探针合成实验
实验材料基因试剂、试剂盒转录缓冲液DTTRNA酶抑制剂CTPATPGTPS-UTP乙酸铵乙酸铵乙醇仪器、耗材水浴锅离心机培养箱烘箱实验步骤1. 在一个含SP6、T3或T7启动子的载体中，插入目的基因。在编码序列下游酶切使质粒呈线性。DNA以酚/氯仿抽提，乙醇沉淀，70%乙醇洗后晾干。以无菌水重溶沉淀至1 μg/μl。 2. 室温配罝如下反应混合液（总体积20 μl）：（1）4.0 μl 5×转录缓冲液（2）0.2 μl 1 mol/l DTT（3）60 U RNA酶抑制剂（4）1.0 μl 三种10 mmol/l NTP中的每一种（5）1.0 μl 1 μg/μl 酶切DNA（6）10.0 μl ［35S］UTP（7）16 U SP6或T7 RNA聚合酶（8）37℃温育30 min，再加16 U聚合酶并于37 ℃温育40 min。 3. 在反应混合液中加入：60 U RNA......阅读全文
探针合成实验
实验材料基因试剂、试剂盒转录缓冲液DTTRNA酶抑制剂CTPATPGTPS-UTP乙酸铵乙酸铵乙醇仪器、耗材水浴锅离心机培养箱烘箱实验步骤1. 在一个含SP6、T3或T7启动子的载体中，插入目的基因。在编码序列下游酶切使质粒呈线性。DNA以酚/氯仿抽提，乙醇沉淀，70%乙醇洗后晾干。以无菌水重溶沉
探针合成实验
基本方案 实验材料 基因 试剂、试剂盒
探针合成实验
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使用合成核苷酸作探针实验
实验材料 核苷酸试剂、试剂盒 SSC焦磷酸钠SDS仪器、耗材 培养箱水浴锅实验步骤 1. 制备双份的转印细菌菌落或噬斑的硝酸纤维素滤膜（处理和干烤过）。2. 在室温下用3× SDS / 0.1%SDS溶液500 ml 洗膜3~5次。3. 然后在65℃洗膜至少1.5 h 以上直至过夜。 4.
使用合成核苷酸作探针实验
实验材料 核苷酸 试剂、试剂盒 SSC 焦磷酸钠 SDS
探针合成的注意事项
①合成探针的长短，一般在20~50个核苷酸之间。合成过长成本高，且易出现聚合酶合成错误，杂交时间长，合成太短则特异性下降。②碱基组成G-C应含40%~60%，一种碱基连续重复不超过4个，以免非特异性杂交产生。③探针自身序列内应无互补区域，以免产生“发夹”结构，影响杂交。总之，一个好的探针最终要在实践
基因探针合成的注意事项
①合成探针的长短，一般在20~50个核苷酸之间。合成过长成本高，且易出现聚合酶合成错误，杂交时间长，合成太短则特异性下降。 ②碱基组成G-C应含40%~60%，一种碱基连续重复不超过4个，以免非特异性杂交产生。 ③探针自身序列内应无互补区域，以免产生“发夹”结构，影响杂交。总之，一个好的探针
基因探针合成的注意事项
①合成探针的长短,一般在20~50个核苷酸之间。合成过长成本高,且易出现聚合酶合成错误,杂交时间长,合成太短则特异性下降。 ②碱基组成G-C应含40%~60%,一种碱基连续重复不超过4个,以免非特异性杂交产生。 ③探针自身序列内应无互补区域,以免产生“发夹”结构,影响杂交。总之,一个好的探针
RNA探针的合成方法和合成效率检测
在RNA的杂交检测实验中，应用标记的RNA 探针将获得高灵敏度的杂交检测结果，与DNA 探针相比，检测灵敏度提高10-100倍。因为对于不同的杂交体类型来说，RNA-RNA杂交体的结合强度高于RNA-DNA和DNA-DNA杂交体。对于通过Northern blots检测低浓度mRNA，以及原
RNA探针合成方法和合成效率检测方法介绍
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体外转录合成单链RNA探针
实验方法原理 制备特异性的单链 RNA 探针不仅比 DNA 探针更容易，在杂交反应中一般也比具相同比活性的 DNA 探针产生更强的信号，这可能是由于含有 RNA 的杂合链固有的更高稳定性的缘故（Casey and Davidson 197
体外转录合成单链RNA探针
实验方法原理 制备特异性的单链 RNA 探针不仅比 DNA 探针更容易，在杂交反应中一般也比具相同比活性的 DNA 探针产生更强的信号，这可能是由于含有 RNA 的杂合链固有的更高稳定性的缘故（Casey and Davidson 1977)。虽然 DNA 探针仍普遍地应用于 Norther
双链DNA探针随机引物合成法
随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大小、产量、比活性依赖于反应中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,产物平均长度为400-600个核苷酸。利用随机引物进行反应的优点是：(1)Klenow片段没有5'→3'外切
合成的寡核苷酸探针的优点
合成的寡核苷酸探针具有一些独特的优点：一.由于链短，其序列复杂度低，分子量小，所以和等量靶位点完全杂交的时间比克隆探针短，如20nt的寡核苷酸探针在浓度为100ng/ml，靶序列为1～100pg、1kb片段或3×10-18~3×10-16mol/L时，达到最大程度的杂交只需10min，而用2kb的克
合成寡核苷酸探针的技术步骤
首先使支持物羟基化，并用光敏保护基团将其保护起来。每次选取择适当的蔽光膜（mask）使需要聚合的部位透光，其它部们不透光。这样，光通过蔽光膜照射到支持物上，受光部位的羟基解保护。因为合成所用的单体分子一端按传统固相合成方法活化，另一端受光敏保护基的保护，所以发生偶联的部位反应后仍旧带有光敏保护基团。
合成的寡核苷酸探针的优点
