随机引物的概念和用途

随机引物是指当特定mRNA由于含有使逆转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时,可采用随机六聚体这一不特异的引物来拷贝全长mRNA。用此种方法时,体系中所有RNA分子全部充当了cDNA第一链模板,PCR引物在扩增过程中所需要的特异性通常用此引物合成的cDNA。......阅读全文

随机引物的概念和用途

随机引物是指当特定mRNA由于含有使逆转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时,可采用随机六聚体这一不特异的引物来拷贝全长mRNA。用此种方法时,体系中所有RNA分子全部充当了cDNA第一链模板,PCR引物在扩增过程中所需要的特异性通常用此引物合成的cDNA。

随机引物和oligodt的区别

一般来讲,在做反转录时选用引物Oligo dt与选用随机引物Random 9mers是有差别的:1、Random 9mers : 适用于具有HAIRPIN构造的所有RNA(rRNA、mRNA及tRNA)的反转录反应。并且合成的cDNA,任何特异型Primer Pair都可以用于PCR反应。2、Oli

随机引物法

此法系可用于从低熔点琼脂糖凝胶中回收 DNA 的放射性标记 ( Feinberg 和 Vogelstein 1983,1984)。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理此法系可用于从低熔点琼脂糖凝胶中回收 DNA 的放射性标记 ( Feinberg 和 Vogelstein 1

通用引物和随机引物是一个意思吗

不是一回事。随机引物:我们在不知道研究目标任何信息情况下,利用合成好了的任意序列的引物(可以买得到),可能扩增出来的产物条带数目不定;随机引物可能会在全基因组范围内有结合位点。通用引物:一般是指某基因外围保守序列。虽然这个基因可能是序列多变的,(如同功酶),但两侧翼序列则是保守的。利用俩侧翼保守序列

快速了解反转录引物随机引物

  随机引物是指当特定mRNA由于含有使逆转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时,可采用随机六聚体这一非特异的引物来拷贝全长mRNA。  1.特异性引物一般在增低丰度目的基因才选择使用,用得比较少。一般都推荐用Oligo(dT)或随机引物代替基因特异性引物。由于rna的二级结构破坏不完全,导致特异性

随机引物法标记-DNA

            实验方法原理 利用寡核苷酸作引物,DNA 聚合酶可沿单链模板起始 DNA 的合成(Gotilian 1969)。如果寡核苷酸的序列不均一,它们就可在模板的多位点上与模板杂交。因此模板上每一核苷酸(5' 端的核苷酸除外)的互补物将以同样

随机引物法标记-DNA

实验方法原理 利用寡核苷酸作引物,DNA 聚合酶可沿单链模板起始 DNA 的合成(Gotilian 1969)。如果寡核苷酸的序列不均一,它们就可在模板的多位点上与模板杂交。因此模板上每一核苷酸(5' 端的核苷酸除外)的互补物将以同样的频率掺入产物。实验材料 大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ Kl

随机引物法标记探针

实验概要本实验探针标记采用TAKARA公司的随机引物标记试剂盒Ver.2。实验步骤1.于1.5ml离心管中加入5μl H2O,2μl引物(N6),5μl DNA(0.1μg-1μg)。2.充分混匀,98°C 3分钟。3.离心1秒钟,将离心管盖上的汽化水甩下。4.加入2.5μl dNTPs(各2.5m

随机引物法标记-DNA

利用寡核苷酸作引物,DNA 聚合酶可沿单链模板起始 DNA 的合成(Gotilian 1969)。如果寡核苷酸的序列不均一,它们就可在模板的多位点上与模板杂交。因此模板上每一核苷酸(5' 端的核苷酸除外)的互补物将以同样的频率掺入产物。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法

通用引物的概念和作用

通用引物是一般和载体多克隆位点两旁的序列匹配,或者是与载体里面的一些启动、终止元件匹配。这样不管载体插入什么DNA片段,都可以用通用引物扩出来。通用引物可以用来测序,但是只是“通用”,也不是万能的。

PCR中正向引物和反向引物的概念和具体作用

正向引物和反向引物是相对的,通常以一个双链DNA(上面的那条链)的上游结合部位称为正向引物,是从左到右的方向,也就是5-3的方向,而下面那条互补链的下游结合部位称为反向引物。其方向是从右到左的,因为下面的链的方面从左到右是3-5,从右到左就是5-3了,PCR的扩增的确是一条引物就可以扩增了。反向引物

随机引物标记的方法原理介绍

中文名称随机引物标记英文名称random primer labeling定  义在克列诺(Klenow)酶催化下利用随机引物引导放射性或荧光等标记的脱氧核苷三磷酸(dNTP)参入合成DNA新链的一种能够得到高比度标记的DNA探针的方法。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

关于引物序列碱基随机分布的介绍

  引物序列在模板内应当没有相似性较高,尤其是3’端相似性较高的序列,否则容易导致错误引发(False priming)。降低引物与模板相似性的一种方法是,引物中四种碱基的分布最好是随机的,不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。尤其3′端不应超过3个连续的G或C,因为这样会使引物在GC富集序列区错误引发。

