纯化RNA实验——从组织中纯化总RNA

实验材料组织试剂、试剂盒RNA 抽提缓冲液氯仿实验步骤1. 从动物取下组织,直接进行第 2 步或在液氮中快速冷冻新鲜解剖的组织。冷冻后的组织可以贮存在 -70℃。2. 组织(0.05~0.3 g)在 2.0 ml RNA 抽提缓冲液中匀浆。3. 每管加 200 μl 氯仿,混合均匀,冰浴 15 分钟。4. 接下去的步骤和“从培养的细胞中纯化总RNA”方法步骤 4 以下的步骤相同。......阅读全文

半制备规模单链RNA纯化(一)

Sean M. McCarthy and Martin GilarWaters Corporation, Milford, MA, U.S.引言寡核苷酸合成是非常高效和高产率的过程。在固相载体上进行寡核苷酸反应的典型产率为每耦合阶98~99.5%。在典型的多阶寡核苷酸合成中,杂质聚集在一起,即使是一

FFPE组织样品的DNA和RNA纯化

福尔马林固定后石蜡包埋的组织简称为FFPE样品。将组织在 4–10% 的福尔马林中迅速固定。 固定时间限制在 14–24 小时 (越长的固定时间将越容易导致DNA的片段化,对下游实验不利)。将固定组织彻底脱水 (彻底脱去福尔马林残余,因为其阻碍蛋白酶K的作用)。 纯化DNA时,使用新鲜从石蜡块上切下

半制备规模单链RNA纯化(二)

图2中所示被选中的馏份收集窗表示不同的质量负荷。峰值采集后,样品可以根据需要对等分和干燥,以便长期储存。TEAA的挥发性使离子对缓冲组分的去除非常容易。溶剂蒸发后被纯化的寡核苷酸实际上是不含盐的。 UPLC条件纯化RNA寡核苷酸的纯度通过ACQUITY UPLC系统来验证。如图3所示,我们的纯化方法

常规组织样本核酸(DNA/RNA)提取纯化

20 分钟内快速纯化高品质,高产量,即用型 DNA(见图 20)多种规格可选择:Mini Kit 可处理 25 mg 组织,Micro Kit 可处理小于 10 mg 组织完全去除污染物和抑制剂可在 QIAcube 上进行自动化纯化表1 QIAamp DNA Mini Kit纯化各类样本的核酸产量样

免疫纯化实验

            实验方法原理 制备免疫亲和柱要求抗体首先共价结合到介质上。另一方法是将抗体结合到蛋白 A 或 G 小珠上,再用交联剂固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 结合在杭体的 Fe 区, 所以结合抗原的部位获得充分暴露,从易于接近。免疫亲和柱

免疫纯化实验

实验方法原理 制备免疫亲和柱要求抗体首先共价结合到介质上。另一方法是将抗体结合到蛋白 A 或 G 小珠上,再用交联剂固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 结合在杭体的 Fe 区, 所以结合抗原的部位获得充分暴露,从易于接近。免疫亲和柱制备完成后,抗原溶液即可以上样,接着洗去污染物,然后洗脱抗

凝胶纯化实验

试剂、试剂盒蒸馏水乙醇甲酰胺胶的缓冲液亚甲基蓝十二烷基硫酸钠储存液TAE 缓冲液Tris 乙酸盐乙酸纳EDTA蓝色葡聚糖TEN 缓冲液40mer聚丙烯酰胺胶仪器、耗材解剖刀UV 灯过滤 UV 的安全破璃实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂蒸馏水乙醇,95%甲酰胺 (使用安珀莱特单床离子交换树脂

DNA纯化实验

PCR清洁试剂盒纯化法             实验方法原理 硅胶膜可在高盐条件下结合DNA,又可在低盐条件下与DNA分离。用于清洁目的的含DNA溶液中的引物、单核苷酸、酶、矿物油

