氯化锂沉淀法去除质粒DNA制备物中的小片段核酸
氯化锂沉淀法去除质粒制备物中小片段核酸（包括 DNA 和 RNA ) 的原理是基于两种核酸在氯化锂溶液中的溶解度有所不同。氯化锂是强脱水剂，可降低 RNA 的溶解性 ( Hearst and Vinograd 1961a, b），并剥离染色质上的蛋白质（Kondo 1979)。因此，质粒粗提物中的高分子质量 RNA 和蛋白质可在高浓度氯化锂溶液中形成沉淀，从而可通过低速离心加以分离（实例请见Kondo et al. 1991)。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理氯化锂沉淀法去除质粒制备物中小片段核酸（包括 DNA 和 RNA ) 的原理是基于两种核酸在氯化锂溶液中的溶解度有所不同。氯化锂是强脱水剂，可降低 RNA 的溶解性 ( Hearst and Vinograd 1961a, b），并剥离染色质上的蛋白质（Kondo 1979)。因此，质粒粗提物中的高分子质量 RNA 和蛋白质可在高浓度氯化锂溶液中......阅读全文
胸腺DNA的制备
实验概要本实验介绍了浓盐法小牛胸腺DNA制备的原理及操作步骤。实验原理DNA在生物体内是以与蛋白质形成复合物的形式存在的，因此提取出脱氧核糖核酸蛋白复合物（DNP）后，必须将其中的蛋白质除去。小牛胸腺，鱼类精子和植物种子的胚等含有丰富的DNA，可作为提取DNA的良好材料。动物和植物组织的脱氧核糖核蛋
酵母DNA微量制备
实验概要本实验介绍了分别从40ml和5ml酵母培养液中制备酵母DNA的操作流程。实验步骤1. 酵母DNA微量制备(40ml) 1) 在125ml三角瓶中用40ml YPD培养液在30℃条件下培养细胞达最大生长量(过夜)。 2) 将上述培养物移入螺盖离心管，用医用离心机或Sorvall SS-
哺乳动物中制备基因组DNA实验——制备DNA
在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现的。实验材料动物组织试剂、
“DNA探针”的制备过程
基因组DNA探针的获得有赖于分子克隆技术的发展和应用。要得到一种特异性DNA探针,常常是比较烦琐的。以细菌为例,细菌的基因组大小约为5×106碱基,约含3000个基因。要获得某细菌特异的核酸探针,通常要采取建立细菌基因组DNA文库的办法,即将细菌DNA切成小片段后(如用限制性内切酶做不完全水解)分别
DNA芯片的制备方式
DNA芯片又叫做基因芯片（gene chip）或基因微阵列（microarray），寡核酸芯片，或DNA微阵列，它是通过微阵列技术将高密度DNA片段阵列以一定的排列方式使其附着在玻璃、尼龙等材料上面。由于常用计算机硅芯片作为固相支持物，所以称为DNA芯片。
质粒DNA的制备方法
有多种分离质粒的方法，如碱裂解法、煮沸裂解法、层析柱过滤法等。
DNA片段的制备方法
常用以下方法获得DNA片段：①用限制性核酸内切酶将高分子量DNA切成一定大小的DNA片段；②用物理方法(如超声波)取得DNA随机片段；③在已知蛋白质的氨基酸顺序情况下，用人工方法合成对应的基因片段；④从mRNA反转录产生cDNA。
质粒DNA大量制备实验
实验方法原理 这一方案科能是最常用的质粒制备方法，该法不仅相当决捷可靠，而且可获得相当纯净的粗制DNA。实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 葡萄糖TrisEDTATENaOHSDS异丙醇乙醇乙酸甲仪器、耗材 离心机漩涡混合器水浴锅实验步骤 1. 往2 ml 烧瓶中加入500 ml ，含有适当抗生素的L
酵母DNA的小量制备
实验方法原理通过消化细胞壁，然后用 SDS 裂解随之产生的原生质体就可以制备酵母 DNA。用这种方法可重复性地制备若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性内切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。实验材料酶解酶 100T酵母细胞试剂、试剂盒异丙醇醋酸钾SDS醋酸钠山梨糖醇缓冲液TE酵母
