病毒中和实验_固定抗血清-稀释病毒法
实验材料已知标准的抗病毒血清 (20抗体单位 0. 1 ml)试剂、试剂盒已知阴性血清 (56℃ 30 min 灭活)宿主:敏感细胞、敏感动物、鸡胚仪器、耗材细胞培养板水浴锅细胞培养箱实验步骤(以细胞培养为例):①用细胞维持液连续 10倍稀释病毒分离物10-1~10-8);②取 0. 6ml不同浓度的病毒稀释液与 0. 6 ml 标准的抗病毒血清混合;③再取 0.6ml 不同浓度的病毒稀释液与 0. 6 ml 已知的阴性血清混合;④将混合液置 37℃ 水浴1h, 然后取 0. 2 ml 混合液分别接种于细胞已长成单层的 96孔细胞培养板中,每一稀释度接种 5孔,设 5 孔正常细胞对照;⑤将细胞培养板置 37℃ 、 5% CO2 温箱中孵育,每日观察细胞病变效应 (CPE) 。⑥中和试验的病毒 CCID50 的计算:细胞培养中,通常是以病毒的组织半数感染量 (CCID50/单位体积)作为中和反应的终点。而动物试......阅读全文
水溶液酸碱中和法(中和法)(一)
一、定义 以酸碱中和反应为基础的容量分析法称为酸碱中和法(亦称酸碱滴定法)。二、原理 以酸(碱)滴定液,滴定被测物质,以指示剂或仪器指示终点,根据消耗滴定液的浓度和毫升数,可计算出被测药物的含量。 反应式: H+ + OH- →← H2O三、酸碱指示剂(一)指示剂的变色原理
水溶液酸碱中和法(中和法)(二)
七、滴定液的配制、标定(一)盐酸滴定液 1.配制 间接法配制 2.标定 用基准无水碳酸钠标定,以甲基红-溴甲酚绿混合指示液指示终点。(二)硫酸滴定液 1.配制 间接法配制 2.标定 照盐酸滴定液项下的方法标定。(三)氢氧化钠滴定液 1.配制 间接法配制
生化需氧量测定实验稀释培养法
实验方法原理一、测定方法的选择 1. 直接培养法:此法适用于BOD5 值不超过7mg/l 的水样。 2. 稀释培养法:当耗氧量超过水样中溶解氧时,需用配制的饱和稀释水将水样适当稀释,再测定耗氧量。一般水样BOD5 值在10mg/l 以上的采用此法。 3. 瞬时需氧量:对于含有硫化物、亚硫酸盐、
中和试验(neutralization-tests)检测应用
病毒或毒素与相应的抗体结合后,失去对易感动物的致病力,谓之中和试验。本试验主要用于:(1)从待检血清中检出抗体,或从病料中检出病毒,从而诊断病毒性传染病;(2)用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型;(3)测定抗病毒血清或抗毒素效价;(4)新分离病毒的鉴定和分型,中和试验不仅可在易感的实验
高福院士团队揭示黄热病毒E蛋白构象及病毒中和抗体5A
黄热病是由黄热病毒引起的,主要通过蚊虫叮咬传播的急性传染病。黄热病的死亡率高、传染性强,已纳入世界卫生组织规定之检疫传染病之一。黄热病可通过接种黄热疫苗(YF-17D减毒疫苗)得到预防。然而,疫苗短缺和免疫普及范围等因素导致黄热病仍然不断的出现和流行。近年来黄热病在非洲、中美洲和南美洲的热带地区
天津工生所揭示黄热病毒特异性抗体中和病毒的分子基础
黄热病是由黄热病毒引起的、主要通过蚊虫叮咬传播的急性传染病。黄热病的死亡率高、传染性强,已纳入世界卫生组织规定之检疫传染病之一。黄热病可通过接种黄热疫苗(YF-17D减毒疫苗)得到预防。然而,疫苗短缺和免疫普及范围等因素导致黄热病仍然不断出现和流行。近年来黄热病在非洲、中美洲和南美洲的热带地区时
中和试验的临床意义
本试验主要用于:①从待检血清中检出抗体,或从病料中检出病毒,从而诊断病毒性传染病;②用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型;③测定抗病毒血清或抗毒素效价;④新分离病毒的鉴定和分型,中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行,亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。试验方法主要有简单定性试验、固定血清
中和试验的临床意义
本试验主要用于:①从待检血清中检出抗体,或从病料中检出病毒,从而诊断病毒性传染病;②用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型;③测定抗病毒血清或抗毒素效价;④新分离病毒的鉴定和分型,中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行,亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。试验方法主要有简单定性试验、固定血清稀释
