生化与细胞所揭示MHF复合物发挥生物学功能的分子机制
2月7日，《细胞》子刊《结构》(Structure)报道了中科院上海生科院生化与细胞所丁建平组、周金秋组关于MHF复合物的最新研究成果。 范可尼贫血症(Fanconi anemia，FA)是一种遗传性血液系统疾病，患者除骨髓造血功能障碍导致全血细胞减少外，还伴有多发性先天畸形，并易患多种癌症。范可尼贫血症特征之一为细胞染色体的不稳定性，已有研究结果表明，直接参与DNA损伤修复过程的13个FANC蛋白和两个FAAP蛋白与FA的发生相关。最近新发现两个蛋白MHF1和MHF2所形成的复合物能促进FANCM对DNA的结合，MHF复合物、FANCM以及DNA的结合为下游FANCD2发挥功能，继而完成DNA链内交联损伤修复所必需。此外，研究表明MHF复合物在动粒组装过程中也发挥十分重要的作用。 丁建平组博士生杨荟等人解析了酵母源MHF复合物的晶体结构。结构分析和生化数据表明，MHF1和MHF2都呈现出经典的组蛋白折叠(h......阅读全文
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（3）
12、蛋白降解分泌表达的目标蛋白比胞内蛋白确实容易被降解。可以尝试以下几种办法：1、尽可能降低培养液的pH值减少酶活，酵母生长pH值比较广，4～7都可以试一下；2、多试几种蛋白添加剂，充当酶解底物（比如酵母酸）；3、摸索最适下罐（摇瓶也一样），宁可少表达点也别给降解光了。实在没办法，只好换菌株或做p
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（4）
15、菌体密度：菌体是在BMMY中培养的，可以不用BMMY做对照，在600nm处测OD值，培养基和PBS光吸收都很低，PBS更方便。麦芽浸提液培养酵母（不换液，补料），生长阶段结束后，密度可达到10-12，诱导培养结束后，密度可达到18左右。如果用1体积的BMGY，在生长阶段结束后，换液时，加入1/
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（1）
1、 菌株用GS115表达不出蛋白，换KM71H后，大部分克隆能表达。2、温度： 在28度和室温下诱导表达，表达水平可能都不低。3、pH手册上用6.0，pH提高到6.8，不表达的蛋白可能就表达出来。BMMY的pH7.0-7.5比较合适。国内外做的最好的rHSA，最适pH大概 5-6左右。pH3的时候
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（5）
或者第5步和第6步改为丙酮洗:5.加入200ul冰冷的丙酮，用手指轻弹EP管，洗去管底和管壁残余的TCA。6.15000g,离心10－20分钟,倒掉上清，将EP管倒扣在吸水纸上轻轻控几下，除去残余在管口的液体。样品是酵母细胞超声后离心获得的上清，用Loading buffer溶解蛋白沉淀，始终不
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（2）
如果是用自己配置的培养基，如玉米浸提液、麦芽浸提液、麦麸浸提液等等，可以不用换液，采取添料来维持酵母对培养基的营养需要。用无机盐进行大规模发酵，更省钱。大规模发酵时，甲醇的流加速度增加不要太快。另外使用纯氧并不昂贵，在武汉买个钢瓶600元左右，一瓶纯氧20元。一个批次100h左右估计3－4 瓶氧气。
内源氨基酸和外源氨基酸有什么区别
（1）通过吸收获得的氨基酸是外源性氨基酸。外源性途径：是指参加的凝血因子并非全部存在于血液中，还有外来的凝血因子参与止血。（2）通过体内组织蛋白质降解产生的氨基酸及体内合成的非必需氨基酸是内源性氨基酸。必需氨基酸（essential amino acid）：人体（或其它脊椎动物）必不可少，而机体内又
人源化酵母DNA复制起始位点识别复合物ORC
Nat Comm | 翟元梁/戴碧瓘/梁子宇联合团队揭示人源化酵母DNA复制起始位点识别复合物ORC 真核生物DNA复制起始的调控，是细胞分裂过程中保持基因组稳定性的关键。同时，此调控过程对于人类胚胎发育也尤为重要。复制起始调控的紊乱，会导致发育缺陷，例如Meier-Gorlin侏儒综合症的出
