细胞融合实验的实验步骤介绍

1. DMEM或1640基础培养基、PEG溶液置于37℃水浴中预温; 2. 将Balb/c小鼠摘眼球处死后,浸入75%洒精; 3. 无菌取免疫小鼠的脾脏; 4. 脾脏用PBS洗涤后,放入无菌过滤的网筛,再把网筛放在盛有完全培养基的玻璃平皿中用研磨棒(或注射器针管)轻轻研磨或挤压,使其通过网筛; 5. 将培养皿中的细胞悬液吸出,放入离心管中,1200rpm/min,离心5min; 6. 收集2×10^7个生长良好的SP2/0细胞,与1×10^8个脾脏细胞混合于透明塑料离心管中; 7. 用RPMI1640洗涤混合细胞两遍,1000rpm离心8min后,弃尽上清并用手指弹击管底,使两种细胞充分混匀成糊状; 8. 将塑料管置于37℃保温杯中,吸取1ml经37℃预温的50%的PEG溶液,将吸管轻轻插入细胞底部,在1min内匀速加完,且边加边轻轻搅拌; 9. 在水浴中静置90s,再加入40ml 37℃预温的DMEM基础培......阅读全文

细胞融合实验的实验步骤介绍

  1. DMEM或1640基础培养基、PEG溶液置于37℃水浴中预温;  2. 将Balb/c小鼠摘眼球处死后,浸入75%洒精;  3. 无菌取免疫小鼠的脾脏;  4. 脾脏用PBS洗涤后,放入无菌过滤的网筛,再把网筛放在盛有完全培养基的玻璃平皿中用研磨棒(或注射器针管)轻轻研磨或挤压,使其通过网

关于细胞融合实验的步骤介绍

  1. DMEM或1640基础培养基、PEG溶液置于37℃水浴中预温;  2. 将Balb/c小鼠摘眼球处死后,浸入75%洒精;  3. 无菌取免疫小鼠的脾脏;  4. 脾脏用PBS洗涤后,放入无菌过滤的网筛,再把网筛放在盛有完全培养基的玻璃平皿中用研磨棒(或注射器针管)轻轻研磨或挤压,使其通过网

细胞融合实验的实验原理

  根据Burnet的抗体选择学说,一个B淋巴细胞只能产生一种针对它能够识别的特异性抗原决定簇的抗体。从一个祖先B细胞分裂繁殖而形成的纯细胞系称为克隆。来自克隆系的细胞基因是完全相同的,产生的抗体也完全相同。这种从一株克隆系产生的性质相同的均一抗体称为单克隆抗体。但这种具有分泌功能的B淋巴细胞难以在

细胞融合实验

实验概要掌握细胞融合原理、应用融合细胞的方法以及细胞融合率的计算。实验原理细胞融合(Cell  fusion),即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。人工诱导的细胞融合,在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。由于它不仅能产生同种细胞融合,也

细胞融合实验

实验方法原理细胞融合的诱导物种类很多.常用的主要有灭活的仙台病毒(Sendai virus),聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)和电脉冲。目前应用zui广泛的是聚乙二醇,因为它易得、简便,且融合效果稳定。PEG的促融机制尚不完全清楚,它可能引起细胞膜中磷脂的酰键及极性基团发生结

细胞融合实验的主要试剂介绍

  (1)胎牛血清或小牛血清  (2)培养基:细胞融合常用的培养液有DMEM、RPMI 1640 及无血清培养基等。DMEM有高糖(4500mg/L)及低糖(1000mg/L)之分。杂交瘤细胞在上述几种培养基中均能良好的生长与增殖  (3)HAT及HT培养液:HAT、HT(sigma)以五十分之一的

细胞融合实验的设备材料介绍

  超净工作台、二氧化碳恒温培养箱、倒置生物显微镜、离心机、恒温水浴箱、冰箱、细胞混匀器、荧光显微镜或流式细胞仪等。培养器皿及其它:96孔、24孔培养板、培养瓶、离心管、平皿、保温杯、培养液过滤装置、不锈钢网及手术剪刀、镊子等。Balb/c小鼠。SP2/0细胞(骨髓瘤细胞)。

细胞融合实验的实验原理简介

  根据Burnet的抗体选择学说,一个B淋巴细胞只能产生一种针对它能够识别的特异性抗原决定簇的抗体。从一个祖先B细胞分裂繁殖而形成的纯细胞系称为克隆。来自克隆系的细胞基因是完全相同的,产生的抗体也完全相同。这种从一株克隆系产生的性质相同的均一抗体称为单克隆抗体。但这种具有分泌功能的B淋巴细胞难以在

