免疫组织化学法概述

免疫组织化学是应用抗原和抗体结合的原理,检测细胞内多肽、蛋白质等大分子物质的分布。这种方法的特异性强、敏感度高、发展迅速、应用广泛,成为生物学和医学众多学科的重要研究手段。免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。免疫组织化学的全过程包括:1.抗原的提取与纯化;2.免疫动物或细胞融合,制备特异性抗体以及抗体的纯化;3.将显色剂与抗体结合形成标记抗体;4.标本的制备;5.免疫细胞化学反应以及呈色反应;6.观察结果。......阅读全文

免疫组织化学法概述

免疫组织化学是应用抗原和抗体结合的原理,检测细胞内多肽、蛋白质等大分子物质的分布。这种方法的特异性强、敏感度高、发展迅速、应用广泛,成为生物学和医学众多学科的重要研究手段。免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性

亲和免疫组织化学实验——LSAB-法

实验方法原理LSAB 法或称 S-P 法、SABC 法,它是采用生物素标记的第二抗体与结合有 HRP 或 AKP 酶的链霉亲和素(streptavidin)连接来测定细胞及组织中的抗原。链霉亲和素是一种从链霉菌培养物中提取的蛋白质,相对分子质量 60000,不含糖链,等电点 pI 为 6.0~6.5

亲和免疫组织化学实验——-CSA法

实验方法原理催化信号放大系统(catalyzed signal amplification system,CSA),也称酿胺信号放大(tyramine signal amplification system,TSA)或称 CARD(catalyzed repoter deposition)。该方法的

亲和免疫组织化学实验——ABC-法

实验方法原理ABC 法即亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法,是许世明于 1981 年在 BAB 法和 LAB 法的基础上改良的,其特点是利用亲和素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶。ABC 法与 LAB 法、BAB 法不同的是第一抗体不为生物素所标记,生物素标记的第二抗体与 ABC 复合物

概述免疫组织化学的基本内容

  免疫组织化学(immunohistochemistry)又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。  它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微

亲和免疫组织化学实验——改进-CSA法

实验方法原理已有的研究结果证实,CSA 法较 LSAB 法敏感 500~1000 倍,较 EnVision 法敏感 20~100 倍。其对细胞周期素等核内抗原的定位,有独特的优点,定位准确性、敏感性、稳定性要较标准的 CSA 法好,其敏感性和穿透性要好于 EnVision 法。最近,Hasui K

小鼠脑片免疫组织化学(ABC法)实验

实验方法原理 通过特异的抗原抗体反应标记上可见的显示物系统来检查细胞及组织上原位抗原或抗体成分的方法。在光学显微镜、荧光显微镜或电子显微镜下观察其性质定位,还可以利用细胞分光光度计、图像分析仪、共聚焦显微镜等进行细胞原位半定量测定。免疫组织化学的显著特点是特异性强。实验材料 冷冻切片试剂、试剂盒 一

免疫组织化学染色方法(SP法)

免疫细胞化学(immunocytochemistry)是根据免疫学原理,利用抗体同特定抗原专一结合,对抗原进行定位测定的技术。抗原主要为大分子或与大分子相结合的小分子;抗体则是由浆细胞针对特定的抗原分泌的γ球蛋白。如果将抗体结合上标记物,再与组织中的抗原发生反应,即可在光镜或电镜下显示出该抗原存在于

石蜡制片法(用于免疫组织化学,HE染色)

 石蜡制片法是将材料经固定、脱水、透明、浸蜡后包埋在石蜡里面进行切片的方法。此法适用范围,制片手段完备,能将材料切成极薄的片子(可切至2-8微米左右),并能制成连续的片子,这是其它制片法难以达到的,因此在光学显微镜的制片技术上它是最常用的一种方法。除了一些经不住石蜡切片法中所应用的各种药剂处理的材料

