单克隆抗体培养上清与腹水的制备—上清的制备
实验步骤材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)杂 交 瘤（单 元 1.3)V DMEM-IO 完全培养基175 cm2 组织培养用细颈瓶50m l 塑料锥底离心管，无菌Beckman 离心机和 TH-4 转 子（或同等设备）1.将杂交瘤细胞移入含有 DMEM-IO 完全培养基的 175 cm2 培养瓶中。培养至生长旺盛和准备细胞分瓶时取用（细胞密度应达到 IXlO6〜2 X 106 个细胞/ml)。避免细胞生长密度过高导致死亡。2.以 1 :1 0 的比例分出部分细胞至另一个 175 cm2 培养瓶中。加 入 DMEM-IO 完全培养基 至 总 体 积 100 ml，培养至细胞过度生长，培 养 基 呈 黄 色（酸性），出现死亡细胞(大约 5d)。或者，将 高 密 度 细 胞（IXlO6〜2 X 106 个细胞/ ml) 随新鲜培养基转入培养瓶，培 养 2〜3d 直到出现死亡细胞......阅读全文
单－克－隆－抗－体－的－制－备——有限稀释克隆法
实验步骤 附 加 材 料（其他材料见基本方案 2)候 选 杂 交 瘤 系（见辅助方案 2)克隆和扩增用培养基（见辅助方案 4)微 孔 板 观 察 镜（由 Flow 实验室或 Dynatech 公司提供），可选的1.重悬候选杂交瘤所在孔中的细胞（见 辅 助 方 案 2 , 步 骤 4)，用血细胞计数器
单－克－隆－抗－体－的－制－备——细胞融合与杂交瘤分选
实验步骤 在 筛 选 检 测（辅助方案 1 ) 方案完善之前不应进行细胞融合。由于在细胞融合后可对目标单克隆抗体进行检测的次数是有限的，在细胞融合前必须检查条件培养液以排除筛选时可能出现的人为因素影响。材 料SP2/0-Agl4 骨 髓 瘤 细 胞 系（药物标记的非分泌型； ATCC)添加10 mm
多－克－隆－抗－血－清－的－制－备2
使 用 其 他 佐 剂 制 备 多 克 隆 抗 体 的 免 疫 接 种 法实验步骤用 其 他 佐 剂 制 备 多 克 隆 抗 体 的 免 疫 接 种 法附 加 材 料（其他材料见基本方案）TiterMaxttR-I (CytRx; 4°C 下储存少于 24 个月）或 Ribi 佐 剂 系 统（RAS
单－克－隆－抗－体－的－制－备——杂交瘤的建系
实验步骤 在单克隆抗体的特异性得到充分验证之前，应该对所有候选的杂交瘤进行建系。但为了减少不必要的工作量，可以选择其中 2 0 个最佳的候选孔。在检测这 2 0 个孔的培养上 清（见辅助方案1 ) 为阳性后，应该将这些孔的细胞进行冻存，同时进行有限稀释。附 加 材 料（其他材 料 见 基 本 方 案
单－克－隆－抗－体－的－制－备——杂交瘤培养上清的筛选分析
实验步骤 附 加 材 料（其他材料见基本方案 2)在 9 6 孔板中生长的杂交瘤（见基本方案 2)添 加 10 mmol/L HEPES的 DMEM-2 0 完 全 培 养 基（附 录 1)多道移液器和9 6 孔板，可选的1.在倒置显微镜下观察生长的杂交瘤的孔数。确定是对所有孔进行细胞筛选还是只筛选
单－克－隆－抗－体－的－制－备——克隆和扩增用培养基的制备
实验步骤 附 加 材 料（其他材料见基本方案 2)小鼠（以 BALB/c 小鼠为例）， 5 或 6 只 ， 4〜6 周龄，无 病 原 体（有可靠来源，避免支原体感染）75 cm2 组织培养用细颈瓶0.45 过滤装置1.用颈椎脱臼法或二氧化碳窒息法处死 5 或 6 只 小 鼠（附 录 2 G; 避免使
单－克－隆－抗－体－的－制－备——单克隆抗体制备中的免疫接种
实验步骤 材料靶抗原：表达于细胞的抗原，或蛋白质、多肽生理盐水无血清培养基：仅用于细胞接种弗 氏 完 全 佐 剂（ complete Freunds adjuvant， CFA)， Sigma 公司实验动物：无 病 原 体 大 鼠 、小 鼠（推 荐 使 用 BALB/c小 鼠）或 仓 鼠（推荐使用C
人－NK－T－细－胞－的－分－离－和－扩－增