体细胞融合实验

单层培养细胞的融合 悬浮培养细胞的融合             实验材料 细胞 试剂、试

体细胞融合实验

单层培养细胞的融合 悬浮培养细胞的融合             实验材料 细胞 试剂、试

体细胞融合实验

实验材料 细胞试剂、试剂盒 PEG-1000仪器、耗材 培养基实验步骤 1. 以适当的培养基培养细胞至接近汇合成片的密度(80% 汇合率)。2. 吸干 60 mm 规格平皿或 T-25 培养瓶中的培养基,加 2 ml 50% PEG-1000,轻轻转动 1 分钟让该粘稠液体覆盖所有细胞。3. 往培养

关于细胞融合实验的主要试剂的介绍

  (1)胎牛血清或小牛血清  (2)培养基:细胞融合常用的培养液有DMEM、RPMI 1640 及无血清培养基等。DMEM有高糖(4500mg/L)及低糖(1000mg/L)之分。杂交瘤细胞在上述几种培养基中均能良好的生长与增殖  (3)HAT及HT培养液:HAT、HT(sigma)以五十分之一的

动物细胞融合实验

细胞融合是指两个或两个以上的细胞合并成为一个细胞的过程。在自然情况下,体内和体外培养的细胞均能发生自发融合现象。人工方法诱导细胞融合开始于50 年,现在这项技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫,肿瘤及细胞工程的重要手段。在诱导物(如仙台病毒,聚乙二醇)作用下,相互融合的细胞发生凝集,随后在质膜接

动物细胞融合实验

一、实验目的细胞融合是指两个或两个以上的细胞合并成为一个细胞的过程。在自然情况下,体内和体外培养的细胞均能发生自发融合现象。人工方法诱导细胞融合开始于50年,现在这项技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫,肿瘤及细胞工程的重要手段。通过实验,了解细胞融合的原理,掌握细胞融合的基本方法。二、实验原理在诱导物

简述细胞融合的实验操作

  人、鼠细胞融合实验分三步进行∶首先用荧光染料标记抗体∶将小鼠的抗体与发绿色荧光的荧光素(fluorescin)结合,人的抗体与发红色荧光的罗丹明(rhodamine)结合;第二步是将小鼠细胞和人细胞在灭活的仙台病毒的诱导下进行融合;最后一步将标记的抗体加入到融合的人、鼠细胞中,让这些标记抗体同融

细胞融合技术的实验操作

人、鼠细胞融合实验分三步进行∶首先用荧光染料标记抗体∶将小鼠的抗体与发绿色荧光的荧光素(fluorescin)结合,人的抗体与发红色荧光的罗丹明(rhodamine)结合;第二步是将小鼠细胞和人细胞在灭活的仙台病毒的诱导下进行融合;最后一步将标记的抗体加入到融合的人、鼠细胞中,让这些标记抗体同融合细

关于蓝瓶子实验的实验步骤介绍

  1 、锥形瓶中加50mL水,1.5克葡萄糖,逐滴滴入8~10滴0.1%亚甲基蓝,振荡至溶液呈蓝色。  2 、加入2mL30%NaOH溶液,振荡并静置锥形瓶,观察并记录现象。再振荡锥形瓶至溶液变蓝,又静置锥形瓶,连续记录两次振荡周期(NaOH的用量不能太多)。  3 、将溶液分装在两个小试管中,1

细胞转染实验的步骤介绍

  一、细胞传代  (1)试验准备:200ul/1mlTip头各一盒(以上物品均需高压灭菌),酒精棉球,废液缸,试管架,微量移液器,记号笔,培养皿,离心管。  (2)弃掉培养皿中的培养基,用1ml的PBS溶液洗涤两次。  (3)用Tip头加入1mlTrypsin液,消化1分钟(37。C,5%CO2)

细胞融合实验的注意事项

  1、整个制备过程需严格无菌及温度控制。  2、细胞传代培养时注意适时更换培养液。  3、SP2/0细胞与脾细胞比例需严格控制,这决定了融合率。  4、融合细胞因细胞膜受损而特别脆弱,操作过程需温和小心。  5、融合剂PEG的加入时间需准确把握,避免融合失败。

细胞融合的实验操作方法

(以人鼠细胞杂交为例)人、鼠细胞融合实验分三步进行∶首先用荧光染料标记抗体∶将小鼠的抗体与发绿色荧光的荧光素(fluorescin)结合,人的抗体与发红色荧光的罗丹明(rhodamine)结合;第二步是将小鼠细胞和人细胞在灭活的仙台病毒的诱导下进行融合;最后一步将标记的抗体加入到融合的人、鼠细胞中,