小鼠脑片免疫组织化学(ABC法)实验——免疫组化法

实验方法原理通过特异的抗原抗体反应标记上可见的显示物系统来检查细胞及组织上原位抗原或抗体成分的方法。在光学显微镜、荧光显微镜或电子显微镜下观察其性质定位,还可以利用细胞分光光度计、图像分析仪、共聚焦显微镜等进行细胞原位半定量测定。免疫组织化学的显著特点是特异性强。实验材料冷冻切片试剂、试剂盒一抗;二

概述免疫组织化学应用的基本原则

  免疫组织化学染色在生物医学研究中具有十分广泛的作用。并且涉及许多研究领域。但是,免疫组织化学技术也有其局限性,例如,组织细胞内的待测物质要有抗原性,而且需要有一定浓度方可检出;检出的免疫反应阳性蛋白不能被确定是细胞新合成的蛋白还是通过细胞间运输而来的蛋白,因此,在实验设计中应充分考虑这些特点。如

色谱法概述

色谱法是一种重要的分离分析方法,它是利用不同物质在两相中具有不同的分配系数(或吸附系数、渗透性),当两相作相对运动时,这些物质在两相中进行多次反复分配而实现分离。在色谱技术中,流动相为气体的叫气相色谱,流动相为液体的叫液相色谱。固定相可以装在柱内,也可以做成薄层。前者叫柱色谱,后者叫薄层色谱。根据色

Sanger测序法概述

  Sanger测序法就是利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP),并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。 [1]  由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-

法夏的概述

  法夏(拉丁学名:Rhizoma Pinelliae),又名“半夏”“三叶半夏”“三步跳”等,天南星科半夏属植物。[1]  法夏块茎圆球形,直径1-2厘米,具须根。叶2-5枚,有时1枚,叶柄长15-20厘米。浆果卵圆形,黄绿色。花期5-7月,果8月成熟。除内蒙古、新疆、青海、西藏尚未发现野生的外,

凝胶层析法概述

凝胶层析法(gel chromatography)也称分子筛层析法,是指混合物随流动相经过凝胶层析柱时,其中各组分按其分子大小不同而被分离的技术。该法设备简单、操作方便、重复性好、样品回收率高,除常用于分离纯化蛋白质、核酸、多糖、激素等物质外,还可用于测定蛋白质的相对分子质量,以及样品的脱盐和浓

免疫组织化学

实验概要免疫组化流程实验步骤 第一天:1、组织切片置于60℃烘烤1hr2、二甲苯1、2 分别浸泡15min,脱蜡3、水化:100% Etoh 10min X 295% Etoh 5min X 185% Etoh 5min X 170% Etoh 5min X 1注:以下步骤切勿让组织处于干燥状态!4

免疫组织化学

·         Double Peroxidase (HRP) Immunohistochemical Labeling of Trypsin-Sensitive Antigens (KPL)·         Immunohistochemistry (Tyner lab)This is a

内标法与外标法概述(二)

三、定量分析中怎样选择内标法或外标法选一与欲测组分相近但能完全分离的组分做内标物(当然是样品中没有的组分),然后配制欲测组分和内标物的混合标准溶液,进样得相对校正因子。再将内标物加入欲测组分的样品中,进样后测得欲测组分和内标物的定量参数。用内标法公式计算即可。 内标法是将一定量的纯物质作内标物,加入

内标法与外标法概述(一)

一、内标法什么叫内标法?怎样选择内标物?内标法是一种间接或相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时,加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响,以提高分析结果的准确度。内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。使用内标法时,在样品中加入一定量的标准物质,它可被色谱拄所

色谱法概述(一)

第一课 色谱法概述 色谱法是一种重要的分离分析方法,它是利用不同物质在两相中具有不同的分配系数(或吸附系数、渗透性),当两相作相对运动时,这些物质在两相中进行多次反复分配而实现分离。在色谱技术中,流动相为气体的叫气相色谱,流动相为液体的叫液相色谱。固定相可以装在柱内,也可以做成薄层。前者叫柱色谱,后

色谱法概述(三)

