抗药性突变株的分离实验——梯度平板法
实验方法原理生物的抗药性突变是 DNA 分子的某一特定位置的结构改变所致,与药物的存在无关,某种药物的存在只是作为分离某种抗药性菌株的一种手段,而不是作为引发突变的诱导物,因而在含有一定抑制生长药物浓度的平板上涂布大量的细胞群体,极个别抗性突变的细胞会在平板上长成菌落。将这些菌落挑取纯化,进一步进行抗性试验,就可以得到所需要的抗药性菌株,抗药性突变常用作遗传标记,因而掌握分离抗药性突变株的方法是十分必要的。为了便于选择适当的药物浓度,分离抗药性突变株常用梯度平板法。本实验拟用梯度平板法分离大肠杆菌抗链霉素突变株。制备梯度平板如图所示。先倒入不含药物的底层培养基,把培养板斜放(图 1,A),凝固后将平板平放,再倒入含有链霉素的上层培养基(图 1,B),这样便可得到链霉素浓度从一边到另一边逐渐降低的梯度平板。在此平板上涂布大量敏感菌(或经诱变处理的菌株),经培养后,在链霉素浓度比较高的部位长出的菌落中可分离到抗链霉素突变株。图 1 ......阅读全文
抗药性突变株的分离实验——梯度平板法
实验方法原理生物的抗药性突变是 DNA 分子的某一特定位置的结构改变所致,与药物的存在无关,某种药物的存在只是作为分离某种抗药性菌株的一种手段,而不是作为引发突变的诱导物,因而在含有一定抑制生长药物浓度的平板上涂布大量的细胞群体,极个别抗性突变的细胞会在平板上长成菌落。将这些菌落挑取纯化,进一步进行
抗药性突变株的分离实验
实验方法原理 生物的抗药性突变是 DNA 分子的某一特定位置的结构改变所致,与药物的存在无关,某种药物的存在只是作为分离某种抗药性菌株的一种手段,而不是作为引发突变的诱导物,因而在含有一定抑制生长药物浓度的平板上涂布大量的细胞群体,极个别抗性突变的细胞会在平板上长成菌落。将这些菌落挑取纯化,进一
细菌平板划线分离培养法实验
(1)曲线划线分离法:此法多用于含菌量不多的标本或培养咽拭、棉拭所取的培养物,将标本或咽拭、棉拭培养物直接涂布于培养基的 1/5 处,然后用接种环或直接用咽拭(棉拭)作曲线连续划线接种。(2)分区划线分离法:此法多用于含菌量较多的粪便等标本的细菌分离培养。先用接种环取粪便标本,将其涂布在培养基的
细菌平板划线分离培养法实验
实验步骤(1)曲线划线分离法:此法多用于含菌量不多的标本或培养咽拭、棉拭所取的培养物,将标本或咽拭、棉拭培养物直接涂布于培养基的 1/5 处,然后用接种环或直接用咽拭(棉拭)作曲线连续划线接种。(2)分区划线分离法:此法多用于含菌量较多的粪便等标本的细菌分离培养。先用接种环取粪便标本,将其涂布在培养
染色体分离实验——甘油梯度法
实验材料染色质试剂、试剂盒甘油 染色质分离缓冲液溶液仪器、耗材JS-13 转桶式转头实验步骤1. 准备 5 份 6 ml 的 10%、20%、30%、40%、50%(v/v)甘油/染色质分离缓冲液溶液。2. 用 JS-13 转桶式转头在 4℃,1000 r/min 离心 50 分钟进行染色质梯度沉降
染色体分离实验——Percoll梯度法
实验材料染色质试剂、试剂盒精胺精咪Percoll 溶液仪器、耗材聚碳酸酯离心管实验步骤1. 在体积为 10 ml 分离得到的染色质物质中加入精胺和精咪至终浓度分別为 0.8 mmol/L 和 2 mmol/L。2. 加入 10 ml Percoll 溶液,匀浆分离得到的染色质。Percoll 溶液:
微生物分离纯化实验——平板划线分离法
