期的重要钻蛀性害虫,主要蛀食蕾、花、铃,也取食嫩叶。MicroRNA是一类非编码小分子 RNAs(18-25 nt),其在各种生物进程中发挥着重要的作用,包括发育和基因调控。澳大利亚昆士兰大学研究人员通过人工

mRNA差异显示技术(mRNA-differetial-display)(2)

6.技术路线 mRNA 差异显示技术 The fluoroDD System •Builds on the HIEROGLYPH™ system –TMR-labeled anchored primers –Increased primer concentrations –I

mRNA差异显示技术(mRNA-differetial-display)(1)

1.概 述mRNA差异显示技术(mRNA differetial display)是一种快速有效的克隆差异性表达基因的方法。 方法建立:1992年 Liang P和Pardee首次应用DD技术对比人类乳腺癌细胞与正常细胞所表达的mRNA,以此来克隆癌细胞所特有的基因 目前已应用于个各领域:

mRNA工艺技术平台之mRNA制剂

  mRNA疫苗或药物的生产工艺,主要分为质粒DNA原液制备、mRNA原液制备、mRNA制剂制备三个阶段。本文讨论第三阶段的工艺平台,也是当前挑战最大的环节。  关键的制剂技术突破解决了mRNA的成药性问题,使其从60年的科研之路走向临床商业化应用,并在此次新冠疫苗应用中大放异彩。据公开信息, BN

Science重磅:全新mRNA递送SEND,开辟分子疗法递送新方法

  2020 年初,新冠疫情肆虐全球,各国药企均大力投入疫苗研发,希望及时研发出有效疫苗以阻止疫情扩散,这也让原本还远离大众视线的 RNA 疗法,广为人知。  相比于传统疫苗,RNA 疫苗仿佛是专门为新冠疫情准备的。美国疫苗生产企业 Moderna 在得到新冠病毒基因组序列后,仅用了 4 天,就获得

mRNA差异显示的方法和应用介绍

中文名称mRNA差异显示英文名称mRNA differential display定  义从两种组织或经过不同处理的两种细胞的信使核糖核酸(mRNA)所得到的互补DNA作的差异显示实验,可以分析不同组织细胞基因表达的区别。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

mRNA差别显示技术

mRNA差别显示技术也称为差示反转录PCR(Differential Display of reverse Transcriptional PCR)简称为ddRT-PCR。它是将mRNA反转录技术与PCR技术二者相互结合发展起来的一种RNA指纹图谱技术。目前已广泛应用于分离鉴定组织特异性表达的基因。

mRNA的转运和翻译

mRNA的转运真核生物和原核生物之间的另一个区别是mRNA的转运。由于真核转录和翻译是在不同的细胞器内进行的,真核mRNA必须从细胞核输出到细胞质。 这一过程可能受不同信号通路的调节。成熟的mRNA通过其加工的修饰被识别,在结合帽结合蛋白CBP20和CBP80及转录/输出复合物(TREX)后通过核孔

hnRNA和mRNA的关系

人们经分析认为hnRNA是mRNA的前体,证据是:(1) hnRNA和mRNA有相同的序列。用小鼠核内hnRNA分离出的1.5Kb(15S)的RNA分子和10Sβ-珠蛋白mRNA分别与小鼠的b-珠蛋白基因都可进行分子杂交,形成R环。实验结果表明hnRNA中存在与mRNA相同的序列,但比mRNA更为复

研究发现发展CRISPR/Cas9递送及活体基因编辑新策略

  CRISPR/Cas9是一种源自细菌获得性免疫系统的基因编辑技术,在化学生物学基础研究及发展新型基因治疗技术中具有广泛的应用前景。然而,其生物医学应用面临的关键问题之一在于递送具有基因编辑功能的Cas9核酸酶进入细胞中,并实现活体基因编辑。  最近,在国家自然科学基金委、科技部和中国科学院的支持

李博文等开发新型LNP载体,可高效mRNA递送及基因编辑

  先天性肺部疾病,例如表面活性蛋白缺乏症、囊性纤维化、α-1抗胰蛋白酶缺乏症等等,会导致终身发病甚至是死亡。虽然这些疾病的遗传机制已经被深入研究,但仍然缺乏有效的治疗方案。最近,可吸入式mRNA递送平台备受制药业和学术界的关注。这种平台可以提供非侵入性、直接进入肺上皮细胞和肺泡的RNA药物,在应用

