内参基因拷贝数正常范围

基因组DNA拷贝数变化在许多人类疾病如肿瘤、遗传性疾病的发生发展中起重要作用,也是这些疾病的细胞遗传学表现。染色体显带已被运用了几十年,具有其高度的可靠性并成为染色体分析的金标准,但其分辨率低(约为5~10Mb),需要中期细胞,操作费时。......阅读全文

什么是内参,内参的作用是什么

内参就是取在一般细胞当中表达量较为稳定的基因,你的目的基因要与其进行比较。因为你每次的样品不一定一样,所以必须要有内参进行校正。要是内参没有起峰,那这个数据基本没用。

pcr内参大小

初次做PCR,将反转录RNA浓度统一调整到900ng(20μl体系)后, 即45ng/μl。然后按照程序进行荧光定量PCR,但是在实际中,内参基因(β-actin)的CT值范围从16-21不等。主要疑问有两个,第一,内参CT值范围多大合适,是一致才可靠吗?第二,目的基因CT值,在实际测定中空白的CT

pcr内参大小

初次做PCR,将反转录RNA浓度统一调整到900ng(20μl体系)后, 即45ng/μl。然后按照程序进行荧光定量PCR,但是在实际中,内参基因(β-actin)的CT值范围从16-21不等。主要疑问有两个,第一,内参CT值范围多大合适,是一致才可靠吗?第二,目的基因CT值,在实际测定中空白的CT

什么是内参基因

这个概念一般是用在定量PCR中。定量PCR是要检测某个基因的表达,降低或者提高,但是当你得出结果以后,你并不知道是它本身的表达降低/提高了,还是你操作过程中造成的误差(比如提RNA时的损失),所以这个时候需要同时检测另外的基因作为参照。这个基因就是内参基因,这类基因是生物体或者细胞中稳定表达的基因,

核内参PCNA抗体用于细胞核内参的PCNA单抗

增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen简称PCNA)由Miyachi等于1978年在 SLE(系统性红斑狼疮)患者的血清中首次发现并命名,因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名。PCNA是一种分子量为36KD的蛋白质,在细胞核内合成,并存在于

做定量pcr时内参GAPDH变化了,是不是要换个内参

可以换一个。其实很多药物影响糖代谢,会改变GAPDH。建议试试PPIA(肽基脯氨酸异构酶),它与蛋白质表达有关,含量比较稳定,除静息细胞外基本不变。

目的基因的Ct值小于内参基因,这个内参基因还能用吗

如何通过荧光定量目的基因和GAPDH计算相对表达量内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH, actin。或者18s rRNA也可以。如果内参表达量一致,说明你PCR的上样量一致,样本的质量也一致。如果出入很大,说明你的样本的浓度或者是质量有问题。测到的目的基

目的基因的Ct值小于内参基因,这个内参基因还能用吗

如何通过荧光定量目的基因和GAPDH计算相对表达量内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH, actin。或者18s rRNA也可以。如果内参表达量一致,说明你PCR的上样量一致,样本的质量也一致。如果出入很大,说明你的样本的浓度或者是质量有问题。测到的目的基

进口内参抗体——在WB实验中为什么需要使用内参抗体?

要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。虽然,顺利的时候Western Blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟,作为一种有活性的生物大分子

进口内参抗体:在WB实验中为什么需要使用内参抗体?

要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。虽然,顺利的时候Western Blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟,作为一种有活性的生物大分子,抗

植物内参抗体该怎么选?

  先来说说为什么要用内参抗体?内参抗体的真的是必要的吗?  我举个例子,印度人和韩国人谁更富有?那还用说,当然是韩国人富有。  可是分明印度的GDP更高,为什么说韩国人更富有呢?  那怎样实现呢,如果我们能数一数细胞,不同的泳道上同样数量的细胞是最好的,可是这实现不了。这时候我们就需要一个大致能代

定量Western-Blot指南:内参质控

上期小编为大家介绍了以单一看家蛋白作为定量Western Blot内参蛋白的分析方法,这次咱不得不说说以全蛋白为内参的分析方法。 期刊JBC(The Journal of Biological Chemistry)在Western Blot数据要求中指出,对于半定量蛋白表达的实验,最佳的内参为全蛋白

QPCR内参太高,什么原因

提取组织RNA反转录后做Q-PCR,选18S做内参基因。以前做一般都10个循环左右,最近这一批组织却22个循环。溶解曲线也是好的,反转录体系也没有问题(用以往的RNA同时反转录做Q-PCR,18S的CT值还是10左右)。提取RNA好像也没有问题。我是分离了脂肪组织中的成熟脂肪细胞部分,确实不好提RN

血清western-blot怎样选择内参

由于血浆或血清中很难找到一个稳定表达的蛋白,常见的在组织中比较常用的内参蛋白如肌动蛋白,GAPDH等,严格讲并不适合血浆或血清;可以考虑用立春红染色 或考染做loading control(这种方法在不少文献中都有报道,是大家认可的)Blood上有些文章 用的是立春红染色做control