实验方法原理该方法操作简便,普通用于微生物的分离与纯化。其基本原理包括两方面:1. 选择适合于待分离微生物的生长条件,如营养、酸碱度、湿度和氧等要求或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长,而抑制其他微生物生长的环境,从面淘汰一些不需要的微生物。2. 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个
染色体分离实验——蔗糖梯度纯化法
实验材料染色质粗品试剂、试剂盒蔗糖分离缓冲液仪器、耗材聚碳酸酯离心管实验步骤1. 准备两种 18ml,浓度分别为 20% 和 60% 的蔗糖分离缓冲液(聚胺,水相或己二醇法的缓冲液),然后以线性形式加到一 50 ml 的聚碳酸酯离心管中,用梯度生成器形成沿离心管的密度梯度。2. 将染色质粗品溶液轻轻
泡菜中乳酸菌分离实验——涂布平板法
乳酸菌都是一些兼厌氧菌,革兰氏阳性,杆状或球状,无芽孢,不运动,分解和合成能力较差,营养要求较高,需提供丰富的肽类、氨基酸和维生素,它们缺乏呼吸链成分、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶,在琼脂培养基表面或内层只形成较小的白色或淡色菌落。本实验是使用涂布平板法在番茄汁碳酸钙琼脂培养基上分离出泡菜中的有关乳酸
微生物分离纯化实验——稀释涂布平板法
实验方法原理该方法操作简便,普通用于微生物的分离与纯化。其基本原理包括两方面:1. 选择适合于待分离微生物的生长条件,如营养、酸碱度、湿度和氧等要求或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长,而抑制其他微生物生长的环境,从面淘汰一些不需要的微生物。2. 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个
线粒体分离实验—用蔗糖密度梯度法纯化线粒体
实验材料线粒体悬液试剂、试剂盒蔗糖溶液Tris-HClEDTA仪器、耗材Bockman SW28 号转头实验步骤1. 在用于 Bockman SW28 号转头(或与其等同的产品)的 Uitradear 离心管中,小心地在 15 ml 1.5 mol/L 的蔗糖溶液上加一层 15 ml 1.5 mol
密度梯度细胞分离法
实验方法原理 制备密度梯度液,通过密度梯度液离心细胞,收集各梯度组分,用培养基稀释,培养细胞。实验材料 D-PBS0.25%胰蛋白酶仪器、耗材 生长培养基生长培养基+20% Percoll25ml离心管注射器或梯度收集器24孔培养板折光仪或密度计低速离心机实验步骤 通过下述方法之一制备密度梯度液:(
密度梯度细胞分离法
实验方法原理 制备密度梯度液,通过密度梯度液离心细胞,收集各梯度组分,用培养基稀释,培养细胞。 实验材料 细胞样品
密度梯度细胞分离法
实验方法原理制备密度梯度液,通过密度梯度液离心细胞,收集各梯度组分,用培养基稀释,培养细胞。实验材料细胞样品试剂、试剂盒D-PBS0.25%胰蛋白酶仪器、耗材生长培养基生长培养基+20% Percoll25ml离心管注射器或梯度收集器24孔培养板折光仪或密度计低速离心机实验步骤通过下述方法之一制备密
密度梯度细胞分离法
实验方法原理 制备密度梯度液,通过密度梯度液离心细胞,收集各梯度组分,用培养基稀释,培养细胞。 实验材料 细胞样品
稀释法平板法分离土壤中的微生物
目的1.了解稀释法分离土壤微生物的原理。2.学习并掌握由土壤分离细菌和真菌的方法。3,掌握有目的分离有益微生物的原理和技术。原理土壤是微生物栖居的大本营,各种各样的微生物都杂居在一起。当我们需要某种微生物时,即可通过提供适宜的营养条件,或添加只利于所需菌生长而抑制其它菌生长的抑制剂,有选择地将所需菌
稀释法平板法分离土壤中的微生物!
