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小麦黄化苗总mRNA的提取

[实验原理]RNA是一类极易降解的分子,要得到完整的RNA必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。本实验以小麦为材料,采用异硫氰酸胍—苯酚—氯仿抽提法或CTAB法提取总RNA。异硫氰酸胍是高浓度变性剂,可溶解蛋白质,破坏细胞结构,使蛋白质与核酸分离,失活RNA酶,所以RNA从细胞中释放出来时不被降解。细胞裂解后,除了RNA,还有DNA、蛋白质和细胞碎片,通过酚、氯仿等有机溶剂处理得到纯化、均一的总RNA。mRNA仅占总RNA的1%-5%,由于大多数真核mRNA 3’端具有多聚腺苷酸结构(polyA),因此可采用寡聚(d丁)纤维素亲和层析柱分离出mRNA。[仪器、材料与试剂](一) 仪器和材料紫外线透射仪、移液枪、琼脂糖凝胶电泳系统、小麦黄化苗(二) 试剂4M异硫氰酸胍、2M NaAc(pH 4.8)、4M LiCl、3M NaAc(pH5.0),以上均用0.1%焦碳酸二乙酯(DEPC)......阅读全文

蛋白质组学在植物科学研究中的应用

1 植物群体遗传蛋白质组学 1.l 遗传多样性蛋白质研究基于基因组学的一些遗传标记,如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)、RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)、SSR(Simple Sequen

小麦黄化苗总DNA的提取

实验概要学习和掌握DNA的微量提取法。实验原理小麦黄化苗经液氮研磨,可使细胞壁破裂,加入去污剂(如SDS),可使核蛋白体解析,然后使蛋白和多糖杂质沉淀,DNA进入水相,再用酚、氯仿抽提纯化。本实验采用SDS法,其主要作用是破膜。SDS属阴离子去污剂,要溶解膜蛋白与脂肪,也可解聚核蛋白。SDS在溶液中

赤霉素类物质浓度测定实验

定量测定赤霉素类物质有许多方法:如大麦糊粉层α-淀粉酶诱导形成法,酸模叶片保绿法,小麦黄化苗第一叶片基部切断伸长法,水稻幼苗第二叶叶鞘伸长的“点滴法”等。其中以水稻幼苗法较好。这一方法利用了赤霉素刺激幼嫩植物节间伸长的重要生理特性。在一定浓度范围(0.1-100pp M )内,叶鞘的伸长与浓度成正比

小麦总RNA的提取

实验概要从黄化小麦苗中提取总RNA,可以为cDNA文库的构建做好准备。实验步骤1. 所有容器高温灭菌两次,DEPC高温灭菌,所有的试剂用DEPC配制,高温灭菌。2. 在一灭菌2mL管中加入:5mol/L异硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 称取0.2g小麦黄

小麦总RNA的提取

实验步骤1. 所有容器高温灭菌两次,DEPC高温灭菌,所有的试剂用DEPC配制,高温灭菌。2. 在一灭菌2mL管中加入:5mol/L异硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 称取0.2g小麦黄化苗的叶片,迅速在液氮中研磨成粉末,转入已准备好的离心管中,剧烈震荡。

小麦总RNA的提取方法

实验步骤1. 所有容器高温灭菌两次,DEPC高温灭菌,所有的试剂用DEPC配制,高温灭菌。2. 在一灭菌2mL管中加入:5mol/L异硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 称取0.2g小麦黄化苗的叶片,迅速在液氮中研磨成粉末,转入已准备好的离心管中,剧烈震荡。

农作物营养失调症的诊断与防治

作物营养失调症发生的原因很多,既受到作物本身营养特点的左右,同时也受到土壤、天气等环境的影响。营养失调诊断是通过外形、土 壤分析、植株分析或其它生理生长指标的测定,对植株营养状况进行客观判断,用以指导施肥或改进其它管理措施。本文重点就通过外形诊断来判定农作物营养失调 证,并提出相应的施肥对策(重点介