关于PCR内参基因选择策略

关于内参基因的选择很多初级的实验人员很少会去思考这个问题,因为摆在面前的只有两种选择,β-actin和GAPDH,甚至在很多人长期的观念中对于内参的认知也仅仅停留在是一个表达量相对较高较稳定的看家基因,对于分子层面相对表达量的一个重要参照而已,至于为什么要选这两种,还有没有其他的内参,人们的回答往往

关于PCR内参基因选择策略

   关于内参基因的选择很多初级的实验人员很少会去思考这个问题,因为摆在面前的只有两种选择,β-actin和GAPDH,甚至在很多人长期的观念中对于内参的认知也仅仅停留在是一个表达量相对较高较稳定的看家基因,对于分子层面相对表达量的一个重要参照而已,至于为什么要选这两种,还有没有其他

常用内参抗体和标签抗体

Anti-β-Tubulin,Anti-β-Actin,Anti-GAPDH,Anti-GFP Tag,Anti-RFP Tag 等Epitope Biotech Inc. 公司定制生产高品质的对特定表位有特异性的小鼠单克隆抗体,与其他公司生产的同类产品相比,具有最高的灵敏度和最高的特异性,并且性价

定量Western-Blot指南:内参质控

  上期小编为大家介绍了以单一看家蛋白作为定量Western Blot内参蛋白的分析方法,这次咱不得不说说以全蛋白为内参的分析方法。   期刊JBC(The Journal of Biological Chemistry)在Western Blot数据要求中指出,对于半定量蛋白表达的实验,最佳

做RTPCR内参的作用

你说的应该是real time PCR吧,注意RT其实是逆转录reverse transcription的缩写,和real time一定要分开来。常说的qPCR,qRT-PCR,都是通过实时(real time)的方法,测定样品中某个模版的起始量ct值但是呢,由于之前RNA提取、反转等步骤,各个步骤

怎么选择适合的GAPDH内参抗体?

在Western Bloting实验中,在遇到总蛋白浓度测定不准确时候,或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作存在误差;这些误差可以通过测定每个样品中实际转到膜上的内参,比如内参GAPDH的含量来进行校正。  GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kD

核酸采样没有内参是啥意思

用来说明试剂是有效的。内参就是用来说明试剂是有效的。所谓“内参”,就是在核酸检测试剂盒中引入一个标志物,检测时根据该标志物的数值来判断采样是否合格。内参是样本中稳定表达的内源性物质,能反应样本本身的内源生物的差异。

PCR实验中内参基因的作用

1. 判断样品提取是否成功。假如你提取了总RNA然后再做逆转录得到cDNA,然后再去跑PCR发现没有结果,是不是表示样品中没有你的目的基因呢?答案是:不一定。要根据使用同一模板跑出的内参基因的结果才可判断。内参基因的CT在一个合理范围(比如20左右)的前提下,才能说明样品制备没问题,在这个前提下,做

内参基因拷贝数正常范围

基因组DNA拷贝数变化在许多人类疾病如肿瘤、遗传性疾病的发生发展中起重要作用,也是这些疾病的细胞遗传学表现。染色体显带已被运用了几十年,具有其高度的可靠性并成为染色体分析的金标准,但其分辨率低(约为5~10Mb),需要中期细胞,操作费时。

如何挑选合适的βActin内参抗体?

如何选择合适的β-Actin抗体? 现在市场上对于内参抗体选择是比较多,但是也需要遵循一定的原则,那怎么去找到适合自己实验的β-Actin抗体呢?首先,我们需要考虑目的蛋白的大小,我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上,因此你需要根据你目的检测蛋白的分子量来选择合适的内参,由于β-

Western-Blot内参的选择不容忽视

要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然,顺利的时候Western Blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――

定量Western-Blot内参质控的掌握技巧

 Western Blot是生物修炼的一大实验,现在不做定量Western Blot,都不敢自诩学霸的了,暗暗擦汗的有没有?在讨论如何从Western Blot中获得定量数据之前,先定义一下我们所说的“定量”是什么意思是非常有用的,何为定量,必须符合下列准则: ♦ 使用一个定义的过程进行检测,即We

你的-WB-内参选对了么?

你的 WB 内参选对了么? 关键词: 科研 WB 内参 2019-08-14 17:00 来源:CST 点击次数:19     要想底气十足地秀

western内参多条带,是什么原因

western内参多条带可能的原因有:抗体浓度过高;降低一抗、二抗的浓度。一抗的特异性不足;使用单克隆抗体。二抗的非特异性结合,不加一抗,其他操作不变,即可检测出二抗的非特异性的条带是否来自二抗的非特异性结合;此时需要重新选择二抗。内参发生了降解,降解产物成为了一抗或二抗的新的抗原,尤其是在一抗或二

常用的内参基因及其使用范围

内参即是内部参照,它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物 你可以去生物帮那里了解这方面的信息,那儿技术文档、视频资源丰富,我很喜欢到那里找想要的东西,而且还有很多软件可以下载,并且有软件的教材。有时间可以去看看。 包括GAPDH 、β- actin(BETA-

荧光定量PCR实验中的内参基因

通常它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。内参基因通常是持家基因(house-keeping gene)因为其表达水平受环境因素影响较小,而且在个体各个生长阶段的几乎全部组织中持续表达变化很小。常用的内参基因包括GAPDH、β-actin(BETA-acti