如何区别酵母提取物、酵母浸粉、酵母粉和酵母浸膏？
酵母浸粉的介绍： 酵母浸粉又称酵母提取物，是采用新鲜酵母经酵母自溶、过滤、 浓缩、喷雾干燥而得到的一种浅黄色至类白色 干燥粉末。有酵母自然 香味，易溶于水，水溶 液呈淡黄色。酵母浸粉极具吸湿性，请放阴凉干燥处保存。酵母浸粉当中含有氨基酸类、肽类、水溶性维生素、及酵母多糖、酵母核酸组成的一种
西湖大学发表Nature论文！人源氨基酸转运复合物结构
值得一提的是，该复合物没有对称性，其可见区分子量不到100kDa，从而进一步突破了利用冷冻电镜研究膜蛋白的无对称性样品的分子量下限，拉开了利用冷冻电镜研究为数众多的跨膜转运蛋白结构与工作过程的序幕。 当地时间2019年3月13日，Nature杂志在线发表了题为“Structure of the
西湖大学发表Nature论文！人源氨基酸转运复合物结构
当地时间2019年3月13日，Nature杂志在线发表了题为“Structure of the human LAT1-4F2hc heteromeric amino acid transporter complex”的研究论文，论文首次解析了人源异源多聚体氨基酸转运家族代表成员LAT1-4F2
酵母提取物、酵母浸粉和酵母粉的区别
酵母浸粉的介绍：酵母浸粉又称酵母提取物，是采用新鲜酵母经酵母自溶、过滤、 浓缩、喷雾干燥而得到的一种浅黄色至类白色 干燥粉末。有酵母自然 香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色。酵母浸粉极具吸湿性，请放阴凉干燥处保存。酵母浸粉当中含有氨基酸类、肽类、水溶性维生素、及酵母多糖、酵母核酸组成的一种混合物，酵母浸
酵母培养
Streaking Yeast Stocks (Donis Keller Lab)Very nice protoocol for yeast workLong-Term Storage of Yeast Stocks (Donis Keller Lab)Yeast storage and reviv
酵母转化
· Yeast Transformation (Gietz Lab)LiAc/SS-DNA/PEG Transformation· Yeast Transformation (Breeden Lab)LiAc method· Large-Scale Y
酵母准备
Yeast DNA PreparationYeast Genomic Preparation (Gottschling Lab)Rapid method for yeast genomic DNA isolation Yeast DNA Preparation (rapid glass bead
酵母表达载体的构建与酵母转化
实验概要本实验介绍了酵母表达载体的构建、酵母转化方法及酵母抗逆实验。主要试剂试剂配制：1 .1 M Tris.Cl(pH 7.5)(100 ml)：12.1g Tris碱，加80 ml ddH2O，浓HCl调pH 7.5，定容至100 ml；2. 0.5 M EDTA(pH 8.0) (100 ml
酵母蛋白的优点介绍
酵母是补充优质完全蛋白质的绝佳来源。 1、酵母中含有丰富的蛋白质，高达40%～60%。 2、酵母中的蛋白质的消化率可达96%，净利用率达59%。 3、酵母含有完整的氨基酸群，包括人体必需的8种氨基酸，特别是在谷物蛋白中含量较少的赖氨酸，在酵母中含量较高。此外，酵母中的氨基酸比例接近联合国粮
酵母遗传学方法8：酵母活体染色
酵母活体染色1）核DNA和线粒体DNA1．当细胞培养到约107细胞/ml时，离心（5秒）收集细胞，再悬浮在70％乙醇中。2．固定5分钟或5分钟以上，用水洗2次。3．将细胞悬浮在含有50ng/ml的4，6-二脒基-2苯基吲哚的封固剂中。1mg/ml的4，6-二脒基-2苯基吲哚母液可在－20℃下贮存。4
酵母转化实验
实验材料酵母菌株质粒仪器、耗材YPD 平板SC-ura平板产孢子平板实验步骤展开
酵母的作用
酵母在食品添加剂中作为一种生物膨松剂。发酵是指酵母与糖作用，产生二氧化碳和酒精的过程。烘焙中，酒精受热挥发，而二氧化碳会膨胀．进而起到增大产品体积之效。面团中糖有两个来源：1、根据配方加入的糖。2、小麦淀粉经酶转化而来，此种糖即面粉经酶作用产生的淀粉麦芽糖。酵母是一种微生物，通过产生酶来完成发酵过程