实验步骤基本方案 1 NK T 细胞的鉴定材 料外周肝素抗凝血P B SR P M I -1640 培养基，含 1 0 % (V /V ) 人血清或 F C S 以 及 10U /m l I L -2 (可选）流 式 细 胞 缓 冲 液（flow cytometry buffer， FCbuffer
T－淋巴细胞增殖实验
实验步骤基 本 方 案 1 未 致 敏 T 淋巴细胞的活化材 料备选方案1 用抗体激活未致敏的T 细胞这种方法适用于当抗C D 3/T C R 复合物抗体不能有效结合小鼠辅助细胞上的F c 受体 ，或其可溶形式不能有效活化T 细胞时。值得注 意 的 是 ，在 某 种 抗 体（如 抗 G 7、Thy-
疫－磁－珠－法－分－离－B－细胞亚群
实验步骤基本方案材 料抗 凝 血（附 录 3 G) ， 或 者 从 全 外 周 血 中（单 元 8 . 1 ) 或 组 织 中（单 元 7. 8 ) 分离的新 鲜 PBM C 或冷藏保存的 PBMC (附录 3B)1 % FBS (热灭活）溶于冷的 PBS (附 录 1 ，无钙离子）中免疫磁珠偶联的
酶－联－免－疫－吸－附－实－验——抗体夹心ELISA法检测可溶性抗原
实验步骤抗 体 夹 心 ELISA 法检测可溶性抗原该检测方法比抗原直接结合到固相上的 ELISA 方法敏感性高 2〜5 倍（图 I.1. 3)。附 加 材 料（其他材料见基本方案）特 异 性 抗 体（单 克 隆 或 多 克 隆 ）或 者 来 自 抗 血 清 、腹 水 或 杂 交 瘤 上 清 液（单
整－体－培－养－中－同－型－转－换－重－排－的－PCR－检测
实验步骤 基 本 方 案 1 通过转换接头的直接 PCR材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)外周血分离的单核细胞（P B M C ; 单 元 8.1)I M D M -I O 完全培养基重组人 IL-4 (rfIL-4; 表 5. 0 •1)展
Fcγ受体介导的黏附作用和吞噬作用的检测
基本方案 FcY 受体介导的吞噬作用材 料原代巨噬细胞或巨噬细胞株（单 元 6.1 和 8. 5)R P M I -5 完 全 培 养 基（或其他培养基）绵 羊 红 细 胞（S R B C ) ，用 Alsever 溶 液 I : I (V /V ) 稀 释（附 录 1)生理盐水： 0. 9 % (
养阴清肺糖浆的成分
地黄、玄参、麦冬、甘草、牡丹皮、川贝母、白芍、薄荷脑。辅料为乙醇、单糖浆，防腐剂为苯甲酸钠。
Fcγ－受－体－介－导－的－黏－附－作－用－和－吞－噬－作－用－的－检－测
实验步骤基本方案 FcY 受体介导的吞噬作用材 料原代巨噬细胞或巨噬细胞株（单 元 6.1 和 8. 5)R P M I -5 完 全 培 养 基（或其他培养基）绵 羊 红 细 胞（S R B C ) ，用 Alsever 溶 液 I : I (V /V ) 稀 释（附 录 1)生理盐水： 0. 9
单－链－抗－体－的－噬－菌－体－展－示－技－术
实验步骤 基 本 方 案 1 全套单链抗体噬菌体载体的构建材 料新鲜分离的小鼠脾脏或者 IO7 杂 交 瘤 细 胞（单 元 1*3)R N A 提取试剂R T -P C R 试剂D E P C 水寡 核 苷 酸 引 物（表 14. 3.1)DNA marker琼脂糖胶回收试剂盒（Qiaquick G
养阴清肺丸能治便秘
养阴清肺汤本是一个治疗阴虚燥咳的经典方剂，如今开发成丸剂、颗粒剂、口服液等剂型，常用于治疗咳嗽。从中医角度来讲，这个老药还有新的用途——治疗便秘。 说明书功效上显示，养阴清肺丸的功效是“养阴润肺，清热利咽。用于咽喉干燥疼痛，干咳、少痰或无痰”，并没有提到便秘。但是，从中医理论讲，肺与大肠相表里
女性上腹不适病例分析
患者女，12岁，1周前无明显诱因出现右上腹不适，伴发热，体温最高39.0℃，给予口服抗生素（具体不详）后症状有所减轻，但仍间断性发热。6小时前右上腹疼痛加重，呈绞痛并向右肩及背部放射，同时出现高热，体温39.5℃。否认肝炎、结核病史。体检：腹部柔软，右上腹压痛阳性，无反跳痛及肌紧张，肝区叩痛阳性。
免－疫－球－蛋－白－M(IgM)和－免－疫－球－蛋－白－D(IgD)－的纯化