酵母菌DNA制备
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPD破菌缓冲液酚氯仿异戊醇LB仪器、耗材 玻璃珠试管摇床培养箱离心机实验步骤 1. 注盛于一个13 mm×100 mm 无菌玻璃试管中的2 ml 培养基接种含有带目的基因的质粒的酵母单菌落，在转动或摇动培养箱中30℃过夜培养到静止期。2. 将1.5 ml 的过夜培养
DNA探针的制备方法
基因组DNA探针的获得有赖于分子克隆技术的发展和应用。要得到一种特异性DNA探针，常常是比较烦琐的。以细菌为例，细菌的基因组大小约为5×106碱基，约含3000个基因。要获得某细菌特异的核酸探针，通常要采取建立细菌基因组DNA文库的办法，即将细菌DNA切成小片段后（如用限制性内切酶做不完全水解）分别
制备互补DNA的方法
制备互补DNA，往往需要先分离从目的基因转录来的mRNA.如果该基因编码的蛋白质是细胞中的主要蛋白质，则此基因的产物是总mRNA的主要组成部分。就胰岛B细胞而论，此细胞含有高水平胰岛素前体mRNA，后者有时可以沉淀正在翻译的mRNA的核糖核蛋白体，如果用特异抗体结合所表达的蛋白质(抗原)，则可从沉淀
酵母DNA的小量制备
实验方法原理 通过消化细胞壁，然后用 SDS 裂解随之产生的原生质体就可以制备酵母 DNA。用这种方法可重复性地制备若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性内切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。实验材料 酶解酶 100T酵母细胞试剂、试剂盒 异丙醇醋酸钾SDS醋酸钠山梨糖醇缓冲液T
质粒DNA的小量制备
实验概要本方法用于从细菌中制备提纯少量质粒DNA。主要试剂1. 溶液Ｉ 50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tris．Cl(pH8.0) 10mmol/LEDTA(pH8.0) 溶液Ｉ可成批配制，每瓶约100ml，在6.895×104Pa高压下蒸气灭菌15分钟，贮存于4℃。2. 溶液Ⅱ 0.2
质粒DNA大量制备实验
碱裂解法 平衡离心法 实验方法原理 这一方案科能是最常用的质粒制备方法，该法不仅相当决捷可靠，而且可获得相当纯净的粗制DNA。
快速制备酵母DNA法
实验概要本实验制备了酵母转化质粒，快速从转化酵母菌中分离了用于Southern分析的基因组DNA。主要试剂2％ Triton X－100，1％SDS，100mmol/L NaCl，10mmol/L Tris-HCl(pH8)，1mmol/L Na2EDTA，苯酚：氯仿：已戊醇（25：24：1），YP
酵母DNA的小量制备
实验方法原理 通过消化细胞壁，然后用 SDS 裂解随之产生的原生质体就可以制备酵母 DNA。用这种方法可重复性地制备若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性内切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。
λ噬菌体DNA的制备
实验概要本实验介绍了λ噬菌体DNA的制备、操作步骤和注意事项。实验原理λ噬菌体是最早使用的克隆载体，λ噬菌体的基因组是一长度约为50kb的双链DNA分子，它在宿主细胞有两种生活途径：其一是裂解生长，环状DNA 分子在细胞内多次复制，合成大量噬菌体基因产物，装配成噬菌体颗粒，裂解宿主菌再进行下一次
质粒DNA的大量制备
实验概要本方法用于从细菌中提纯大量质粒DNA。主要试剂1. STE 0.1mol/L NaCl 10mmol/L Tris.Cl(pH8.0) 1mmol/L EDTA(pH8.0) 2. 溶液Ｉ 50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tris.Cl(pH8.0) 10mmol/L EDTA(
