关于鬼笔环肽的配制内容介绍

0.1mg鬼笔环肽溶于1ml无水甲醇(也可用DMSO或无水乙醇溶解)配成贮存液,可在-20度避光的条件下长期保存,工作液的浓度为5ug/ml,由贮存液加生理盐水PBS稀释20倍即可。 一、染色程序 1、生理盐水PBS清洗细胞2次,每次10分钟; 2、3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定20分钟,生理盐水PBS清洗细胞2次; 3、加入5ug/ml的FITC-鬼笔环肽室温染色30-60分钟,夏季时间可以短一些,生理盐水PBS清洗细胞2次; 4、DAPI或hoechst33258染细胞核10分钟,生理盐水PBS清洗细胞2次; 5、吸去多余水分,加荧光封片液(中性或偏碱性缓冲液加等量甘油),盖上盖玻片,荧光或共聚焦显微镜下观察。 二、注意事项 1、鬼笔环肽的分子量小,很容易通过细胞,不需要对细胞进行冷丙酮和TRITON X-100处理。 2、药品价格昂贵,0.1mg的售价接近两千元,要节约使用。 3、毒性较大,戴上......阅读全文

关于鬼笔环肽的配制内容介绍

  0.1mg鬼笔环肽溶于1ml无水甲醇(也可用DMSO或无水乙醇溶解)配成贮存液,可在-20度避光的条件下长期保存,工作液的浓度为5ug/ml,由贮存液加生理盐水PBS稀释20倍即可。  一、染色程序  1、生理盐水PBS清洗细胞2次,每次10分钟;  2、3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定20分

关于鬼笔环肽的物质介绍

  鬼笔环肽是最早发现的环状肽之一。它是从Amanita phalloides中分离出来的,并于1937年由Feodor Lynen和Ulrich Wieland结晶。它的结构不同寻常,因为它包含一个半胱氨酸-色氨酸键,形成一个双环七肽。这种连接以前没有被表征过,这使得鬼笔环肽的结构阐明变得更加困难

关于鬼笔环肽的基本介绍

  鬼笔环肽(phalloidin),是从一种剧毒蘑菇(Amanita phalloides(Vaill ex Fr.)Secr.) (伞菌目,毒伞属的毒伞)中分离出来的一种多肽物质,属于毒伞肽类毒素,是一种强烈毒素。无色,细针状结晶。鬼笔环肽中毒的主要症状是由于肝细胞的破坏引起的急性饥饿。它通过结

关于鬼笔环肽的毒性介绍

  发现后不久,科学家将鬼笔环肽注射入小鼠体内,并通过IP注射发现其LD50为2 mg / kg。 当暴露于最小致死剂量时,这些小鼠死亡需要几天时间。 鬼笔环肽中毒的唯一明显副作用是极度饥饿。 这是因为鬼笔环肽仅通过胆汁盐膜转运蛋白被肝脏吸收。 一旦进入肝脏,鬼笔环肽会结合F-肌动蛋白,从而阻止其解

关于鬼笔环肽的生物合成介绍

  鬼笔环肽是一种双环七肽,含有不寻常的半胱氨酸-色氨酸键。 编码鬼笔环肽合成的基因是死亡帽蘑菇中MSDIN家族的一部分,编码34个氨基酸的前肽。 脯氨酸残基位于七个残基区域的两侧,稍后将变成鬼笔环肽。 翻译后,必须对肽进行蛋白水解切除,环化,羟基化,使Trp-Cys交联形成色氨酸,并差向异构化以形

关于鬼笔环肽的化学合成介绍

  由于鬼笔环肽因其结合和稳定肌动蛋白聚合物的能力而被开发利用,但细胞无法轻易吸收,因此科学家发现鬼笔环肽衍生物在研究中更有用。 本质上,它遵循典型的使用羟脯氨酸的小肽合成。 合成的主要困难是色氨酸的形成(半胱氨酸-色氨酸交联)。  以下是Anderson等人进行的一般合成机理。在2005年进行了a

关于鬼笔环肽用作显影剂的介绍

  荧光鬼笔环肽(红色)标记内皮细胞中的肌动蛋白丝鬼笔环肽的特性使其成为研究F-肌动蛋白在细胞中分布的有用工具,方法是用荧光类似物标记鬼笔环肽并用它们对肌动蛋白丝染色以进行光学显微镜检查。鬼笔环肽的荧光衍生物在定位活细胞或固定细胞中的肌动蛋白丝以及体外观察单个肌动蛋白丝方面非常有用。开发了一种高分辨

简述鬼笔环肽的作用机理

  鬼笔环肽结合F-肌动蛋白,防止其解聚并中毒细胞。 鬼笔环肽特异性结合在F-肌动蛋白亚基之间的界面,将相邻的亚基锁定在一起。 鬼笔环肽(一种双环七肽)与肌动蛋白丝的结合比与肌动蛋白单体的结合更紧密,从而导致肌动蛋白亚基从丝端解离的速率常数减小,这通过防止丝解聚而基本稳定了肌动蛋白丝。此外,发现鬼笔