实验步骤基 本 方 案 1 用透析和凝胶过滤层析法纯化 IgM此 法 纯 化 的 IgM 可达到较好纯度，可用于酶解、异 硫 氰 酸 盐 荧 光 素（FITC) 标记 、生物素标记或放射性标记。材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)腹 水 或 单 克 隆 抗 体（MAb) 上 清（单 元 1.4)
免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白D(IgD)－的纯化
基 本 方 案 1 用透析和凝胶过滤层析法纯化 IgM此 法 纯 化 的 IgM 可达到较好纯度，可用于酶解、异 硫 氰 酸 盐 荧 光 素（FITC) 标记 、生物素标记或放射性标记。材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)腹 水 或 单 克 隆 抗 体（MAb) 上 清（单 元 1.4)PBSS
树突细胞的分离实验（二）
1.将2 管 I m l 的 4000U /m l 胶 原 酶 D 稀 释（足够用于2 0 个脾脏）： Im l 加 入 9m l H B S S(稀 释 至 400U /m l ，步 骤 8 使用）， I m l 加 入 39m l 的 H B S S (稀 释 至 100U /ml)。置
养阴清肺糖浆的注意事项
1.忌烟、酒及辛辣食物。 2.痰湿壅盛患者不宜服用，其表现为痰多粘稠，或稠厚成块。 3.风寒咳嗽者不宜服用，其表现为咳嗽声重，鼻塞流清涕。 4.有支气管扩张、肺脓疡、肺心病的患者及孕妇，应在医师指导下服用。糖尿病患者服用前应向医师咨询。 5.服用三天，症状无改善，应去医院就诊。 6.按照用法用量
T－细－胞－克－隆－的－建－立
实验步骤基本方案 1 产生和维持同种反应性 T h 和 CTL 克隆尽管同种反应性 T 细胞可以从未刺激的脾细胞或淋巴结细胞中产生，但如果细胞在初次混合淋巴细胞（M L C ) 中第一次被同种抗原刺激，反应细胞的得率会更高。见以下介绍。材 料同种反应性小鼠脾脏 T 细胞V H B S S (可选使用
T细胞克隆的建立
基本方案 1 产生和维持同种反应性 T h 和 CTL 克隆尽管同种反应性 T 细胞可以从未刺激的脾细胞或淋巴结细胞中产生，但如果细胞在初次混合淋巴细胞（M L C ) 中第一次被同种抗原刺激，反应细胞的得率会更高。见以下介绍。材 料同种反应性小鼠脾脏 T 细胞V H B S S (可选使用）V D
胎弱症诊疗技术
胎儿生长受限是指孕37周后，新生儿出生体重小于2500克，或低于同孕龄平均体重的两个标准差。中医称此病为“胎萎不长”，亦称“妊娠胎萎燥”、“胎弱症”或“胎不长”。 病因病机 胎居母腹，其生长发育依赖于母体气血津液的滋养。气血不足，胎失所养是本病的主要病机。常见分型有： 肾气亏虚
寡养单胞菌属及其检验
寡养单胞菌属（Stenotrophomonas）是一个新命名的菌属，属于假单胞菌科的RNA同源群Ⅴ，只有一个菌种——嗜麦芽寡养单孢菌（S.maltophilia），此菌的名称先后有嗜麦芽假单胞菌、嗜麦芽黄单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌。1．细菌特性革兰阴性杆菌，菌体直或略弯，单个或成对排列，一端丛毛菌，有
P1克隆的定义
中文名称P1克隆英文名称P1 cloning定 义一种使用P1噬菌体载体扩增插入片段的克隆系统。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
一例上腹不适诊断分析
肝脏局灶性结节增生（focal nodular hyperplosia，FNH）是一种较少见的肝脏良性肿瘤样病变，随着影像检查技术发展，检出率日渐增多，但是直径大于10 cm的巨大FNH并不多见，尤其是有假包膜的老年男性患者更是罕见。 本文回顾分析我院近期病理证实的两例老年男性有完整假包膜的巨大FN
树突细胞的分离实验
实验步骤基 本 方 案 1 塑 料 黏 附 和E A 玫 瑰 花结 富 集DC此种技术用于分离DC已经使用了很多年，其间只经过了微小的修改（Steinman衫aZ.， 1979)材 料（带V 项 目 见 附 录 1)胶原酶消化的脾脏细胞悬液（见辅助方案）高密度牛血清白蛋白（BSA) 溶液R P M