制备DNA测序模板实验——制备单链M13噬菌体DNA
本实验包含了用于制备适用于双脱氧测序的模板及适用于末端标记和化学测序的DNA的实验方案。所有用于双脱氧测序的双链模板在与引物退火前必须变性，在一般应用上，碱变性在测序中的效果比热变性好。实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒LBTEM13聚乙二醇容易让顶层琼脂乙酸钠乙醇仪器、耗材巴斯德吸管试管离心机实验步骤1
制备DNA测序模板实验——小量裂解物中制备λ噬菌体DNA
实验材料重组λ噬菌体试剂、试剂盒DNA酶ⅠRNA酶ⅠPEGSMSDSEDTA异丙醇乙酸钠TE仪器、耗材巴斯德吸管试管离心机实验步骤1. 在新鲜配制的λ顶层琼脂糖和λ琼脂糖平板上，通过在平板上裂解适于λ噬菌体生长的大肠杆菌菌株，制备重组λ噬菌体毒种原液。2. 取700 μl 毒种液加入无菌的1.5
DNA－亲和介质的制备实验
试剂、试剂盒ATP[y-32P]ATPT4多核苷酸激酶乙酸铵乙醇酚 氯仿氯仿 异戊醇NaOAcT4 DNA连接酶酚异丙醇重蒸水Sepharose CL-2B溴化氰NN-二甲基甲酰胺NaOH磷酸钾KClCNBr-活化的Sepharose*.4BHClT4 多核苷酸激酶缓冲液TE接头-激酶缓冲液乙醇胺-
DNA测序电泳的样品制备
当在预电泳时，即可进行样品的制备，将反应完毕的样品在沸水浴中加热1～3分钟，立即置于冰上即可。如果样品长时间不用，则应重新处理。可使用4～6%聚丙烯酰胺凝胶，胶厚0.4 mm。厚度小于0.4 mm的胶可能导致信号太弱。加样时不必吸去上层覆盖的矿物油，但要小心地吸取矿物油下的蓝色样品。
质粒DNA的制备和纯化
实验概要质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小从1~200kb不等，为双链、闭环的DNA分子，并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。质粒在细胞内的复制一般有两种类型：
制备互补DNA的方法过程
制备互补DNA，往往需要先分离从目的基因转录来的mRNA.如果该基因编码的蛋白质是细胞中的主要蛋白质，则此基因的产物是总mRNA的主要组成部分 。就胰岛B细胞而论，此细胞含有高水平胰岛素前体mRNA，后者有时可以沉淀正在翻译的mRNA的核糖核蛋白体，如果用特异抗体结合所表达的蛋白质(抗原)，则可
DNA－芯片的制备与应用
DNA 芯片的制备与应用DNA 芯片的出现，是生物技术领域的一次革命，虽然现在无法预知它带给我们的变化。但由于它在人类基因组计划，基因表达和药物筛选等方面的潜在用途。目前已有越来越多的公司和研究机构加入到DNA芯片的设计与开发。DNA芯片技术集成了集成电路制造，照相平板印刷，DNA合成，探针的荧光标
质粒DNA的小量制备实验
实验方法原理 碱裂解法是最常用的小量制备质粒DNA的方法。实验材料 培养基试剂、试剂盒 EDTASDS乙醇VTE仪器、耗材 平板实验步骤 1. 接种一个单菌落于5 ml无菌LB培养液中，在37°C培养至饱和状态（过夜）。2. 取1.5 ml培养液以最大转速离心20 S。弃上清。3. 沉淀用10
鲑精担体DNA制备实验
实验材料 鲑精DNA试剂、试剂盒 TE酚氯仿乙酸钠仪器、耗材 离心机摇床超声仪实验步骤 1. 将TE缓冲液加入装有干燥鲑精DNA的烧杯中，至鲑精DNA浓度为5~10 mg/ml。用10 ml 吸管反复吹打后，用搅拌棒于4℃搅拌过夜，最终获得一种均匀粘稠液体。 2. 将一个较大的超声波探头插入烧杯
动物组织中DNA的制备
（一）原 理DNA是所有生物体的基本组成物质。真核生物DNA主要存在于细胞核中。制备DNA时应将细胞核膜打破方能释放出来。细胞中的DNA和RNA分别与蛋白质相结合，形成脱氧核糖核蛋白及核糖核蛋白。在细胞破碎后，这两种核蛋白将混杂在一起。因此，要制备DNA首先要将这两种核蛋白分开。已知这两种核蛋白在不
制备DNA测序模板实验
制备单链M13噬菌体DNA 小量裂解物中制备λ噬菌体DNA 双脱氧测序的双链质粒DNA的碱变性 实验材料 大肠杆菌