中和试验的临床意义
本试验主要用于:①从待检血清中检出抗体,或从病料中检出病毒,从而诊断病毒性传染病;②用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型;③测定抗病毒血清或抗毒素效价;④新分离病毒的鉴定和分型,中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行,亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。试验方法主要有简单定性试验、固定血清稀释
中和试验的临床意义
本试验主要用于:①从待检血清中检出抗体,或从病料中检出病毒,从而诊断病毒性传染病;②用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型;③测定抗病毒血清或抗毒素效价;④新分离病毒的鉴定和分型,中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行,亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。试验方法主要有简单定性试验、固定血清
病毒的培养方法实验——传代细胞培养法
实验方法原理从人及动物某些组织,特别是肿瘤组织,经多次传代可建立传代细胞系,这种细胞能无限地传代,某些传代细胞对病毒敏感范围较广,可用作病毒的分离鉴定,如HeLa 细胞,Hep-2 细胞及KB 细胞。三种细胞均来自人肿瘤组织细胞,HeLa 细胞来自子宫颈癌,Hep-2 细胞来自喉癌而KB 细胞来自上
新冠中和抗体与疫苗研发常见的病毒学研究方式中和...1
新冠中和抗体与疫苗研发常见的病毒学研究方式-中和抗体研究童话里的故事都是骗人的,但每个人心中的童话是美好的,充满着希望和期待。面对新冠病毒疫情时,正是这样的希望支撑着大家不断地坚持和奋斗。7月份以来,科学家们通过自主研发、团体合作,中和抗体药物的开发以及疫苗II期临床实验获得进一步成功,让人们更加期
新冠中和抗体与疫苗研发常见的病毒学研究方式中和...2
研究通过高通量scRNA/VDJ-seq测序,鉴定了8,558个IgG1+抗原结合克隆型,从60名康复患者中发现14种有效的SARS-CoV-2中和抗体,还用SARS-CoV-2真病毒和SARS-COV-2 VSV假病毒系统进行验证,发现其中最有效的中和抗体是BD-368-2,而且BD-368-2对
中和试验的正常值及临床意义
正常值 人体处于动态平衡、健康状态。 临床意义 本试验主要用于:①从待检血清中检出抗体,或从病料中检出病毒,从而诊断病毒性传染病;②用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型;③测定抗病毒血清或抗毒素效价;④新分离病毒的鉴定和分型,中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行,亦可在细胞培
中和试验的正常值及临床意义
正常值 人体处于动态平衡、健康状态。 临床意义 本试验主要用于:①从待检血清中检出抗体,或从病料中检出病毒,从而诊断病毒性传染病;②用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型;③测定抗病毒血清或抗毒素效价;④新分离病毒的鉴定和分型,中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行,亦可在细胞培
抗血清制备法生化检验
抗血清制备法:抗血清指含有抗体的血清。传统的抗血清制备方法是将某种抗原通过多次注入动物,数十天后或数月后,采集动物血,立即分离出血清。此抗血清在保存或应用前必须作效价和特异性鉴定及纯化。(一)免疫动物的选择免疫动物的选择基本要求:1.抗原与免疫动物的种属差异越远越好。2.动物必须适龄、健壮、无感染、
病毒RNA提取实验
病毒RNA提取可以:(1)用于RNA病毒复制机制研究;(2)用于反向遗传学研究;(3)用于分子病毒学其他研究。实验方法原理大多植物病毒RNA 为单链RNA ,并且其极性与mRNA 极性相同,植物病毒RNA 提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果。实验材料TMV病毒液试剂、试剂盒TE-饱和酚:氯
慢病毒实验程序