关于环肽的命名介绍

  环肽(cyclic peptides)的名称由肽的名称(放在括号内)加前缀“环(cyclo)”构成。由符号构成的肽的名称放在括号“( )”内,前面也加上前缀“环(cyclo)”。完全由氨基酸残基以正常肽键[真肽键(eupeptide linkage)]组成的肽对其中 D -型的氨基酸残基需要使用

细胞骨架观察实验——鬼笔环肽显示微丝蛋白染色法

实验材料细胞试剂、试剂盒PBS三硝基甲苯甘油仪器、耗材显微镜实验步骤1.  盖片培养细胞(70 %~80 %汇合),PBS洗3 次;2.  2 %的甲醛/PBS 液(甲醛按37 %)固定3 分钟;3.  0.5 %的三硝基甲苯/PBS处理3 次,每次10 分钟;4.  PBS漂洗3 次;5.  用罗

关于环肽的基本信息介绍

  通常生物学中所指的环肽是指以氨基酸肽键形成的化合物,在植物化学中这一概念被扩大成以酰胺键形成的一类化合物,因此范围被扩大至包括有机胺类和大环生物碱类,根据成环与否分为环肽和直链肽。 已报道的环肽类化合物具有多方面的生物活性,包括抗肿瘤、抗HIV、抗菌、抗疟、安眠、抑制血小板聚集、降压、抑制酪氨酸

技术和方案13-已固定细胞的肌动蛋白染色

试剂、试剂盒PBS固定液实验步骤鬼笔环肽专一性地结合 F 肌动蛋白,荧光标记的鬼笔环肽染细胞与肌动蛋白抗体的染色模式类似。1.在 500 ml 三角瓶中振荡培养 25 ml 酵母菌至密度为 2X107 个/ml。2.添加 17 ml 10% 甲醛(EM 电子显微级)到培养基中至终浓度 4%,在酵母菌

关于抗凝剂的配制介绍

  EDTA  常用EDTA的钠盐或钾盐作为抗凝剂,能与血液中的钙离子结合成螯合物,而使钙离子失去凝血作用,从而阻止血液凝固。  肝素  1%肝素溶液0.1ml于试管内,旋转试管,使溶液均匀浸湿试管内壁,放入80~100℃烘箱烤干,每管能使5~10ml血液不凝。急性血压实验时可在充满生理盐水的动脉套

自动细胞成像系统进行细胞表型的多参数评估

简介自动细胞成像是一种分析化合物对包括细胞形态,活力和标志物表达在内的细胞表型的影响的有效方法。这里,我们将展示ImageXpress® Pico自动细胞成像系统和CellReporterXpress 自动成像分析软件如何应用于化合物影响的表型分析。成像和分析方法可提供工具来鉴定细胞活力,细

细胞骨架观察实验

鬼笔环肽显示微丝蛋白染色法 抗管蛋白免疫染色法 考马斯亮蓝染色法             实验材料 细胞

细胞肌动蛋白的影响

有许多毒素可以通过阻止肌动蛋白聚合(latrunculin和细胞松弛素D)或通过稳定它(鬼笔环肽)来干扰肌动蛋白的动力学:Latrunculin是一种由海绵产生的毒素,它与G-肌动蛋白结合,阻止它与微丝结合。细胞色素D是由真菌产生的生物碱,其与F-肌动蛋白的(+)末端结合,阻止添加新单体。已发现Cy

肌动蛋白的生理影响

有许多毒素可以通过阻止肌动蛋白聚合(latrunculin和细胞松弛素D)或通过稳定它(鬼笔环肽)来干扰肌动蛋白的动力学:Latrunculin是一种由海绵产生的毒素,它与G-肌动蛋白结合,阻止它与微丝结合。细胞色素D是由真菌产生的生物碱,其与F-肌动蛋白的(+)末端结合,阻止添加新单体。已发现Cy

肌动蛋白的影响简介

  有许多毒素可以通过阻止肌动蛋白聚合(latrunculin和细胞松弛素D)或通过稳定它(鬼笔环肽)来干扰肌动蛋白的动力学:  Latrunculin是一种由海绵产生的毒素,它与G-肌动蛋白结合,阻止它与微丝结合。  细胞色素D是由真菌产生的生物碱,其与F-肌动蛋白的(+)末端结合,阻止添加新单体

试剂盒内容及其配制

完整的ELISA试剂盒包含以下各组分:                                                     (1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);                                                     (

关于谷胱甘肽的内容介绍

  谷胱甘肽是一种作用广泛的生理因子,它是由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成的一种三肽,广泛分布于机体各器官内,在维持细胞生理功能方面起着重要的作用。本品活性成分为还原型谷胱甘肽,可参与体内三羧酸循环,激活各种酶,对不稳定的眼晶状体蛋白质巯基有抑制作用,从而抑制白内障的发展,抑制角膜及视网膜病变,在角膜

