人胚胎干细胞系:衍生与培养实验——细胞培养基成分
实验步骤2.2.5 BRL-条件培养基B R L 细胞在大鼠肝细胞培养基（BRL-CM) 中生长至汇合，用新鲜培养基更换一次 ， 3 天后收集这些培养基。所有培养基用无菌的、孔 径 0.2um 的 P E S 滤膜过滤，特别是来自其他细胞类型的条件培养基。应该注意的是：在细胞分化研究中可能被用到的生长因子和其他小分子需要无菌准备，但不能过滤，以免这些物质与滤膜结合而被损耗。展开 ......阅读全文
人胚胎干细胞系:衍生与培养实验——细－胞－培－养－基－成－分
实验步骤2.2.5 BRL-条件培养基B R L 细胞在大鼠肝细胞培养基（BRL-CM) 中生长至汇合，用新鲜培养基更换一次 ， 3 天后收集这些培养基。所有培养基用无菌的、孔 径 0.2um 的 P E S 滤膜过滤，特别是来自其他细胞类型的条件培养基。应该注意的是：在细胞分化研究中可能被用到的生
人胚胎干细胞系:衍生与培养实验
细 胞 培 养 基 成 分 小 鼠 胚 胎 饲 养 细 胞（MEF) 的 制 备 人 胚 胎 干 细 胞 系 的 建 立 h E S 细 胞 的 手 工 传 代 采 用 玻 璃 化 方 法 冻 存 h E S 细胞 通 过 焚 光
人胚胎干细胞系:衍生与培养实验
细 胞 培 养 基 成 分 小 鼠 胚 胎 饲 养 细 胞（MEF) 的 制 备 人 胚 胎 干 细 胞 系 的 建 立 h E S 细 胞 的 手 工 传 代 采 用 玻 璃 化 方 法 冻 存 h E S 细胞 通 过 焚 光
人胚胎干细胞系:衍生与培养实验—人胚胎干细胞系的建立
实验步骤方 案 2. 6 人 胚 胎 干 细 胞 系 的 建 立试剂与材料无菌或无菌制备□ 5〜6 天的人胚泡，经 H F E A 允许，并且像先前讨论的完全经病人同意。 HFEA所要求的全部细节能够在 H E F A 的网站找到（http//:www.hfea.g0v.uk)。□链霉蛋白酶， 0
人胚胎干细胞系:衍生与培养实验——hES－细胞的手工传代
实验步骤方 案 2.7 h E S 细 胞 的 手 工 传 代试剂与材料无菌或无菌制备□ 生 长 于 M E F 之上的未分化的 h E S 细胞集落□ 新 鲜 的 M E F 板（最好是在失活处理后 1〜3 天内）□ h E S 培 养 基（见 2. 2. 1 节）□ 50 ul加样器枪头□玻璃巴
人胚胎干细胞系:衍生与培养—小鼠胚胎饲养细胞的制备
实验步骤2.3 小 鼠 胚 胎 饲 养 细 胞（MEF) 的 制 备最广泛地用于支持 h E S 的伺养层细胞来自小鼠胚胎 [丁]^〇 1113 〇 1161&1,， 1998;Reu-binoffetal. ， 2000]，如小鼠胚胎饲养细胞（MEFs) ，尽管它们可能是最原始的间叶细胞的前体细胞
人胚胎干细胞系:衍生与培养—采用玻璃化方法冻存hES细胞
实验步骤方 案 2. 9 采 用 玻 璃 化 方 法 冻 存 h E S 细胞试剂与材料无菌或无菌制备□ 生 长 于 M E F 饲养层之上的未分化的 h E S 细胞□ hES-HEPES 培 养 基（见 2. 2. 2. 1 节）□ 1 0 % 玻 璃 化 溶 液（见 2. 2. 2. 4 节）
人胚胎干细胞:衍生与培养实验—由hES细胞产生胚胎样小体
实验步骤方 案 2. 14 由 h E S 细 胞 产 生 胚 胎 样 小 体试剂与材料无菌或无菌制备□ 生 长 于 M E F s 之上的未分化的 h E S 细胞集落□ 加样器，设置在 50ul□ 超 低 附 着 力 的 P e tri 培 养 皿（特 殊 包 被 过 的 皿 ，可 防 止 细
人－NK－T－细－胞－的－分－离－和－扩－增
实验步骤基本方案 1 NK T 细胞的鉴定材 料外周肝素抗凝血P B SR P M I -1640 培养基，含 1 0 % (V /V ) 人血清或 F C S 以 及 10U /m l I L -2 (可选）流 式 细 胞 缓 冲 液（flow cytometry buffer， FCbuffer
ELISPOT方－法－检－测－分－泌－细－胞－因－子－的－细－胞
