哺乳动物细胞基因突变试验
哺乳动物体外培养细胞的基因正向突变试验常用的测试系统有小鼠淋巴瘤L5178Y细胞，中国仓鼠肺V79细胞和卵巢CHO细胞的三个基因位点的突变，即次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)、胸苷激酶(TK)及Na+／K+ATP酶(OUA)位点。HGRPT和Na+/K+ATP酶位点突变可用于上述三种细胞，OUA位点突变仅适用于CHO细胞，HGRPT和TK可分别使6－硫代鸟嘌呤(6－TG)转移上磷酸核糖及使5－溴脱氧尿苷磷酰化，它们的代谢产物可掺入DNA引起细胞死亡，因此正常细胞在含有这些硷基类似物的培养基中不能生长，在致突变物作用下此两个位点发生突变的细胞对这些硷基类似物具有抗药性，可以增殖成为克隆(细胞集落)。Na+/K+ATP酶是细胞膜上的Na+/K泵，鸟本苷可抑制此酶活性引起细胞死亡，当致突变物引起该位点突变后，Na+/K+ATP酶对鸟本苷的亲和力下降，而酶活性不变，故对培养基中的鸟本苷产生抗药性，并可增殖为克隆。......阅读全文
哺乳动物细胞基因突变试验
哺乳动物体外培养细胞的基因正向突变试验常用的测试系统有小鼠淋巴瘤L5178Y细胞，中国仓鼠肺V79细胞和卵巢CHO细胞的三个基因位点的突变，即次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)、胸苷激酶(TK)及Na+／K+ATP酶(OUA)位点。HGRPT和Na+/K+ATP酶位点突变可用于上述三种细胞，O
关于致突变试验—哺乳动物细胞基因突变试验的介绍
哺乳动物细胞基因突变试验—哺乳动物体外培养细胞的基因正向突变试验常用的测试系统有小鼠淋巴瘤L5178Y细胞，中国仓鼠肺V79细胞和卵巢CHO细胞的三个基因位点的突变，即次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)、胸苷激酶(TK)及Na+/K+ATP酶(OUA)位点。HGRPT和Na+/K+ATP酶位点
体外哺乳动物细胞染色体畸变试验方法！
在加入或不加入代谢活化系统的条件下，使培养的哺乳动物细胞暴露于受试样品中。用中期分裂象阻断剂（如秋水仙素）处理，使细胞停止在中期分裂象，随后收获细胞、制片、染色、分析染色体畸变。通过检测受试样品诱发体外培养的哺乳动物细胞染色体畸变的能力，从而评价受试样品的致突变性及其强度。 一、材料⒈受试样品固体受
哺乳动物细胞的生物特征
哺乳动物是全身被毛,运动快速,恒温,胎生和哺乳的脊椎动物.它是脊椎动物中躯体结构,功能和行为最复杂的一个高等动物类群.鸟类和哺乳类都是从爬行动物起源的,它们分别以不同的方式适应陆栖生活所遇到的许多基本矛盾(陆地上快速运动,防止体内水分蒸发,完善的神经系统和繁殖方式),并在新陈代谢水平全面提高的基
哺乳动物细胞总RNA快速分离
试剂、试剂盒 尤钙镁离子磷酸缓冲盐溶液 EDTASDS 乙酸钠水平衡的苯酚 乙醇 Tris-Cl NaCL实验步骤 一 材料与设备1)尤钙镁离子磷酸缓冲盐溶液 (PBS) 2)10 mmol/L EDTA (pH8.0 ) 3)0.5% SDS 4)0. l mol/L 乙酸钠（p
哺乳动物细胞总RNA的分离
实验概要本实验介绍了从培养的单层哺乳动物细胞中分离RNA的实验程序，该程序同样适用于从悬浮培养的哺乳动物细胞中或从易于分散成单个细胞的哺乳动物组织中分离RNA。但不适用于从固体组织中提取RNA，因为用这种裂解细胞的方法（在SDS存在的条件下用蛋白酶K消化)去消化组织速度很慢，导致内源性RNA酶在被蛋
哺乳动物细胞的细胞培养
实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，而洗刷消毒
哺乳动物细胞总RNA快速分离
试剂、试剂盒 尤钙镁离子磷酸缓冲盐溶液 EDTA SDS 乙酸钠 水平衡的苯酚 乙醇 Tris-Cl NaCL
哺乳动物细胞总RNA的分离
哺乳动物细胞总ＲＮＡ的分离细胞的裂解提取步骤注意事项 这一从培养的单层哺乳动物细胞中分离RNA的实验程序系为Favaloro 等（1980）所介绍程序的改良。该程序同样适用于从悬浮培养的哺乳动物细胞中或从易于分散成单个细胞的哺乳动物组织中分离RNA。但不适用于从固体组织中提取RNA，因为用这种裂解