第十一课 离子色谱法 离子色谱法 离子色谱法是利用离子交换原理和液相色谱技术测定溶液中 阴离子和阳离子的一种分析方法。离子色谱是液相色谱的一种。离子色谱是利用不同离子对固定相亲合力的差别来实现 分离的。离子色谱的固定相是离子交换树脂,离子交换树脂是苯乙烯- 二乙烯基苯的共聚物。树脂核外是一层可离解的

关于内标法的概述

  内标法(Internal Standard Method)是将一定重量的纯物质作为内标物(参见内标物条)加到一定量的被分析样品混合物中,然后对含有内标物的样品进行色谱分析,分别测定内标物和待测组分的峰面积(或峰高)及相对校正因子,按公式即可求出被测组分在样品中的百分含量。内标法是色谱分析中一种比

免疫浊度法概述

  本质上是属于液体内沉淀技术,其特点是将现代光学测量仪器、自动化检测系统和免疫沉淀反应相结合。免疫浊度法本质上是属于液体内沉淀技术,其特点是将现代光学测量仪器、自动化检测系统和免疫沉淀反应相结合,可进行液体中微量抗原、抗体和小分子半抗原定量检测。  当可溶性抗原与相应抗体在两者比例合适时,抗原抗体

彩色免疫金银法概述

彩色免疫金银法(colouredIGSS简称CIGSS)是在IGSS基础上发展起来的一种新方法。其基本原理与彩色显影相似。IGSS方法染色在抗原位点处生成银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的作用即被氧化成溴化银,后者与彩色显影剂相接触立即被还原成金属银,而彩色显影剂本身则被氧化,其氧化产物使彩色成色剂由无色变

法罗海的概述

  功能主治:理气止痛;止咳平喘。主胸胁脘腹疼痛;头痛;咳喘  用法用量:内服:煎汤,6-15g;或入丸、散。  注意:《四川中药志》1960年版:阴虚有热及胃病唾血者忌用。  附方:产云南东川府法戛地的法落海村,故名法落海,亦写作法罗海。又名法落梅,梅乃海字之讹。茎叶似川芎,故又名土川芎。  各家

色谱法概述(二)

第七课 液相色谱仪 气相色谱法是一种很好的分离、分析方法,它具有分析 速度快、分离效能好和灵 敏度高等优点。但是气相色 谱仅能分析在操作温度下能汽化而不分解的物质。据估 计,在已知化合物中能直接进行气相色谱分析的化合物 约占15%,加上制成衍生物的化合物,也不过20%左右。 对于高沸点化合物;难挥发

农杆菌介导法概述

  农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中,农杆菌的介导转化在一些单子叶植物(尤其是水稻)中也得到了广泛应用。此外,生物技术学家还可以通过发根农杆菌转化,在液体培养基中培养高密度的根,作为一种在转基因植物中获得大量蛋白质的方法。  农杆菌Ti质粒的T-DNA可高效率地整合到植物受体细胞的染色体上并得到

概述薄层色谱法

  薄层色谱,或称薄层层析(thin—layer chromatography),是以涂布于支持板上的支持物作为固定相,以合适的溶剂为流动相,对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。这是一种快速分离诸如脂肪酸、类固醇、氨基酸、核苷酸、生物碱及其他多种物质的特别有效的层析方法,从50年代发展

亲和层析法概述

亲和层析法是利用生物大分子与某些对应的专一分子特异识别和可逆结合的特性而建立起来的一种分离生物大分子的色谱方法,也叫做生物亲和或生物特异性亲和色谱。这种特异可逆结合的物质很多,见表6–3。如抗原与抗体、底物与酶、激素与受体等,他们间的这种特异亲和能力又叫亲和力。亲和色谱中,一对互相识别的分子互称对方

气相色谱法分析法概述

  气相色谱仪是用于分离复杂样品中的化合物的化学分析仪器。气相色谱仪中有一根流通型的狭长管道,这就是色谱柱。在色谱柱中,不同的样品因为具有不同的物理和化学性质,与特定的柱填充物(固定相)有着不同的相互作用而被气流(载气,流动相)以不同的速率带动。当化合物从柱的末端流出时,它们被检测器检测到,产生相应