酵母菌
提起酵母菌这个名称，也许有人不太熟悉，但实际上人们几乎天天都在享受着酵母菌的好处。因为我们每天吃的面包和馒头就是有酵母菌的参与制成的；我们喝的啤酒，也离不开酵母菌的贡献，酵母菌是人类实践中应用比较早的一类微生物，我国古代劳动人民就利用酵母菌酿酒；酵母菌的细胞里含有丰富的蛋白质和维生素，所以也可以做
酵母的作用
酵母在食品添加剂中作为一种生物膨松剂。发酵是指酵母与糖作用，产生二氧化碳和酒精的过程。烘焙中，酒精受热挥发，而二氧化碳会膨胀．进而起到增大产品体积之效。面团中糖有两个来源：1、根据配方加入的糖。2、小麦淀粉经酶转化而来，此种糖即面粉经酶作用产生的淀粉麦芽糖。酵母是一种微生物，通过产生酶来完成发酵过程
酵母转化实验
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸锂仪器、耗材 摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤 1. 在开始实验前2天，接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 ml YPD培养基中，于30℃恒温摇床，培养过夜。 2. 转化的前一天晚上，往1 L 无菌烧瓶中加入300 ml YPAD
酵母遗传学方法9：酵母免疫荧光
酵母免疫荧光1）细胞制备1．培养5ml酵母至对数生长早期（106～107细胞/ml）。2．直接加1/10体积的甲醛到培养基里固定细胞（加入的甲醛终浓度为3.7％，标准母液是37％）。3．细胞在甲醛中培养至少1小时。4．离心收集细胞，用0.1mol/L磷酸钾（pH7.5）洗一次。5．把细胞悬浮在1ml
酿酒酵母培养条件实验_酵母培养物的储存
实验方法原理酵母在琼脂或液体培养基中的理想培养温度是30℃，培养皿平板应倒置放入塑料盒中，于孵箱或培养室内进行培养。当孵育时间超过2或3天时，塑料盒可防止平板上的琼脂干裂。当使用液体培养基培养时，要使用旋转式或往复式摇床，至少每分钟200转，以保证充分通气；进行大体积液体培养时使用锥形瓶，培养基为瓶
亚氨基酸是不是氨基酸？
形态类似于氨基酸(amino acid)的分子中不是含有氨基（—NH2），而是含有亚氨基(-NH-)和羧基，这样的的化合物称为亚氨基酸（imino acid)，也叫亚氨酸，比如脯氨酸和羟脯氨酸。
酿酒酵母源Shu复合物在DNA同源重组过程中发挥生物学功能
近日，中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所丁建平研究组的研究成果，以Structural basis for the functional role of the Shu complex in homologous recombination为题，在线发表在《核酸研究》（Nuc
酿酒酵母源Shu复合物在DNA同源重组过程中发挥生物学功能
近日，中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所丁建平研究组的研究成果，以Structural basis for the functional role of the Shu complex in homologous recombination为题，在线发表在《核酸研究》（Nuc
酵母遗传学方法12：酵母菌落PCR方法
酵母菌落PCR方法1．在冰上配制反应混合液：2μl 10×菌落PCR缓冲液1.2μl 25mmol/L MgCl20.4μl 10mmol/L dNTPs10pmol 引物
毕赤酵母表达系统能在酿酒酵母里表达么
不太可能，Invitrogen的商业化毕赤酵母表达系统属于甲醇酵母表达系统，用的是毕赤酵母独有的AOX1启动子，由甲醇诱导；酿酒酵母用的启动子大多用的是GAPDH或Gal启动子等，由葡萄糖和半乳糖诱导。虽然两种菌株有很多基因具有较高的同源性，但不能通用。建议使用毕赤酵母表达系统，酿酒酵母表达量低，诱
什么是氨基酸？氨基酸的结构
氨基酸，是含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物。羧酸碳原子上的氢原子被氨基取代后形成的化合物。