培养两栖动物细胞与哺乳动物细胞区别
1.培养两栖动物细胞与哺乳动物细胞区别在培养液上,也就是血浆的不同,其它的一样；2.培养两栖动物体细胞比哺乳动物细胞难养,原因在于两栖动物个体都较小,血浆制备较难；3.原代培养的话,两栖动物细胞用两栖动物的血浆,哺乳动物细胞用哺乳动物的血浆,（同物种个体上取下的血浆,最好自体上取下的）和其它营养物质
从哺乳动物细胞或组织分离DNA
1. 根据样品类型，从下列方法中选一个作为步骤 1 进行操作。(1) 细胞样品① 单层培养的细胞以用冰预冷的 TBS 将单层细胞洗涤 2 次，用刮棒把细胞刮入约 0.5 ml 的 TBS 中，将细胞悬液转移到冰浴的离心管中，用 1 mlTBS 冲洗培养皿，并入离心管中的细胞悬液。于 4℃ 以
哺乳动物细胞基因稳定转染的实验
分析基因的功能常需要形成含有稳定整合了该基因的哺乳动物细胞系。在转染中大约有1/104细胞将稳定整合外源因而可用一显性（正向）选择标记来分离稳定的转化细胞。用可高效转染的细胞系来确保转染成功。另外，应包括合适的对照以确定目的基因无细胞毒性。实验材料哺乳动物细胞试剂、试剂盒完全培养液仪器、耗材培养箱离
哺乳动物细胞的简介和生物特征
哺乳动物细胞（mammalian cell)来自哺乳动物体的细胞。它的培养由于可用来大量生产疫苗、重组蛋白和其他医疗产品而倍受重视。已建成许多重要的细胞系，这些细胞来自鼠、人、猴等。 哺乳动物是全身被毛,运动快速,恒温,胎生和哺乳的脊椎动物.它是脊椎动物中躯体结构,功能和行为最复杂的一个高等动
实用哺乳动物细胞培养手册（五）
细胞培养基本概念细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下，使其生长繁殖，并维持其结 构和功能的一种培养技术。细胞培养的培养物可以是单个细胞，也可以是细胞群。细胞培养目的与用途1、科学研究：药物研究开发与基础研究 药物研究与开发(1) 新药筛选：如化学合成药物药效研究、中药有效成分筛选与鉴定
实用哺乳动物细胞培养手册（中）
细胞培养环境 1、实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受 其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响， 要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌 操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作
哺乳动物细胞基因稳定转染的实验
实验材料 哺乳动物细胞试剂、试剂盒 完全培养液仪器、耗材 培养箱离心管实验步骤 1. 确定所要转染的细抱系能呈独立集落生长。对于贴壁细胞，在10 cm 组织培养培养皿中接种约100个细胞，培养10~12天，毎4天换液1次。亚甲蓝染色后对成活的细胞集落进行计数。 2. 确定母代细胞的选择条件：将一
实用哺乳动物细胞培养手册（下）
细胞培养所用玻璃及塑料制品的清洗与消毒 清洗 在组织细胞培养中，体外细胞对任何有害物质都非常敏感。微生物产品附带杂物，上次细胞残留物及非营养成分的化学物质，均能影响培养细胞的生长。因此对新使用玻璃器 皿和重新使用的培养器皿都要严格彻底的清洗，且要根据器皿的组成材料不同，选择不同 的清
实用哺乳动物细胞培养手册（下）
细胞培养所用玻璃及塑料制品的清洗与消毒清洗在组织细胞培养中，体外细胞对任何有害物质都非常敏感。微生物产品附带杂物，上次细胞残留物及非营养成分的化学物质，均能影响培养细胞的生长。因此对新使用玻璃器 皿和重新使用的培养器皿都要严格彻底的清洗，且要根据器皿的组成材料不同，选择不同 的清洗方法。玻璃器皿的清
实用哺乳动物细胞培养手册（四）
细胞培养无菌操作基本技术无菌操作技术分为三个部分：工作环境及表面的处理，细胞培养所用玻璃及塑料制品的处理及培养液与培养细胞的处理。工作环境的处理 使用层流超净工作台是最经济有效的手段。超净工作台正常工作时，向下的气流可阻挡外界空气污染物进入超净台。（1）实验前，无菌室及无菌操作台用紫外灯照射 30-
哺乳动物细胞“变身”生物计算机