纳米药物制备系统在mRNA疫苗研发中的应用

早在18世纪,英国医生爱德华琴纳(Edward Jenner)率先发现接种牛痘可以预防天花。随后在漫长的医学科学发展史上,科学家们陆续通过各种疫苗的研制战胜了脊髓灰质炎、白喉、麻疹、新生儿破伤风、狂犬病等多种疾病,极大地造福了人类。目前常用的疫苗主要包括灭活疫苗、减毒活疫苗、病毒载体疫苗、亚单位疫苗

mRNA差异显示技术的原理

  差异基因表达是细胞分化的基础。正是这些基因在细胞中的特异表达与否,决定了生命历程中细胞的发育和分化、细胞周期的调节、细胞衰老和死亡等。mRNA DD-PCR技术正是对组织特异性表达基因进行分离的一种快速而行之有效的方法。不同的组织/细胞或遗传背景相同的同一组织/细胞经过不同的处理后,提取各自的总

营养所揭示SRSF10调控mRNA选择性剪接的新机制

  1月18日,Nucleic Acids Research在线发表了中科院上海生命科学研究院营养科学研究所研究员冯英组的最新研究进展:Transcriptome analysis of alternative splicing events regulated by SRSF10 reve

Nature子刊:纳米颗粒实现器官特异性基因编辑!

  含遗传药物的脂质纳米粒可以通过生物工程调整其生物分布,诱导器官特异性基因调控。  脂质纳米颗粒(LNP)技术使一种小干扰siRNA (siRNA)药物的临床转化和首次获得美国食品和药物管理局(FDA)的批准成为可能。该纳米药物是为治疗遗传性疾病转胸腺视蛋白介导的淀粉样变性引起的多神经病而开发的,

颠覆mRNA递送技术:国内团队开发非阳离子LNP系统,可靶向脾脏并诱发强大免疫反应

  近年来,mRNA技术作为一种全新的药物形式,在疫苗生产、基因治疗和肿瘤治疗中引领变革且大放异彩。2023年诺贝尔生理学或医学奖更是授予了mRNA技术先驱Katalin Karikó和Drew Weissman。然而,如何将mRNA药物安全、高效地递送到靶组织仍然是当下面临的一个重要挑战。  “工

孟幻/刘湘圣团队开发“非LNP类”mRNA递送载体

  随着mRNA新冠疫苗的获批上市和广泛接种,mRNA技术受到了空前关注,并在传染病疫苗、癌症疫苗、罕见病治疗等领域取得了一系列突破。但迄今为止,人们主要关注基于脂质的mRNA递送纳米技术,尤其是脂质纳米颗粒(LNP),而对其他类型材料的递送载体,特别是无机纳米材料的关注相对较少。  介孔二氧化硅纳

Polyadenylation-of-mRNA

Gene expression requires the coordination and integration of multiple processes, including transcription, splicing, polyadenylation, nucleocytoplasmic

PCR技术(七):mRNA差异PCR技术

生物界的丰富多彩很大程度上取决于严格调控下的基因的选择性表达。高等生物的细胞内约含有105个不同的基因,而主 基因在某个特定的细胞中,只有占15%的一小部分表达。而且在不同的细胞中,选择性表达的基础也是不同的。正是这些基因的选择不同决定了整个生命的过程:如细胞的生长分化,激素和细胞困子对细胞的作用、

mRNA的分离

与rRNA和tRNA不同的是,哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾,因此可以用 oligo(dT)-纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等,1971;At Leder,1972)。在构建cDNA文库时, 必须经上述纯化步骤制备mRNA

mRNA的分离

与rRNA和tRNA不同的是,哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾,因此可以用oligo(dT)-纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等,1971;At Leder,1972)。在构建cDNA文库时, 必须经上述纯化步骤制备mRNA模板。进行

mRNA的分离

与rRNA和tRNA不同的是,哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾,因此可以用oligo(dT)-纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等,1971;At Leder,1972)。在构建cDNA文库时, 必须经上述纯化步骤制备mRNA模板。进行

mRNA的纯化

实验概要本文介绍了mRNA的纯化方法。实验原理mRNA的分离方法较多,其中以寡聚(dT)-纤维素柱层析法最为有效,已成为常规方法。此法利用mRNA  3‘末端含有Poly(A  )的特点,在RNA流经寡聚(dT)纤维素柱时,在高盐缓冲液的作用下,mRNA被特异地结合在柱上,当逐渐降低盐的浓度时或在低

mRNA的分离和纯化实验(一)

实验原理从细胞或组织中得到RNA是一种混合物,其中包括tRNA,rRNA和mRNA,其中RNA为75%~ 85%,tRNA占10%~16%,而mRNA仅占1%~5%,并且mRNA基因序列不同,分子量大小不均一,各基因的表达丰度也不一样。每克细胞可分离出5-10mg RNA。真核生物mRNA具