赤霉素类物质浓度测定实验

实验方法原理:定量测定赤霉素类物质有许多方法:如大麦糊粉层α-淀粉酶诱导形成法,酸模叶片保绿法,小麦黄化苗第一叶片基部切断伸长法,水稻幼苗第二叶叶鞘伸长的“点滴法”等。其中以水稻幼苗法较好。这一方法利用了赤霉素刺激幼嫩植物节间伸长的重要生理特性。在一定浓度范围(0.1-100pp M )内,叶鞘

赤霉素类物质浓度测定实验

实验方法原理 定量测定赤霉素类物质有许多方法:如大麦糊粉层α-淀粉酶诱导形成法,酸模叶片保绿法,小麦黄化苗第一叶片基部切断伸长法,水稻幼苗第二叶叶鞘伸长的“点滴法”等。其中以水稻幼苗法较好。这一方法利用了赤霉素刺激幼嫩植物节间伸长的重要生理特性。在一定浓度范围(0.1-100pp M )内,叶鞘

云序生物环状RNA研究文章汇总

  环状RNA“一站式”服务一直以来是云序生物的主打产品,严格的质控把关、严谨的实验设计、出色的生信分析以及贴心的售后服务造就了多项世界首篇环状RNA研究文章,受到了广大客户的一致好评。迄今为止,云序已经积累了超过10000例环状RNA测序的经验,样本覆盖20多个物种以及50多种疾病,客户发表文章达

中科院Nature子刊解析春化作用分子机制

  来自中科院植物学研究所、中国科学院大学等机构的研究人员证实,在冬小麦中O-GlcNAc介导VER2与TaGRP2相互作用,引起了TaVRN1 mRNA累积。这一研究发现发表在8月5日的《自然通讯》(Nature Communications)杂志上。  中科院植物学研究所的种康(Kang Cho

RACE-PCR克隆基因的几点建议

摘 要:  RACE是一种快速克隆cDNA末端的方法,目前, 该方法被广泛应用于未知碱基序列基因的克隆,尤其是SMART RACE技术更为人们所青睐。本文总结了我们实验室用SMART RACE技术克隆基因的一些心得体会,希望对用RACE方法克隆基因的同行有些帮助。关键词: RACE; RN

RNA介导的基因沉默实验

实验材料 pGEM-T 载体DNA 模板试剂、试剂盒 dNTP 混合物DNA 聚合酶(Sigma) 及配套缓冲液限制酶仪器、耗材 PCR 纯化试剂盒或柱子实验步骤 一、筛选目的基因片段的参数1. 序列( 1 ) 构建一个指定的 RNA 沉默载体首先要进行生物信息学分析。根据目的基因对应的已知 c

RNA介导的基因沉默实验

实验材料pGEM-T 载体DNA 模板试剂、试剂盒dNTP 混合物DNA 聚合酶(Sigma) 及配套缓冲液限制酶仪器、耗材PCR 纯化试剂盒或柱子实验步骤一、筛选目的基因片段的参数1. 序列( 1 ) 构建一个指定的 RNA 沉默载体首先要进行生物信息学分析。根据目的基因对应的已知 cDNA 序列

RNA介导的基因沉默实验

实验材料pGEM-T 载体                                       &nb

小麦黄花叶病有望被精准打击

   小麦黄花叶病近年来在我国的浸染面积逐年扩大,是影响小麦生产的一大难题。山东农业大学植物保护学院教授原雪峰团队发现了一种新型核糖体内部进入位点,揭示了小麦黄花叶病毒基因组RNA1不依赖帽子结构翻译的动态平衡调控机制,为小麦黄花叶病毒病的控制提供了潜在靶标和分子策略。近日,国际期刊《核酸研究》(N