酵母菌细胞融合实验

实验概要学习酵母菌原生质体制备和再生技术,为了解酵母菌为材料的外源基因转移等技术奠定基础。实验原理酵母菌如酿酒酵母,在遗传学和分子生物学的研究中有很大作用,尤其是近些年来,随着科技的进步,酵母菌的遗传操作如转化、基因克隆和外源基因在酵母受体中的表达等技术都有了突破性的进展。作为受体系统的酵母菌原生质

体细胞杂交实验——单层全细胞融合实验

实验材料汇合至一定程度的受体细胞试剂、试剂盒受体细胞适合生存的培养基合适的选择性试剂含感兴趣染色体及合适遗传标记的供体细胞仪器、耗材10 cm 组织培养板25 cm 组织培养瓶倒置相差显微镜实验步骤基本方案 单层全细胞融合1.倘若不知道细胞的选择条件,通过以下方式来确定:将培养于 25 cm 培养瓶

细胞转染实验的实验步骤

细胞传代(1)试验准备:200ul/1mlTip头各一盒(以上物品均需高压灭菌),酒精棉球,废液缸,试管架,微量移液器,记号笔,培养皿,离心管。(2)弃掉培养皿中的培养基,用1ml的PBS溶液洗涤两次。(3)用Tip头加入1mlTrypsin液,消化1分钟(37。C,5%CO2)。用手轻拍培养瓶壁,

薄层色谱实验的实验步骤

  偶氮苯和苏丹Ⅲ由于极性不同,利用薄层色谱(TLC)可以将二者分离。  (1)点样。  取两块制好的薄层板,分别在距一端1 cm处用铅笔轻轻画一条横线作为起始线。取管口平整的毛细管插入样品溶液[6]中,在一块板的起点上点1%偶氮苯的甲苯溶液和混合液两个样点。在第二块板的起点线上点1% 苏丹Ⅲ 的甲

细胞划痕实验实验步骤

一.准备:所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内)二.流程:1.先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀得划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。2.在空中加入约5X105个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过一夜能铺

原代培养的实验步骤介绍

  1.取材:将孕鼠拉颈椎处死,投入75%酒精浸泡数秒消毒,提出孕鼠控掉酒精,放置于蜡盘中用大头针固定。用手术器械逐层分离皮肤和肌肉组织,打开腹腔。注意不同的解剖层次使用不同的消毒器械。最后取出双角子宫置于无菌平皿内。  2.用Hanks液洗涤3次,剪开子宫取出胚胎。除去子宫、血液和筋膜等组织。  

蒸馏法的实验操作步骤介绍

  加料  将待蒸馏液通过玻璃漏斗小心倒入蒸馏瓶中,要注意不使液体从支管流出。加入几粒助沸物,安好温度计。再一次检查仪器的各部分连接是否紧密和妥善。  加热  用水冷凝管时,先由冷凝管下口缓缓通入冷水,自上口流出引至水槽中,然后开始加热。加热时可以看见蒸馏瓶中的液体逐渐沸腾,蒸气逐渐上升。温度计的读

水迷宫实验的方法步骤介绍

做水迷宫实验的正确姿势Richard G. Morris于1981年和1984年连续发表的两篇文献使水迷宫实验名动天下,三十多年来已然成为学习记忆研究中不可或缺的评价实验。前文中小白鼠BB-8依次经历了实验的四个阶段,本文我们就认真介绍一下水迷宫实验的攻略。既然是攻略,那实验目的啊实验原理啊什么

简介细胞融合实验的注意事项

  1、整个制备过程需严格无菌及温度控制。  2、细胞传代培养时注意适时更换培养液。  3、SP2/0细胞与脾细胞比例需严格控制,这决定了融合率。  4、融合细胞因细胞膜受损而特别脆弱,操作过程需温和小心。  5、融合剂PEG的加入时间需准确把握,避免融合失败。

干热灭菌实验步骤介绍

  (1) 装入待灭菌物品  将包好的待灭菌物品(培养皿,试管,吸管等)放入电烘箱内,关好箱门。  (2) 升温  接通电源,拨动开关,打开电烘箱排气孔,旋动恒温调节器至绿灯亮,让温度逐渐上升。当温度升至 100℃时,关闭排气孔。在升温过程中,如果红灯熄灭,绿灯亮,表示箱内停止加温,此时如果还未达到