《科学》杂志28日报道，波士顿大学合成生物学家威尔森·黄带领的团队提出一种方法，用基因工程方法编辑哺乳动物细胞DNA，从而进行复杂的计算，使这类细胞变成生物计算机。他们希望新的编程技术有助于癌症治疗、按需生长可以替换受损身体部位的组织等。 科学家尝试将细胞编辑工程从细菌扩展到哺乳动物细胞，创建
实用哺乳动物细胞培养手册（三）
细胞培养环境1、实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受 其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响， 要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌 操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作
实用哺乳动物细胞培养手册（上）
细胞培养基本概念细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下，使其生长繁殖，并维持其结 构和功能的一种培养技术。细胞培养的培养物可以是单个细胞，也可以是细胞群。细胞培养目的与用途1、科学研究：药物研究开发与基础研究 药物研究与开发(1) 新药筛选：如化学合成药物药效研究、中药有效成分筛选与鉴定
实用哺乳动物细胞培养手册（一）
细胞培养所用玻璃及塑料制品的清洗与消毒清洗在组织细胞培养中，体外细胞对任何有害物质都非常敏感。微生物产品附带杂物，上次细胞残留物及非营养成分的化学物质，均能影响培养细胞的生长。因此对新使用玻璃器 皿和重新使用的培养器皿都要严格彻底的清洗，且要根据器皿的组成材料不同，选择不同 的清洗方法。玻璃器皿的清
哺乳动物细胞的细胞培养温度
维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定而适宜的温度；不同种类的细胞对培养温度要求也不同。人体细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃，偏离这一温度范围，细胞的正常代谢会受到影响，甚至死亡。培养细胞对低温的耐受力较对高温强，温度上升不超过39℃时，细胞代谢与温度成正比；人体细胞在39-40℃1小时，即能
实用哺乳动物细胞培养手册（六）
缓冲系统大多数细胞所需 pH 在 7.2 - 7.4。但是，细胞培养最适 pH 值随培养的细胞种类不同而 不同。成纤维细胞喜欢较高 pH (7.4 - 7.7), 而传代转化细胞系则需要偏酸 pH (7.0 - 7.4)。 由于多数培养液靠碳酸氢钠（NaHCO3）与 CO2 体系进行缓冲，因
实用哺乳动物细胞培养手册（中）
细胞培养环境1、实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受 其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响， 要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌 操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于
哺乳动物细胞的RNAi技术策略(2)
1.化学合成尽管化学合成是最贵的方法，但是却是最方便的――研究人员几乎不需要做什么工作。包括Ambion和Qiagen公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成si 。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3―4对si s 的成本就更高了，
哺乳动物细胞胞质RNA的分离
试剂、试剂盒 冰冷的磷酸盐缓冲液 NaCl KCl Na2HP04•7H20 KH2PO4 冰冷的裂解缓冲液： LTris-HCl
哺乳动物细胞基因稳定转染的实验
基本方案 实验材料 哺乳动物细胞 试剂、试剂盒
哺乳动物细胞培养过程－－培养条件
哺乳动物细胞培养过程 & 培养条件导语：哺乳动物细胞在培养过程中会经过组织提取，原代培养，传代培养等过程。传代培养会根据具体情况分为细胞株培养和细胞系培养。哺乳动物细胞培养过程哺乳动物细胞在培养过程中会经过组织提取，原代培养，传代培养等过程。传代培养会根据具体情况分为细胞株培养和细胞系培养。如下对各