免疫纯化实验

在蛋白质纯化方法中抗体亲和纯化是非常有效的方法之一。仅此一步常可获得 1000~10 000 倍的纯化。如果抗体与目的蛋白的结合的特异性得到证明,并且洗脱的目的蛋白没有受到不可逆的损伤,那么可以认为免疫纯化是极好的蛋白质纯化方法,特别是用在纯化过程的最后步骤。实验方法原理制备免疫亲和柱要求抗体首先共

DNA纯化实验

实验方法原理 硅胶膜可在高盐条件下结合DNA,又可在低盐条件下与DNA分离。用于清洁目的的含DNA溶液中的引物、单核苷酸、酶、矿物油、盐离子等杂质因为没有与DNA相似的特性,所以被分离开来。实验材料 PCR产物试剂、试剂盒 PCR清洁试剂盒仪器、耗材 96孔DNA制备板96孔深孔板96孔V型底板实验

纯化DNA实验

从哺乳动物细胞或组织分离DNA 基因组DNA的快速纯化 纯化质粒(碱裂解法)             实验材料 细胞

纯化DNA实验

实验材料 细胞试剂、试剂盒 TBS抽提缓冲液仪器、耗材 离心管实验步骤 1. 根据样品类型,从下列方法中选一个作为步骤 1 进行操作。(1) 细胞样品① 单层培养的细胞以用冰预冷的 TBS 将单层细胞洗涤 2 次,用刮棒把细胞刮入约 0.5 ml 的 TBS 中,将细胞悬液转移到冰浴的离心管中,

凝胶纯化实验

试剂、试剂盒 蒸馏水乙醇甲酰胺胶的缓冲液亚甲基蓝十二烷基硫酸钠储存液TAE 缓冲液Tris 乙酸盐乙酸纳EDTA蓝色葡聚糖TEN 缓冲液40mer聚丙烯酰胺胶仪器、耗材 解剖刀UV 灯过滤 UV 的安全破璃实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂蒸馏水乙醇,95%甲酰胺 (使用安珀莱特单床离子交换

凝胶纯化实验

            试剂、试剂盒 蒸馏水 乙醇 甲酰胺 胶的缓冲液 亚甲基蓝 十二烷基硫酸钠储存液 TAE 缓冲液 Tris

纯化DNA实验

从哺乳动物细胞或组织分离DNA 基因组DNA的快速纯化 纯化质粒(碱裂解法)             实验材料 细胞

Thermo-Fisher推出最新RNA纯化试剂盒

来自纽约8月3日的消息,Thermo Fisher Scientific这一世界领先的科技公司宣布推出SurePrep™ RNA Purification Kits,这一试剂盒可以从生物样品中捕获所有大小的RNA分子,比如经纯化的全长大分子RNAs,或者是在信号途径中调控基因表达,在细胞死亡,器官发

利用-ConcertPlant-试剂从植物组织中纯化-RNA

            实验材料 植物组织 试剂、试剂盒 Concert Plant RNA试剂 NaCl 氯仿

总RNA分离纯化标准操作规程(SOP)

主要仪器  研钵,恒温水浴,旋涡振荡器,冷冻台式高速离心机,  超低温冰箱,紫外检测仪,电泳仪,电泳槽。   试剂  1.Trizol试剂(购自Invitrogen公司)  2.焦碳酸二乙酯 (DEPC)  3.氯仿(新开封)  4.异丙醇(新开封)

从全血采样、保存、运输到RNA纯化

血液采集:    PAXgene系统提供标准化的BD Vacutainer(真空采血管,室温保存),配合使用一次性消毒采血针作静脉穿刺,采血管内的负压会迫使血液自动吸入管中,当搜集的血液达到2.5毫升刻度线时停止采血。采血管中本身已经预装了6.9毫升的RNA稳定试剂,拔出针头后只要将采血管轻轻颠倒8

RNA干涉实验

化学合成siRNA分子实验 体外转录合成siRNA分子实验 采用RNA聚合酶Ⅲ启动子表达siRNA分子 采用RNaseⅢ制备siRNA分子实验             实验方法