关于外膜的研究内容介绍

  研究发现血管外膜参与了AS的发生发展,但具体机制尚不清楚。针对此,我们采用胶原酶消化+机械分离的方法建立了外膜损伤动物模型,采用HE染色观察外膜损伤血管的形态变化,实时定量荧光PCR技术检测外膜损伤后血管组织氧化酶NADPH亚单位p22phox、抗氧化酶HO-1、ROS敏感基因MCP-1及PDG

关于胆汁形成的内容介绍

  新合成及再循环的胆汁酸被分泌至胆管以防止肝内高浓度梯度的胆汁淤积。胆汁酸的主动运输是调节胆汁酸形成及流动的一个重要因素。胆汁酸的分泌也高度影响着胆固醇、磷脂、胆红素分泌入胆汁。胆汁酸主动运输所产生的渗透压导致水和电解质分泌入胆管增加,从而使胆汁流过胆管的量增加。

关于肝囊肿的内容介绍

  肝囊肿并不是肿瘤,但为方便起见常与良性肿瘤一起讨论。腹部超声或CT扫描检查时偶然可发现肝脏的孤立性囊肿,没有临床意义。但罕见的先天性多囊肝可引起进行性肝肿大(有时巨大),而且表面凹凸不平,大部分发生于成年人。然而肝功能正常,也不出现门脉高压。相反,先天性肝纤维化则表现为微胆管囊性增生,肝纤维化和

关于干细胞的内容介绍

  干细胞是具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞,是生命的起源细胞,是形成人体各种组织器官的原始细胞。干细胞技术是生物治疗的前沿技术,称之为再生医学。干细胞是具有自我复制和多向分化的原始细胞,是机体的起源细胞,是形成人体各种组织器官的原始细胞。  干细胞是一类具有自我更新能力的多潜能细胞,在一定条件

关于食管疾病的内容介绍

  (1)反流性食管炎:由于食管下端括约肌松弛,酸性胃液反流,引起食管炎症、痉挛,表现为胸骨后或中上腹部烧灼性痛,有时可向背部放射而疑似心绞痛。但本病常于餐后平卧时发生,服抗酸药可使之缓解。  (2)食管裂孔疝:常伴胃酸反流,其症状类似食管炎,常于饱餐后弯腰或平卧时发作,胃肠造影可明确诊断。  (3

关于冠心病的内容介绍

  冠心病是一种由冠状动脉器质性(动脉粥样硬化或动力性血管痉挛)狭窄或阻塞引起的心肌缺血缺氧(心绞痛)或心肌坏死(心肌梗塞)的心脏病,亦称缺血性心脏病。平时说的冠心病多数是动脉器质性狭窄或阻塞引起的,又称冠状动脉粥样硬化性心脏病。其冠状动脉狭窄多系脂肪物质沿血管内壁堆积所致,这一过程称为动脉硬化。动

关于椎间盘突出的内容介绍

  椎间盘突出可以发生在任何一个椎间盘,但无论在颈椎、胸椎和腰椎都是以其下部脊椎的椎间盘突出为多见。各部脊椎椎间盘突出的发生率以腰椎间盘突出为最多,约占椎间盘突出的85%,其次为颈椎间盘突出,约占15%,胸椎间盘虽有12个,但发生椎间盘突出的却很少,Patterson等(1978)统计仅占0.15~

关于常见肝病的内容介绍

  遗传性血色病主要在欧洲白种人发病率高,其他人种少见。该病是常染色体隐性遗传性疾病,多数病例有HFE基因突变。突变有两种,主要是C282Y错义突变,其次为H63D突变。发病是由于HFE基因突变造成细胞转铁功能障碍,使铁负荷加重在脏器沉积引起疾病。有静脉切开放血法治疗该病即简单又有效,故很适宜对人群

关于低钠血症的诊断内容介绍

  1.确定是否真正有低钠血症  低钠血症的患者需测定血渗透压,若渗透压正常,则可能为严重高脂血症或少见的异常高蛋白血症所致的假性低钠血症,渗透压增高则为高渗性低钠血症。  2.估计细胞外液容量状况  容量低者的低钠血症主要由体液绝对或相对不足所致,血压偏低或下降、皮肤弹性差以及实验室检查示血尿素氮

关于核酸疫苗的内容介绍

  核酸疫苗(nucleic acid vaccine),也称基因疫苗(genetic vaccine),是指将含有编码的蛋白基因序列的质粒载体,经肌肉注射或微弹轰击等方法导入宿主体内,通过宿主细胞表达抗原蛋白,诱导宿主细胞产生对该抗原蛋白的免疫应答,以达到预防和治疗疾病的目的。  核酸疫苗是利用现