蛋白质N端测序服务Edman法
服务简介几乎所有的蛋白质合成都起始于N-端，蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。例如N-端序列影响蛋白质的半衰期，同时关联着蛋白亚细胞器定位等，这些与蛋白的功能和稳定性息息相关，对蛋白进行N-端测序分析，有利于帮助分析蛋白质的高级结构，揭示蛋白质的生物学功能。对蛋白N端测序主要分类两大类，其一为非质谱技术，其二为质谱技术。各自都有其使用的长处和制约之处。蛋白质和多肽N-端测序技术是以Edman化学降解法为基础的。Edman化学降解是测定蛋白质一级结构的方法主要是从蛋白质或多肽氨基酸末端进行分析，其基本原理是包括通过异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的N-端残基的偶联，苯氨基硫甲酰酞（PTC-肽）环化裂解，和噻唑呤酮苯氨（ATZ）转化为苯异硫尿氨基酸（PTH-氨基酸）三个主要的化学步骤，每个循环从蛋白质与多肽裂解一个氨基酸残基，同时暴露出新的游离的氨基酸进行下一个Edman降解，而后通过转移的PTH-氨基酸鉴......阅读全文
质谱检测法与蛋白质分析（一）
质谱分析法是蛋白质研究领域和生物大分子研究领域中最重要的分析技术。由于我们对蛋白质鉴定、定量和分析的要求越来越高，希望检测技术的灵敏度也越来越高，同时能够对更为复杂的样品进行分析处理，因此推动了质谱检测技术的发展，出现了一大批新兴的质谱分析方法和仪器。本文将对近几年质谱技术的发展以及质谱技术在蛋
质谱检测法与蛋白质分析（二）
传统的和最新的蛋白质组学研究策略虽然到目前为止，还没有一种蛋白质组学研究策略能够对某个蛋白质组进行常规的、完整的分析，但是现在的技术已经非常强大，我们相信，很快就能进行全蛋白质组学研究了。而且，对某个亚蛋白质组（比如某个细胞器或亚细胞结构的蛋白质组）进行研究早就已经不是什么难题了，这已经成为了一种常
蛋白质印迹法所需试剂有哪些？
1、SDS-PAGE试剂：见电泳实验。2、匀浆缓冲液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml；10%SDS 6.0ml；β-巯基乙醇 0.2ml；ddH2O 2.8ml。3、转膜缓冲液：甘氨酸 2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至1000
TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质（二）
DNA的分离准备试剂：乙醇0.1M柠檬酸钠（含10%乙醇）、 75%乙醇、8mM NaOH操作步骤：1. 样品加氯仿分层后，移去上层水相，用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。每使用1mlTRIzol加0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3分钟，2～8℃不超过2000×g离心5分钟。2. 移去上清，（如需
蛋白质印迹法的起源和应用
蛋白质印迹法是由瑞士米歇尔弗雷德里希生物研究所(Friedrich Miescher Institute)的Harry Towbin在1979年提出的。在尼尔·伯奈特(Neal Burnette)于1981年所著的《分析生物化学》(Analytical Biochemistry)中首次被称为West
TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质4
注意事项：1. DNA在中间层和有机相中时可在2～8℃保存过夜。2.DNA沉淀在75%乙醇中2～8℃可保存几个月。3.DNA在8mM NaOH溶液中4℃可放置过夜，如长期保存需用HEPES调节pH至7～8并且加EDTA至1mM，可置于4℃或-20℃长期保存。常见问题分析：得率低：A.样品匀浆和裂解的
蛋白质印迹法的研究与应用
蛋白质印迹法是由瑞士米歇尔弗雷德里希生物研究所（Friedrich Miescher Institute）的Harry Towbin在1979年提出的。在尼尔·伯奈特（Neal Burnette）于1981年所著的《分析生物化学》（Analytical Biochemistry）中首次被称为West