合成的寡核苷酸探针具有一些独特的优点：一.由于链短，其序列复杂度低，分子量小，所以和等量靶位点完全杂交的时间比克隆探针短，如20nt的寡核苷酸探针在浓度为100ng/ml，靶序列为1～100pg、1kb片段或3×10-18~3×10-16mol/L时，达到最大程度的杂交只需10min，而用2kb的克
合成的寡核苷酸探针的优点
合成的寡核苷酸探针具有一些独特的优点：一.由于链短，其序列复杂度低，分子量小，所以和等量靶位点完全杂交的时间比克隆探针短，如20nt的寡核苷酸探针在浓度为100ng/ml，靶序列为1～100pg、1kb片段或3×10-18~3×10-16mol/L时，达到最大程度的杂交只需10min，而用2kb的克
生物素酰化探针的制备实验——随即寡核苷酸引物合成法
实验材料DNA试剂、试剂盒dNTP生物素klenow酶TEEDTALiCl乙醇仪器、耗材离心机培养箱实验步骤1. 在1. 5 ml 离心管中加入500 ng~2 μg 模板DNA，加水至总体积为34 μl。 2. 在沸水中变性DNA 5 min 置于冰浴5 min，稍加旋离。3. 按顺序加入下
杂交探针的检测实验
实验步骤 1. 暗室中，以42~45℃水浴，温育盛有4盎司（113.3 g）Kodak NTB-2放射自显影胶乳瓶30 min。同时，在500 ml 三角瓶中预热等体积的水至相同温度。 2. 胶乳熔化后，缓慢沿三角瓶壁（以一角度）倒入瓶中
杂交探针的检测实验
1. 将载玻片以胶带固定于硬纸板或废胶片上。2. 将Du Pont Cronex 成像胶片（MRF 34 Clear） 轻压在玻片上4℃曝光。3. 当用这种胶片时，应注意以胶片的胶乳面正对样品。
使用合成核苷酸作探针实验——在绿化四甲胺中（TMAC）杂交
实验材料寡核苷酸试剂、试剂盒LBSDSEDTATMAC仪器、耗材水浴锅离心机培养箱尼龙膜实验步骤1. 按“在氯化钠/柠檬酸钠中杂交”介绍的方法处理已影印细菌菌落的滤膜。2. 按下列方法制备带扩增噬斑的滤膜（1）从文库中以渐减密度〔15 000~8 000噬斑 / 150 mm 平板）的方式将噬菌
随机引物合成法双链DNA探针标记法
随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大小、产量、比活性依赖于反应中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,产物平均长度为400-600个核苷酸。利用随机引物进行反应的优点是：(1)Klenow片段没有5'→3'外切酶活
基因合成实验
基因合成可应用于：（1）代谢通路合成；（2）基因网络构建；（3）疫苗设计。难度系数 2.0共2人点评打分点评实验，有机会获丁当奖励 +收藏 8人收藏基因合成实验标签： 基因 合成基因合成可应用于：（1）代谢通路合成；（2）基因网络构建；（3）疫苗设计。基因合成实验实验方法原理基因合成是指在体外人工
基因合成实验
基因合成可应用于：（1）代谢通路合成；（2）基因网络构建；（3）疫苗设计。实验方法原理基因合成是指在体外人工合成双链DNA分子的技术，与寡核苷酸合成有所不同：寡核苷酸是单链的，所能合成的最长片段仅为100nt左右，而基因合成则为双链DNA分子合成，所能合成的长度范围50bp-12 kb。基因合成是用
cDNA－合成实验
试剂、试剂盒 二硫苏糖醇 dNTP 随机引物 来自方案 4 的 RNA 样品 RNasin 反转录缓冲液
基因合成实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 dNTPDAN聚合酶乙醇TE限制性内切核酸酶缓冲液仪器、耗材 水浴锅培养箱实验步骤 1. 将两种寡核苷酸各1 μg加入微量离心管中，加水至17 μl，再加2 μl 的10×测序酶缓冲液。70℃加热5 min，然后在合适的退火温度下保温5 min，取2 μl 留待以后
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试剂、试剂盒二硫苏糖醇dNTP随机引物来自方案 4 的 RNA 样品RNasin反转录缓冲液仪器、耗材PCR 管子热循环仪实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂0.1mol/L 二硫苏糖醇dNTP(每种 2.5 mmol/L)随机引物（20~40U/ml)(1034731，RocheApplied
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试剂、试剂盒 二硫苏糖醇dNTP随机引物来自方案 4 的 RNA 样品 RNasin反转录缓冲液仪器、耗材 PCR 管子 热循环仪实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂0.1mol/L 二硫苏糖醇dNTP(每种 2.5 mmol/L)随机引物（20~40U/ml)(1034731，RocheAp
基因合成实验
实验方法原理 基因合成是指在体外人工合成双链DNA分子的技术，与寡核苷酸合成有所不同：寡核苷酸是单链的，所能合成的最长片段仅为100nt左右，而基因合成则为双链DNA分子合成，所能合成的长度范围50bp-12 kb。基因合成是用人工方法合
核酸探针标记的实验过程
实验原理分子生物研究中，zui常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于转基因植物拷贝数的鉴定、临床诊断等方面。双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可