含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化,提取慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。 3) 培养 48hrs - 72hrs 左右,收集含有病毒的上清培养液。 4) 病毒的纯化和浓缩。 5) 分装、- 80 ℃保存。 6) 滴度测定目的基因检定,并出具检测报告。
病毒的滴定实验
1. 以维持液(0.5% 水解乳蛋白Hank's 液)将病毒作连续10 倍稀释(每一稀释度换一新吸管)。2. 如选择滴定的稀释度为l0-6~10-8,则于试管架上排列8 支试管。l0-1~10-5共5 支管,每管如入1.8 毫升维持液;l0-6~10-8共3 管,每支加入4.5
病毒的分离实验
实验步骤 标本的采集:病毒分离常用的标本有血液,脑脊液,粪便,直肠拭子,咽喉含漱液,咽拭子,尸检组织等。所取标本的种类视疾病性质而异。如呼吸道疾病常取咽喉洗液,咽拭子;消化道疾病取粪便,直肠拭子;神经系统疾病取脑脊液,粪便等。采取标本时应避免污染,有些标本如粪便,咽喉洗液,虽本身含有大量杂菌,但为保
痘苗病毒纯化实验
大规模纯化 实验方法原理 对于很多研究,部分纯化的病毒就足够了(进行到本实验步骤 14), 如果是纯化 MVA 病毒,则不能用胰酶消化,也不能用 CEF 细胞
病毒RNA提取实验
TE-饱和酚/氯仿提取法 实验方法原理 大多植物病毒RNA 为单链RNA ,并且其极性与mRNA 极性相同,植物病毒RNA 提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获
慢病毒包装实验
慢病毒载体包装之后成为假病毒颗粒后,可用于:(1)感染原代培养细胞;(2)制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株;(3)in vivo的基因操作、转基因动物,特别是转基因大鼠的制备。实验方法原理慢病毒是反转录病毒的一种,具有反转录病毒的基本结构和特性:整合入宿主细胞基因组,长期表达,可用于转基因动
病毒RNA提取实验
实验方法原理 大多植物病毒RNA 为单链RNA ,并且其极性与mRNA 极性相同,植物病毒RNA 提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果。实验材料 TMV病毒液试剂、试剂盒 TE-饱和酚:氯仿氯仿NaAc乙醇TE缓冲液双菌水仪器、耗材 冷冻台式离心机低温真空干燥仪电泳仪电泳槽实验步骤 一、实验
痘苗病毒纯化实验
实验方法原理 对于很多研究,部分纯化的病毒就足够了(进行到本实验步骤 14), 如果是纯化 MVA 病毒,则不能用胰酶消化,也不能用 CEF 细胞或 BHK-21 细胞代替 HeLa 细胞。实验材料 痘苗病毒储液HeLa S3 细胞(悬浮培养)试剂、试剂盒 胰酶Tris • Cl蔗糖仪器、耗材 旋转
慢病毒包装实验
实验材料 病毒试剂、试剂盒 无血清培养基脂质体胰酶含血清的培养基DMEM仪器、耗材 EP管6孔板CO2培养箱高速离心机-80°C冰箱实验步骤 以六孔板中的1孔为例,每个样品需要1×106个293T细胞。 1. 取1.5ml灭菌EP管,加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血
慢病毒包装实验
慢病毒包装实验 实验方法原理 慢病毒是反转录病毒的一种,具有反转录病毒的基本结构和特性:整合入宿主细胞基因组,长期表达,可用于转基因动物制备;但也有不同于反转
痘苗病毒纯化实验
痘苗病毒通常采用蔗糖密度梯度离心的方法纯化。纯化的病毒可用于制备痘苗病毒 DNA ,用于不允许存在感染细胞蛋白污染的研究中,同时也可以用作高滴度的病毒储液。对于大规模的纯化(至少 1 L 的培养物),最好的方法是用 HeLa 细胞悬液作为感染的对象,而不要用单层培养的细胞。内容来源于《精编分子生物学
病毒的保存实验
实验方法原理 含水物质首先经过冷冻,然后在真空中使水分升华,干燥,在这种低温、干燥和缺氧环境下,微生物的生长和代谢暂时停止,因而保存期较长,便于运输。该法需要冻干机等设备,并需保护剂。保护剂一般采用脱脂牛奶或血清等。保护剂的作用机理是在冷冻干燥的脱水过程中稳定病毒结构,防止细胞膜受冷冻或干燥而造成损
辉瑞BioNTech新冠疫苗可中和新冠变异病毒
《自然》发表的一篇论文报道,接种辉瑞 -BioNTech 新冠疫苗的血清中和了新的新冠变异病毒。接种两剂疫苗的人的血清中和了B.1.617.2(又称delta)变异株(首次于印度发现)和一些其他变异株,包括B.1.525(首次发现于尼日利亚)。 随着新冠病毒新变异株的出现,亟需评估现有疫苗产生