蛋白质定量检测方法——双缩脲法
双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时（多肽），试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。鉴定反应蛋
凝胶层析法分离蛋白质操作方法
本实验通过SephadexG50层析柱，以蒸馏水为洗脱剂，分离血红蛋白(红色，分子量约64500)与硫酸铜(蓝色，分子量249.5)的混合物，从颜色的不同可观察到血红蛋白洗脱快，硫酸铜洗脱较慢。 三．材料 1．仪器 层析柱(直径0.8-1.5cm，长10-20cm)；吸管；玻璃棒；小烧杯；2
胶体过滤法（Gel－filtration）蛋白质纯化
一、仪器设备：1.色析管柱（Pharmacia C column, 1.6×100 cm）、铁架、铁夹及水平仪；2.分划收集器（fraction collector, 需准备干净试管约100 支）；3.浓缩用离心机（低速5,000 rpm）；4.浓缩用离心管Centriprep-30 （Amicon
蛋白质含量测定实验——folin—酚试剂法
蛋白质含量测定实验可以用于：（1）测定蛋白质浓度；（2）检测所提取的蛋白质含量。实验方法原理这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（现在已可以订购），近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即f
蛋白质印迹法的用途及原理
蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
质谱检测法与蛋白质分析（三）
Protein(s)：待测蛋白质样品;Enz. Digestion：酶解;Pep. Mixture：裂解产物混合物; MS Analysis：质谱检测分析;DB Search：数据库比对搜索;Identities：鉴定; Prot.DB ：蛋白质数据库;Proteom
细胞破碎和蛋白质溶解实验_超声法
实验方法原理输入高能超声波可以破碎细胞，其机理可能与强声波作用溶液时，气泡产生、长大和破碎的空化现象有关。空化现象引起的冲击波和剪切力使细胞裂解。超声破碎的效率取决于声频、声能、处理时间、细胞浓度及细胞类型等。实验材料细胞混悬液试剂、试剂盒缓冲液仪器、耗材超声波细胞裂解仪实验步骤1. 清洗后的组织用
细胞破碎和蛋白质溶解实验_研磨法
实验方法原理研磨是破碎单一细胞的有效措施。借助研磨中磨料和细胞间的剪切及碰撞作用破碎细胞。常 用的磨料为沙子、氧化铝在研钵内样品与磨料被研磨成厚糊状。一次破碎的细胞量湿重可达 30 g。实验材料细菌或酵母或一些植物组织试剂、试剂盒石英砂或氧化铝缓冲液仪器、耗材高速珠磨匀浆器实验步骤1. 加 20 g
关于蛋白质印迹法的分类介绍
Western Blot显色的方法主要有以下几种： 1、放射自显影 2、底物化学发光ECL 3、底物荧光ECF 4、底物DAB呈色 现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简
蛋白质浓度测定（双缩脲法）实验
实验原理测定蛋白质的定量方法有很多，目前常用的有凯氏定氮法；比色法主要包括双缩脲法、Folin-酚试剂法及 染料结合法；紫外分光光度法等双缩脲(Biuret)法：在碱性溶液中，双缩脲(H2N—CO—NH—CO—NH2)与二价铜离子作用形成紫红色的络合物，这一反应称双缩脲反应。凡分子中含二个或二个以上
蛋白质印迹法的目的和原理
蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
蛋白质印迹法的概念和原理
蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
UV法蛋白质定量分析简述
这种方法是在280 nm波长，直接测试蛋白。选择 Warburg公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。 蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质，一般要消除 320 nm的“背景”信息，设定此功能“开”