稀释法平板法分离土壤中的微生物! 一、目的 ⒈了解稀释法分离土壤微生物的原理。 ⒉学习并掌握由土壤分离细菌和真菌的方法。 ⒊掌握有目的分离有益微生物的原理和技术。 二、原理 土壤是微生物栖居的大本营,各种各样的微生物都杂居在一起。当我们需要某种微生物时,
Percoll梯度法染色实验
实验材料:染色质试剂、试剂盒:精胺、精咪、Percoll、溶液仪器、耗材:聚碳酸酯离心管实验步骤:1. 在体积为 10 ml 分离得到的染色质物质中加入精胺和精咪至终浓度分別为 0.8 mmol/L 和 2 mmol/L。2. 加入 10 ml Percoll 溶液,匀浆分离得到的染色质。Perco
蔗糖梯度纯化法实验
实验材料:染色质粗品试剂、试剂盒:聚碳酸酯离心管仪器、耗材:Dounce 匀浆器实验步骤:准备两种 18ml,浓度分别为 20% 和 60% 的蔗糖分离缓冲液(聚胺,水相或己二醇法的缓冲液),然后以线性形式加到一 50 ml 的聚碳酸酯离心管中,用梯度生成器形成沿离心管的密度梯度。2. 将染色质粗品
甘油梯度法染色实验
实验材料:染色质试剂、试剂盒:甘油、染色质、分离缓冲液溶液仪器、耗材:JS-13 转桶式转头实验步骤:准备 5 份 6 ml 的 10%、20%、30%、40%、50%(v/v)甘油/染色质分离缓冲液溶液。2. 用 JS-13 转桶式转头在 4℃,1000 r/min 离心 50 分钟进行染色质梯度
温度敏感型和渗透压敏感型突变株的分离和鉴别实验
营养缺陷型、温度敏感型和渗透压敏感型突变株的分离和鉴别实验实验材料菌株(S288CD665-1A)试剂、试剂盒磷酸钠缓冲液甲基磺酸乙酯硫代硫酸钠仪器、耗材试管培养管5-FOA平板实验步骤展开
密度梯度分离法分离单个核细胞(MNCs)
试剂和材料:1. 合适的培养基或冷冻液;2. PBSA;3. Ficoll-Hypague;4. 巴氏吸管;5. 50ml离心管;实验方法:1. 将脐血样品用PBSA按1:1比例稀释;2. 将15ml Ficoll-Hypague吸入50ml离心管;3. 将30mlPBSA稀释的脐血样品缓慢地加到F
关于涂布平板法的实验方法—涂布平板的介绍
平板接种培养 平板接种培养有混合平板培养法和涂布平板培养法两种方法。 (1)混合平板培养法 :将无菌平板编上10-7、10-8、10-9号码,每一号码设置三个重复,用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-9稀释液各1ml放入编号10-9的3个平板中,同法吸取10-8稀释液各lml放入编号10-8的3
自养微生物的硅胶平板分离法介绍
(1)制取硅胶平板 取等体积的盐酸(HC1比重1.09)和硅酸钠(比重1.10)溶液,徐徐加入,缓慢混合,均匀搅拌,分装于100-00 m1透析袋中.水中透析48h,其间换蒸馏水6—8次,待透析袋内的硅酸纳溶液无色透明后,高压蒸汽灭菌或过滤除菌。灌浇硅胶平板时,注意无菌操作技术,分别吸取预先配制
平板划线法的实验操作步骤介绍
1.融化培养基:牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入水浴中加热至融化。 2.倒平板:待培养基冷却至50℃左右,按无菌操作法倒2只平板(每皿约15m1),平置,待凝固。 倒平板的方法:右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边,用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拨出,试管或瓶口保持对着火焰;然后用右手手掌边缘或小指
平板划线分离的方法
1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法
水中细菌总数的测定实验——平板计数法
实验方法原理本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多,它们对营养和其他生长条件的要求差别很大,不可能找到一种培养基在一种条件下,使水中所有的细菌均能生长繁殖,因此,以一定的培养基平板上生长出来的菌落,计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。实
IPD分离株耐药现状
由于患儿就诊或住院时常已经使用抗生素等原因,我国儿科侵袭性标本分离病原菌阳性率很低,相关研究也很少。 在八地监测中,有31株肺炎链球菌侵袭性疾病(IPD)分离株,青霉素的中介率/耐药率为17.2%/55.2%,最大青霉素MIC值为4μg/ml;对阿莫西林-克拉维酸、头孢克洛、头孢曲松的
平板划线分离法是连续划线还是分区划线?
平板划线分离法包括连续划线和分区划线。平板划线分离法:在被检标本中,常混杂有多种细菌,平板划线分离法可使这多种细菌在培养基表面分散生长,各自形成菌落,以便根据菌落的形态及特征,挑选单个菌落进行纯培养。常用的平板划线分离法有以下两种:(1)连续划线分离法:此法主要用于杂菌不多的标本。用接种环取标本少许