分子杂交技术随机引物合成法

  随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大小、产量、比活性依赖于反应中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,产物平均长度为400-600个核苷酸。利用随机引物进行反应的优点是:(1)Klenow片段没有5'→3'外切

随机引物与oligodT有哪些区别

一般来讲,在做反转录时选用引物Oligo dt与选用随机引物Random 9mers是有差别的:1、Random 9mers : 适用于具有HAIRPIN构造的所有RNA(rRNA、mRNA及tRNA)的反转录反应。并且合成的cDNA,任何特异型Primer Pair都可以用于PCR反应。2、Oli

分子遗传学词汇随机引物

中文名称:随机引物外文名称:random primer定义:随机引物是指当特定mRNA由于含有使逆转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时,可采用随机六聚体这一非特异的引物来拷贝全长mRNA。

反向引物的概念

反向引物(下游引物)是沿着正链进行延长的。体外扩增DNA,双螺旋是部分或完全打开的,不存在冈崎片段,也不会一段段延长,理论上正反引物都是不间断延长的,和体内DNA自我复制是有区别的。

简并引物的概念

简并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基序列可能性引物的混合物。PCR为了增加特异性,可以参考密码子使用表,根据不同生物的碱基使用偏好,减少简并性。简并度越低,产物特异性越强,设计引物时应尽量选择简并性小的氨基酸,并避免引物3’末端简并。

正向引物的概念

中文名称正向引物英文名称forward primer定  义处于DNA双链上游的引物。如用于测序,则从5′向3′方向读出DNA正链的序列。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

引物修补的概念

中文名称引物修补英文名称primer repair定  义当DNA模板受损时,可根据其损伤情况,以一套或几套引物借助核酸聚合酶的作用合成新的互补核酸链,以修复损伤形成的错误序列的方法。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

引物延伸的概念

中文名称引物延伸英文名称primer extension定  义从与模板(RNA或DNA)结合的引物3′-OH端开始,在核酸聚合酶的作用下,按照碱基配对的原则,逐个连上核苷酸,由5′→3′方向合成与模板互补链的过程。该反应可用于聚合酶链反应、单核苷酸多态性检测等。应用学科生物化学与分子生物学(一级学

酶原的概念和用途

有些酶在细胞内合成或初级释放时只是酶的无活性前体,必须在一定的条件下,这些酶的前体水解开一个或几个特定的肽键,致使构象发生改变,表现出酶的活性。这种无活性酶的前体称作酶原。某些酶在细胞内合成或初分泌时只是酶的无活性前体,此前体物质称为酶原(zymogen),使酶原转变为有活性酶的作用称为酶原激活(z

随机引物法介绍DNA探针的标记方法

变性的探针溶液加入6个核苷酸的随机DNA小片段,作为引物,当后者与单链DNA多个部位互补结合后,按碱基互补原则不断在其3'-OH端添加同位素标记的单核苷酸,这样也可以获得放射性比活性很高的DNA探针。

双链DNA探针随机引物合成法

  随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大小、产量、比活性依赖于反应中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,产物平均长度为400-600个核苷酸。利用随机引物进行反应的优点是:(1)Klenow片段没有5'→3'外切

随机引物的PCR标记的相关内容

  所用引物的核苷酸序列是随机的,其扩增的 DNA 区域事先未知。随机引物PCR扩增的 DNA 区段产生多态性的分子基础是模板 DNA 扩增区段上引物结合位点的碱基序列的突变,不同来源的基因组在该区段上表现为扩增产物有无差异或扩增片段大小的差异。随机引物PCR标记表现为显性或共显性。  ①随机扩增多

巢式引物的概念

中文名称巢式引物英文名称nested primer定  义为巢式聚合酶链反应所设计的引物,第二组引物是在第一组引物扩增得到的产物序列范围内设计的。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

引物步移的概念

中文名称引物步移英文名称primer walking定  义一种长链DNA测序的策略。根据已测出的序列结构设计测序引物,按第一轮测序得出的新序列,再设计引物进行第二轮测序,如此重复,直至获得全序列。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

常用DAN探针制备的方法介绍随机引物标记

随机引物标记(random primer labeling)是利用单链 DNA 与六核苷酸(hexamer)退火结合,以六核苷酸为引物,加入4种 dNTP,其中1种标有同位素或生物素,用 Klenow 片段催化合成带有标记的互补 DNA 链,标记率高而且不受琼脂糖影响。该法不适于标记 RNA。Fei

分子杂交技术随机引物合成法操作步骤

  (1) 200ng双链DNA(1μl)和7.5ng随机引物(1μl)混合后置于eppendorf管内,水浴煮沸5分钟后,立即置于冰浴中1分钟。  (2) 与此同时,尽快在一置于冰浴中的0.5ml eppendorf管内混合下列化合物:  20mmol/L DTT 1μl  未标记的dNTP溶液

随机引物法(利用随机寡核苷酸延伸进行DNA的放射标记)

            实验方法原理 此法系可用于从低熔点琼脂糖凝胶中回收 DNA 的放射性标记 ( Feinberg 和 Vogelstein 1983,1984)。 实验材料