实验步骤基本方案材 料包被缓冲液洗液：含 0.25% (v/v) Tween 20 的 PBS 溶液阻断缓冲液：含 5 % (m/V) BSA 或 FCS 的 PBS 溶液VRPMMO 完全培养基（或其他适宜培养基）分泌细胞因子的细胞（小鼠或人的）丝裂原，抗原或其他促细胞因子分泌的刺激物带有标记物的
外－源－性－抗－原－向－T－细－胞－的－呈－递
实验步骤基本方案 一 种 抗 原 加 工 处 理 和 呈 递 的 检 测 体 系材 料具有增殖能力的（如转化的 B 细胞）或非增殖的且与 T 杂交瘤细胞 M H C 匹配的抗原呈递细胞（单 元 7.1)D M E M -1 0 完全培养基， 37°C对数生长期的 T 杂交瘤细胞抗原：溶解于水的蛋白质
外源性抗原向T细胞的呈递
基本方案 一 种 抗 原 加 工 处 理 和 呈 递 的 检 测 体 系材 料具有增殖能力的（如转化的 B 细胞）或非增殖的且与 T 杂交瘤细胞 M H C 匹配的抗原呈递细胞（单 元 7.1)D M E M -1 0 完全培养基， 37°C对数生长期的 T 杂交瘤细胞抗原：溶解于水的蛋白质或多肽（
T－细－胞－克－隆－的－建－立
实验步骤基本方案 1 产生和维持同种反应性 T h 和 CTL 克隆尽管同种反应性 T 细胞可以从未刺激的脾细胞或淋巴结细胞中产生，但如果细胞在初次混合淋巴细胞（M L C ) 中第一次被同种抗原刺激，反应细胞的得率会更高。见以下介绍。材 料同种反应性小鼠脾脏 T 细胞V H B S S (可选使用
单－克－隆－抗－体－的－制－备——克隆和扩增用培养基的制备
实验步骤 附 加 材 料（其他材料见基本方案 2)小鼠（以 BALB/c 小鼠为例）， 5 或 6 只 ， 4〜6 周龄，无 病 原 体（有可靠来源，避免支原体感染）75 cm2 组织培养用细颈瓶0.45 过滤装置1.用颈椎脱臼法或二氧化碳窒息法处死 5 或 6 只 小 鼠（附 录 2 G; 避免使
T细胞克隆的建立
基本方案 1 产生和维持同种反应性 T h 和 CTL 克隆尽管同种反应性 T 细胞可以从未刺激的脾细胞或淋巴结细胞中产生，但如果细胞在初次混合淋巴细胞（M L C ) 中第一次被同种抗原刺激，反应细胞的得率会更高。见以下介绍。材 料同种反应性小鼠脾脏 T 细胞V H B S S (可选使用）V D
流－式－细－胞－仪－检－测－全－血－的－人－淋－巴－细－胞
实验步骤基本方案材 料（打 V 项 目 见 附 录 1)全血，通 常 用 E D T A 抗凝P B S ，有 或 无 0.1% (m /V ) 叠氮钠，过滤除菌单 克 隆 抗 体（标记的，未标记的或生物素化的），通过滴定确定最佳工作浓度间 标 二 抗（仅用于未标记的一抗）F T T C 标记的链霉
单－克－隆－抗－体－的－制－备——细胞融合与杂交瘤分选
实验步骤 在 筛 选 检 测（辅助方案 1 ) 方案完善之前不应进行细胞融合。由于在细胞融合后可对目标单克隆抗体进行检测的次数是有限的，在细胞融合前必须检查条件培养液以排除筛选时可能出现的人为因素影响。材 料SP2/0-Agl4 骨 髓 瘤 细 胞 系（药物标记的非分泌型； ATCC)添加10 mm
小－鼠－巨－噬－细－胞－的－分－离
实验步骤基 本 方 案 1 小鼠腹腔巨噬细胞的分离材料小鼠，洁 净 环 境 中 饲 养（最好置层流柜中饲养）7 3 % (m /V ) 豚 蛋 白 胨 或 者 3 % (W V r) Brewer 硫 基 乙 酸 盐 肉 汤（Brewerthioglycollate medium，分离炎性腹腔巨嗤细
树突细胞的分离实验（二）
1.将2 管 I m l 的 4000U /m l 胶 原 酶 D 稀 释（足够用于2 0 个脾脏）： Im l 加 入 9m l H B S S(稀 释 至 400U /m l ，步 骤 8 使用）， I m l 加 入 39m l 的 H B S S (稀 释 至 100U /ml)。置
人胚胎干细胞:衍生与培养—焚光免疫细胞化学分析hES细胞