RNA干涉实验

实验方法原理 当确定了靶基因上的 siRNA 分子作用位点以后,根据靶位点的序列可以很方便地推导得到相应的 siRNA 分子的正义与反义 RNA 链序列。它们包含 19 bp 的互补双链区和两侧的不配对区(每侧为 2 个 U 成 2 个 T ),在合成时用 T 替代 U 可以降低成本并可以提

RNA干涉实验

RNA 干涉(RNA1) 是指在真核细胞中引入双链 RNA ( doubt-stranded RNA,dsRNA ) 分子从而导致具有序列同源性的基因产生特异件基内沉默(gene silencing ) 的现象。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验方法原理当确定了靶基因上的 siRN

纯化DNA实验_纯化质粒(碱裂解法)

实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒LB葡萄糖缓冲液乙酸钾仪器、耗材离心管实验步骤1. 单个大肠杆菌克隆接种到 2 ml 含适当抗生素的 LB 中。37℃ 剧烈振荡孵育 5~8 小时。或者可以培养过夜使饱和。2. 倒 1.5 ml 培养液到已作标记的微量离心管中。把剩下的培养液存放在 4℃。3. 在微量离心

IgG抗体纯化实验

虽然亲和层析法是进行特异性抗体纯化的首选,然而有时这种纯化方式却非必需,或者无法实施进行。在大多数锖况下,运铁蛋白可发生共沉淀或共纯化,能用凝胶滤过层析去除之。实验材料抗体试剂、试剂盒SAS仪器、耗材透析膜离心机实验步骤1.  于4℃不断搅拌下,往2体积的含有IgG的混合物中,逐滴加入1体枳pH7.

PCR-产物纯化实验

试剂、试剂盒 TE 或去离子水PCR 产物仪器、耗材 离心机和转子PCR 滤 件微量离心管实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液TE(lOmmol/L Tris-HCl,lmmol/L EDTA,pH7.5) 或去离子水2. 核酸和寡核苷酸待测序的 PCR 产物3. 离心机和转子带有固定倾角转子的小型

IgG抗体纯化实验

实验材料 抗体试剂、试剂盒 SAS仪器、耗材 透析膜离心机实验步骤 1.  于4℃不断搅拌下,往2体积的含有IgG的混合物中,逐滴加入1体枳pH7.0的SAS溶液。加完后置于4℃不间断地搅拌此混合物2~4 h以形成沉淀。2 000 g 离心20 min。 2.  用预冷的33% SAS溶液在漩涡混合

PCR-产物纯化实验

            试剂、试剂盒 TE 或去离子水 PCR 产物 仪器、耗材 离心机和转子 PCR 滤 件

抗体的纯化实验

实验方法原理利用细菌胞壁蛋白的特性可以提供了一个快速、简捷、特异、高效的抗体纯化方法。这里细菌胞壁蛋白主要指蛋白 A 和蛋白 G,它们分别从金黄色化脓性葡萄球菌和 G 组链球菌分离纯化。它们能特异结合到免疫球蛋白的 Fe 部分。由于它们对不同的免疫球蛋白有不同的亲和力,所以应根据免疫球蛋白的种类和类

PCR-产物纯化实验

介绍一个采用 AmiconMicrocon-PCR 滤件(Millipore) 的方法,有效地去除冗余dNTP 和引物的方法纯化 PCR 产物。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试剂、试剂盒TE 或去离子水PCR 产物仪器、耗材离心机和转子PCR 滤 件微量离心管实验步骤

抗体的纯化实验

实验方法原理 利用细菌胞壁蛋白的特性可以提供了一个快速、简捷、特异、高效的抗体纯化方法。这里细菌胞壁蛋白主要指蛋白 A 和蛋白 G,它们分别从金黄色化脓性葡萄球菌和 G 组链球菌分离纯化。它们能特异结合到免疫球蛋白的 Fe 部分。由于它们对不同的免疫球蛋白有不同的亲和力,所以应根据免疫球蛋白