Plant Cell:科学家揭示六倍体小麦杂种优势分子机制

        染色体组多倍化在植物增强长势、适应环境等方面具有重要作用,在弥补杂交后代不育及固化“杂种优势”方面具有独特的价值。近日,中国农业科学院作物科学所毛龙研究员与诺禾致源信息部负责人吴俊、以及他们所带领的团队共同合作,关

cDNA 文库的构建

            实验材料 λ噬菌体臂 大肠杆菌菌株 用于λ噬菌体的包装抽提物 试剂、试剂

转基因植物的分子检测与鉴定方法(二)

1.1.2.2  降落PCRTD-PCR是一种在一个反应管或少数几个反应管中通过一系列退火温度逐渐降低的反应循环来达到最佳扩增目的基因的PCR方案。它通过体系自身的代偿功能弥补以反应体系和并非完美的循环参数所造成的不足。此策略保证了最初形成的引物模板杂交体具最强的特异性。尽管最后一些循环采

从表达谱至海绵机制完美进阶 环状RNA测序加机制研究!

  禽白血病病毒J亚群(ALV-J)属于逆转录病毒属,慢病毒亚科的家族成员,可引起禽类多种肿瘤性疾病,如骨髓细胞瘤、肉瘤、血管瘤、肾肿瘤和成红细胞增多症,以及禽类骨髓白血病,导致受感染鸡的高死亡很率。该分散的ALV-J菌株分布广泛,既能水平传播又能垂直传播,往往造成禽类养殖领域的巨大经济损失。目前我

我国学者发表植物春化作用调控和感知机制的综述

  冬性及二年生植物开花必须经历漫长而寒冷的冬天,这一现象被称为“春化作用”。春化作用是影响植物物候期和地理分布的重要因素,在作物育种中有着至关重要的作用,解析植物感知记忆冬季时长机制有助于作物的分子设计育种。春化作用的分子遗传网络  中国科学院植物研究所种康研究组长期从事植物春化作用机制的研究。近

研究揭示水稻基因组“垃圾DNA”的真相

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研究揭示水稻基因组 “垃圾 DNA” 的真相

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又传喜讯云序客户一次测序两项成果影响因子合计10分!

  感恩有你,一路同行,新年快乐!   感恩有你,一路同行!2019年伊始,云序生物携全体员工对一直以来关心和支持公司发展的广大新老客户致以最诚挚的问候!一元复始,万象更新!转眼间我们迎来了2019年,站在新时代新的历史起点,回望刚刚过去的2018年,不断创新收获硕果丰盈;展望2019,任重道远却

蛋白质(十五)主要研究

主要研究历史在18世纪,安东尼奥·弗朗索瓦(Antoine Fourcroy)和其他一些研究者发现蛋白质是一类独特的生物分子,他们发现用酸处理一些分子能够使其凝结或絮凝。当时他们注意到的例子有来自蛋清、血液、血清白蛋白、纤维素和小麦面筋里的蛋白质。荷兰化学家格利特·马尔德(Gerhardus Joh

倚天屠龙,谁与争锋——且看基因敲除与RNA干扰的关系

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中科院植物所发表植物春化开花机制综述文章

   记者从中国科学院植物研究所获悉,该所研究员、中科院院士种康率领的团队受邀在日前在线出版的国际学术期刊《自然·植物》上发表了综述文章“记忆冬天的春化机制”,囊括了最新的春化作用调控和感知机制,并展望了未来深入研究春化的方向以及在分子设计育种中的应用。  研究人员在文中指出,春化作用的分子与表观遗

环状RNA研究文章汇总(二)

4.世界首篇人胶质瘤环状RNA研究(影响因子:3.0)胶质瘤作为最常见的颅内恶性肿瘤占颅脑肿瘤的40%~50%,电磁辐射等其他环境致癌因素会导致胶质瘤的发生,尽管手术切除、术后放疗、药物化疗等方法可以作为主流的胶质瘤治疗手段,但是多形性胶质母细胞瘤(GBM)的强侵袭、增殖能力仍给病人的治疗造成很大的

基因敲除与RNA干扰的关系

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植物基因转化常用方法-4

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