实验步骤方 案 2. 11 通 过 焚 光 免 疫 细 胞 化 学 分 析 h E S 细 胞 的 特 性试剂与材料无菌或无菌制备□ 生 长 于 0.1 % 明胶包被的玻璃盖玻片上的h E S 细胞非无菌□ 4 % 多聚甲醛□ P B S A□ T ris-缓 冲 盐 溶 液（T B S 一）□含有
选择重组蛋白表达的合适方法（二）
三、毕赤酵母酵 母 作 为 另 一 种 表 达 重 组 蛋 白 的 强 有 力 的 传 统 工 具 ，已 被 成 功 应 用 于 大 量 蛋 白 质 的表 达 。酵 母 既 具 有 大 肠 杆 菌 的 许 多 优 点 ，如 增 殖 时 间 短 、基 因 组 易 于 操 作 ，又 具 有 真
树突细胞的分离实验
实验步骤基 本 方 案 1 塑 料 黏 附 和E A 玫 瑰 花结 富 集DC此种技术用于分离DC已经使用了很多年，其间只经过了微小的修改（Steinman衫aZ.， 1979)材 料（带V 项 目 见 附 录 1)胶原酶消化的脾脏细胞悬液（见辅助方案）高密度牛血清白蛋白（BSA) 溶液R P M
抗原呈递细胞的选择和制备
实验步骤基本方案 过 利 斯 特 氏 菌 刺 激 制 备 腹 腔 巨 噬 细 胞材 料单核细胞增多性利斯特氏菌无 菌 PBSH -2 相 合 小 鼠（见 表 A .2A .1)，包括正常和提前 3 周注射了利斯特氏菌的小鼠V冰浴的 D M E M 培养基3 % (V A O 乙酸0.4% (m /V
H－I－V－的检测与分析——感染CD4+原代细胞系及H－I－V－的诱导
实验步骤感 染 CD4+ 原 代 细 胞 系 及 H I V 的诱导基本方案1 用 H IV 体 外 急 性 感 染CD4 + 原代细胞及细胞系表9.2.1列出了一些最常用于体外H I V 感 染 的 C D 4 + 靶细胞。用其他不同谱系的C D 4 + 细胞系也可获得相应的结果，还 有 一 些
P－C－R－检－测－人－T－细－胞－受－体－基－因－的－表－达
实验步骤 基 本 方 案 PCR检 测 人 T 细胞受体基因的表达展
B－细－胞－分－泌－抗－体－的－检－测
实验步骤基 本 方案材 料外周 血 单 个 核 细 胞（P B M C ; 单 元 8.1)RPMI- 5 和 RPMI-IO 完全培养基P W M 溶液9 6 孔 平 底 培 养 板（Costar)1 . 计 数 PBMC (附录 3A ) ， 用 RPMI-5 完全培养基调整浓度至 4 X 10
单克隆抗体培养上清与腹水的制备—上清的制备
实验步骤材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)杂 交 瘤（单 元 1.3)V DMEM-IO 完全培养基175 cm2 组织培养用细颈瓶50m l 塑料锥底离心管，无菌Beckman 离心机和 TH-4 转 子（或同等设备）1.将杂交瘤细胞移入含有 DMEM-IO 完全培养基的 175 cm2 培
Fcγ受体介导的黏附作用和吞噬作用的检测
基本方案 FcY 受体介导的吞噬作用材 料原代巨噬细胞或巨噬细胞株（单 元 6.1 和 8. 5)R P M I -5 完 全 培 养 基（或其他培养基）绵 羊 红 细 胞（S R B C ) ，用 Alsever 溶 液 I : I (V /V ) 稀 释（附 录 1)生理盐水： 0. 9 % (
巨－噬－细－胞－吞－噬－功－能－和－杀－伤－功－能－的－检－测
实验步骤基本方案1 巨噬细胞吞噬功能的检测材 料单核/巨噬细胞：如巨噬细胞株、小鼠腹腔巨噬细胞[单元6.1，需 用 1 0 %豚蛋白胨或4 % (m /V ) 硫基乙酸盐肉汤]，或 人 P B M C (单 元 8.1)平衡盐溶液（balanced salt solution， BSS)细菌（如单核
家庭组培培养基的选择与效果评价
选择合适的培养基是植物组织培养成功的基础。选择合适的培养基主要从以下两个方面考虑：一是基本培养基；二是各种激素的浓度及相对比例。MS培养基适合于大多数双子叶植物，B5和N6培养基适合与许多单子叶植物，特别是N6培养基对禾本科植物小麦、水稻等很有效，White培养基适合于根的培养。首先试用这些培养基进