蛋白质的测定凯氏定氮法
1)原理样品与硫酸和催化剂一同加热后消化,使蛋白质分解,其中的碳和氢分别被氧化成二氧化碳和水蒸气逸出,而有机氮转化成氨后与硫酸结合生成硫酸铵,然后在碱性条件下蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再用硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即得蛋白质含量。以甘氨酸为例,该过程的反应方程式如下:消化
翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验
蛋白质翻译后修饰 (PTM) 在细胞生物调节中发挥着基本作用。PTM 是 mRNA 翻译后蛋白质的酶促共价化学修饰。蛋白质化学修饰非常重要，因为它们会潜在地改变蛋白质的物理或化学性质、组成、活性、细胞定位或稳定性。实际上，在氨基酸或蛋白质的 N 端或 C 端加入或移除化学基团会导致大部分蛋白质发生变
世界粮食日|让中国人端牢端稳中国饭碗
10月16日是世界粮食日。金秋时节，稻谷飘香。从我国东北到西南，从华北和黄淮海地区到长江中下游地区，秋粮收获一派繁忙景象。 党的十八大以来，我国粮食和重要农产品供给稳定，保障国家粮食安全的基础愈发扎实。我国粮食产量连续7年稳定在1.3万亿斤以上，做到了谷物基本自给、口粮绝对安全。 在丰收的田
气管节段切除端端吻合术麻醉处理病例分析
患者，男，53岁，160cm，60kg，ASAⅡ级，因“呼吸困难半年余，气促加重”入院。患者于9个月前因全身多处火焰烧伤后出现气管狭窄，曾行气管切开术。3个月前在外院行颈部瘢痕松解术。患者可平卧，RR18次/分，HR85次/分，BP132/88mmHg。头颈部、上肢、胸背部烧伤后植皮状态，头颈活动度
端－粒－长－度－和－端－粒－酶－活－性－的－分－析
实验步骤 基 本 方 案 I Southern 杂 交 检 测 传 统 凝 胶 电 泳 中 末 端 端 粒 D N A 限制性片段(TRF) 的端粒长度材 料基 因 组 D N A (试剂盒分离）和 限 制 性 内 切 核 酸 酶 和 反 应 缓 冲 液琼 脂 糖（D N A 级）1 〇 X T B
蛋白质分析法/免疫法检测金属硫蛋白的介绍
此类方法主要是通过蛋白质含量测定来计算金属硫蛋白浓度，免疫法是最主要的方法。它尤其适合于微量检测，具有灵敏、特异的特点，灵敏度在pg/ml级，对存在体液中含量甚微的MT具有较好的检测效果。在近些年，先后建立了Western Blotting法、放射性免疫检测法（RIA）和酶联免疫吸附法（ELIS
蛋白质分析法/免疫法检测金属硫蛋白的介绍
此类方法主要是通过蛋白质含量测定来计算MT浓度，免疫法是最主要的方法。它尤其适合于微量检测，具有灵敏、特异的特点，灵敏度在pg/ml级，对存在体液中含量甚微的MT具有较好的检测效果。在近些年，先后建立了Western Blotting法、放射性免疫检测法（RIA）和酶联免疫吸附法（ELISA）。
蛋白质测定仪法与凯氏定氮法的对比
采用凯氏定氮法检测蛋白质，此法由人工操作，比较费时，检测结果的准确性容易受人为因素影响，现国际上普遍采用蛋白质测定仪检测蛋白质。同凯氏法相比蛋白质测定仪具有自动、省时、准确的优点。凯氏定氮法与蛋白质测定仪法的原理一样，不同在处在于前者使用经典凯氏定氮烧瓶及定氮蒸馏装置进行样品消化和蒸馏，手工滴定计算
滤胶过滤层析法蛋白质的纯化实验_凝胶过滤层析法
凝胶过滤层析是一项重要的蛋白质纯化技术，又称为大小排阻、凝胶排阻、分子筛或凝胶过滤层析这种方法利用分级分离，而不需要蛋白质的化学结合，这就明显降低了因不可逆结合所致的蛋白质损失和失活。另外，可利用此法更换蛋白质的缓冲液或降低缓冲液的离子强度。在蛋白质纯化操作中何时使用凝胶过滤，还不能一概而论，有时纯
以He/Ar为载体的Dumas法测定坚果中的N/蛋白质含量
在以色列进行的考古挖掘中，研究人员发现了证据，表明坚果是78万年前人类饮食的主要组成部分。在沼泽深处发现了七种坚果，还有用来砸开坚果的石器。即使在那时，人类已经意识到坚果的健康益处。事实上，坚果是蛋白质和健康脂肪的极好来源;含量因坚果的种类而异。实验样品：Raw almonds（生杏仁） Expec